erythromyces su-n-demethylase ( ERND )طقم اختبار النشاط

طريقة تتبع 100T/48S

يجب أن تؤخذ قبل التصميم الرسمي 2-3 توقعات الطقس من عينة كبيرة مع توقع الفرق .تحديد المعنى :

السيتوكروم P450 الإنزيمات هي مجموعة من الإنزيمات التي توجد أساسا في الكبد .تلعب دورا هاما . ERND فيP450 في نظام الإنزيمCYP2B السلالة التي ترتبط ارتباطا وثيقا demethylation المخدرات الأيض . CYP2B امتلكهذا الاختراع يمكن أن تحفز الركيزة على شكل المستقلب الذي هو غير نشط و من السهل أن تفرز .CYP2B الأيض التنشيط .

مبدأ القياس :

إيرندالفورمالديهايد الافراج عن طريق تحفيز erythromyces سومحتوى الفورمالديهايد يتحدد ناش اللونية . إيرند 活性。

erythromycete su-n-demethylase النشاط عدة P450

تكوين

كاشف واحد : مسحوق * 1 قارورةحفظ . قبل إضافة100 مل الماء المقطر يذوب .

الكاشف الثالث : مسحوق * 1 أنبوب ، 4حفظ . قبل إضافة1 مل من الماء المقطر ، يذوب تماما .الكاشف الرابع : مسحوق * 1 قارورةحفظ . قبل إضافة0.5 مل الماء المقطر يذوب تماما .الكاشف الخامس : مسحوق * 1 قارورةحفظ . قبل الاستخدام ، إضافة الماء المقطر4.5ml يذوب تماما .

معيار سائل : سائل قارورةحفظ . قبل استخدام1.5 مل EP أنبوب 10 ميكرولترالسائل القياسية ، بالإضافة إلى الماء المقطر هو 0.05 ملمول / لتر .معيار جيا ألدهيد الحل℃保存。

معايير محددة من المنتجات تخضع المعايير الواردة في مواصفات المنتج

المعدات واللوازم :

أجهزة الطرد المركزي العادية ، أجهزة الطرد المركزي السرعة الزائدة ، قابل للتعديل بندقية ماصة ، مرئية طيفي / enzyme-labeller microquartz اللونية / 96 لوحة المسام ، والتقطيرالماء والجليد .

استخراج انزيم الخام :

وإزالة نواة الميتوكوندريا وغيرها من المواد الجزيئية :دعوة حول 0.5g الانضمام إلى منظمة 1 مل كاشف واحد ، كامل طحن على الجليد ، 10 000g منقلب . 30min， تأخذ طاف ونقله إلى أنبوب الطرد المركزي .

والميكروسومي الخشن100 000g，4الطرد المركزي60min， التخلص من طاف .

وإزالة الشوائب مثل الهيموجلوبين :نحو خطوة 2 إضافة إلى هطول الأمطار 1 ملكاشف واحد ، بعد تغطية كاملة من التذبذب حل 100000gطرد مركزي 30min， مهجور

طاف .

والميكروسومي النهائينحو خطوة 3 إضافة الكاشف الثاني 0.5ml， حل كامل من الاهتزاز ، وهذا هو ، الخام انزيم السائل ، تحتاج إلى اختبار . السائل يجب أن تستخدم في نفس اليوم .

تحديد العمليات :

1. طيفيجهاز التسخين 30 دقيقةضبط الطول الموجي 412 nm， الماء المقطر صفر .

2. الكاشف الثاني 37التسخين في حمام مائي30 دقيقةمنتدى

3. الرعاية取 0.5 مل إيب أنبوب10 ميكرولتر الخام حل بالإنزيم ، 170 الكاشف الثاني ، 10 ميكرولتر الكاشف الثالث ، 10 ميكرولتر الماء المقطر ، مختلطة جيدا37℃حمام الماء العزل الحراري 30 دقيقةالانضمام فورا 35 ميكرولتركاشف 5 ، مختلطة جيدا في حمام الثلج 5 دقائق؛ 取出بعد إضافة 35 μ ل كاشف ستة ، مختلطة في درجة حرارة الغرفة

موقف ثابت 5 دقايقدرجة حرارة الغرفة 8000 دورة في الدقيقةطرد مركزي 5min； الجيش الشعبي الجديدأنبوب 100 ميكرولتر طاف ، 100 ميكرولتر كاشف سبعة ، بعد خلط حمام مائي10min， ثم أخرج، يبرد بالماء البارد 5 دقايقفي 412 نانومترقياس امتصاص الضوءالرعاية .

4. تحديد أنبوب :取 0.5 مل إيب أنبوب10 ميكرولتر الخام حل بالإنزيم ، 170 الكاشف الثاني ، 10 ميكرولتر الكاشف الثالث ، 10 ميكرولتر الكاشف الرابع ، بعد خلط37℃

حمام الماء العزل الحراري 30 دقيقةالانضمام فورا 35 ميكرولتركاشف 5 ، مختلطة جيدا في حمام الثلج5 دقائق؛ 取出بعد إضافة 35 μ ل كاشف ستة ، مختلطة في درجة حرارة الغرفةموقف ثابت 5 مترinدرجة حرارة الغرفة 8000 دورة في الدقيقةطرد مركزي 5 مترفيجلب جديدة إيبأنبوب طافو100 ميكرولتر كاشف سبعة ، بعد خلط 60حمام مائي10min， ثم أخرج، يبرد بالماء البارد 5 دقايقفي 412 نانومترقياس امتصاص الضوءتحديد أنبوب .

5. أنبوب القياسية :取 0.5 مل EPأنبوب 100 ميكرولترمعيار المنتج ، 100 ميكرولتر كاشف سبعة ، بعد خلط 60حمام مائي10min， ثم أخرجهمع البرد

تبريد المياه 5 دقايقفي 412 نانومتر قياس امتصاص الضوءA أنبوب القياسية .

ملاحظة : كل عينة تحتاج إلى عناية .

إيرند صيغة النشاط :

أ.الصيغة الحسابية لتحديد أثر الكوارتز اللونية طبق على النحو التالي

(1).حسب تركيز البروتينس

تعريف الوحدة النشطة : 371nmol في الدقيقة الواحدة من البروتين المحفزالفورمالديهايد 1 . وحدة نشاط انزيم

إيرند النشاط ( nmol / دقيقة / ملغ )prot) = ج المعيار الخامس معيار المنتجس(أ) تحديد أنبوب رعايةو÷أ أنبوب القياسية * تخفيف متعددةم(Cpr × V)

عينة(÷T)

س45 × A تحديد أنبوب على الرعاية معيار أنبوب ÷ CPRمنتدى

(2).حسب نوعية العينةس

تعريف الوحدة النشطة : 37في درجة مئوية ، 1nmol تتولد في الدقيقة لكل غرام من العينة .الفورمالديهايد 1 . وحدة نشاط انزيم

إيرند النشاط ( nmol / دقيقة / ز ) الوزن الطازج = ج المعيار الخامس المنتجات القياسية * ( أ ) تحديد أنبوب على الرعاية أنبوب القياسية * تخفيف متعددة ( ث * ت عينة )

س45 × A تحديد أنبوب على الرعاية أنبوب القياسية÷W

جيممعيار المنتج : 0.05ممول / لتر = 50 ميكرومول / لتر؛ الخامسمعيار المنتج : 100 μ ل = 1 × 10^-4 ل ؛ تخفيف مرات : تعكس المجموع طاف = 50 + 850

50 + 50 + 175 + 175 ) 500 = 2-7 ؛ CPR : تركيز البروتين الخام ( ملغ / مل )تحتاج إلى مزيد من التصميم ، اقترح استخدام الشركةBCA

أدوات تحديد محتوى البروتين . ث : نوعية العينة ، g；V عينة : حجم 10 μ ل = 0.01 مل . ر : وقت رد الفعل الحفاز(م)فيوو

30 دقيقةمنتدى

ب.استخدام الصيغة الحسابية لتحديد لوحة المسام هي كما يلي

(1).حسب تركيز البروتينس

تعريف الوحدة النشطة : 371nmol في الدقيقة الواحدة من البروتين المحفزالفورمالديهايد 1 . وحدة نشاط انزيم

إيرند النشاط ( nmol / دقيقة / ملغ )prot) = ج المعيار الخامسمعيار المنتجس(أ) تحديد أنبوب رعايةو÷أ أنبوب القياسية * تخفيف متعددةم(Cpr × V)

عينة(÷T)

س45 × A تحديد أنبوب على الرعاية معيار أنبوب ÷ CPRمنتدى

(2).حسب نوعية العينةس

تعريف الوحدة النشطة : 37في درجة مئوية ، 1nmol تتولد في الدقيقة لكل غرام من العينة .الفورمالديهايد 1 . وحدة نشاط انزيم

إيرند النشاط ( nmol / دقيقة / ز ) الوزن الطازج = ج المعيار الخامس المنتجات القياسية * ( أ ) تحديد أنبوب على الرعاية أنبوب القياسية * تخفيف متعددة ( ث * ت عينة )

س45 × A تحديد أنبوب على الرعاية أنبوب القياسية÷W

جيممعيار المنتج : 0.05ممول / لتر = 50 ميكرومول / لتر؛ الخامسمعيار المنتج : 100 μ ل = 1 × 10^-4 ل ؛ تخفيف مرات : تعكس المجموع طاف = 50 + 850

50 + 50 + 175 + 175 ) 500 = 2-7 ؛ CPR : تركيز البروتين الخام ( ملغ / مل )تحتاج إلى مزيد من التصميم ، اقترح استخدام الشركة BCAأدوات تحديد محتوى البروتين . ث : نوعية العينة ، g；V عينة : إضافة انزيم الخام حجم 10 ميكرولتر = 0.01mlنر : وقت رد الفعل الحفاز(م)inوو 30 دقيقة.

erythromycete su-n-demethylase النشاط عدة P450