carboxylesterase )كاريوطقم اختبار النشاط

طريقة تتبع 100T/96S

يجب أن تؤخذ قبل التصميم الرسمي 2-3 توقعات الطقس من عينة كبيرة مع توقع الفرق .تحديد المعنى :

ثديياتكارياستراز الأليفاتية )أليسترازوزعت على نطاق واسع في الأنسجة والأعضاء ، تنتمي إلى عائلة سيرين هيدرولاز . . . . . . .كاريالتحلل من المواد الداخلية والخارجية التي تحتوي على استر السندات ، السندات thioester أميد السندات ، ولكن لا يمكن أن تحفز التحلل من قاعدة أسيتيل دان ونظائره .كاري المبيدات الفسفورية العضوية يمكن أن تشارك في نقل الدهون والتمثيل الغذائي ، ويرتبط مع إزالة السموم والتمثيل الغذائي العديد من الأدوية والسموم البيئية والمواد المسرطنة .كبتكارينشط .

مبدأ القياس :

كاري حمض الخليك المحفزواحدالنفثالين النفثالين استر استر تشكيل سلة صلبة اللون ؛ في 450 نانومتر معدل امتصاص الضوء ، حسابكاري نشط .

إليسا كيت carboxylesterase ( الرعاية الصحية الأولية ) النشاط

تكوين

الكاشف الثالث : مسحوقس رامي 4℃حفظ قبل استخدام 1 فرع الكاشف الثالث ، بالإضافة إلى 0.6 مل الإيثانول المطلق يذوب تماما . كاشف أربعة : مسحوقسرامي-20℃حفظ قبل استخدام 1 إضافة كمية صغيرة من الكاشف الثاني حل ؛

إعداد العمل السائل : إعداد قبل الاستخدام 1 في زجاجة الكاشف الثاني ، حل كاشف كاشف ثلاثة وأربعة تضاف على التوالي . 1 رامي , يذوب , تماما , يصفى4℃تجنب الضوء حفظ المتاحة 1 أسابيع .

معايير محددة من المنتجات تخضع المعايير الواردة في مواصفات المنتج

المعدات واللوازم :

الطيف المرئي ، الجدول الطرد المركزي ، قابل للتعديل ماصة ،1 مل الأواني الزجاجية ، هاون ، والجليد والماء المقطر .

استخراج انزيم الخام :

إعداد العينات البكتيرية والخلوية

جمع البكتيريا أو الخلايا في أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي بعد التخلص من طاف . وفقا لكل 200 البكتيريا أو الخلايا إضافة 400 ميكرولتر كاشف واحد ، بالموجات فوق الصوتية لكسر البكتيريا أو الخلايا )قوة . 20الموجات فوق الصوتية 3sفاصل عشراتتكرار 30 مرات12000g 4 ℃طرد مركزي 30 دقيقةأخذ طاف اختبار .

2التنظيم : حسب نوعية التنظيم )g) : كاشف حجم واحد(مل)في 1س5-10 نسبة )اقتراح دعوة 0.1g الانضمام إلى منظمة 1 مل ( أ ) إجراء خليط من حمام الثلج؛12000g 4 ℃طرد مركزي 30 دقيقةأخذ طاف اختبار .

3السائل : تحديد مباشرة

تحديد العمليات :

1. طيفيوجهاز التسخين 30 دقيقةضبط الطول الموجي 450 نانومترالماء المقطر .

2. الكاشف الثاني 37℃التسخين في حمام مائي 30 دقيقةمنتدى

3. أنابيب فارغةتتبع الزجاج طبق اللونيةس فتحة لوحة ، إضافة تباعا 5 ميكرولتر الماء المقطر 200 ميكرولتر الكاشف الثاني ، مزيج بسرعة 450 نانومتر قياسمجموعة 3 دقايقتغيير قيمة امتصاص الضوء الداخلي عشراتقيمة امتصاص الضوءA1， 第 190sقيمة امتصاص الضوءA2منتدىدلتاAأنبوب فارغ= A2-A1

4. تحديد أنبوب :تتبع الزجاج طبق اللونيةس فتحة لوحة ، إضافة تباعا 5 ميكرولتر طاف 200 ميكرولتر الكاشف الثاني ، مزيج بسرعة 450 نانومتر قياس

مجموعة 3 دقايق تغيير قيمة امتصاص الضوء الداخلي عشرات قيمة امتصاص الضوءA3， 第 190s قيمة امتصاص الضوءA4منتدىدلتاA تحديد أنبوب=A4-A3

ملاحظة : فارغة أنبوب يحتاج فقط إلى قياس مرة واحدة .

كاري صيغة النشاط :

أ.الصيغة الحسابية لتحديد أثر الكوارتز اللونية طبق على النحو التالي

1في المنظمةكاري نشط

（1）حسب تركيز البروتين

كاري تعريف الوحدة النشطة : لكلملغ نسيج البروتين 37℃زيادة امتصاص الضوء الحفاز في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل 1 تعريف 1 نشاط انزيم وحدة .

كاري نشاط انزيم(U / ملغ) بروتمدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغو× V عكس مجموع÷ (Cpr × V) عينة÷T

س13.67 * )دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷Cpr

（2）حساب الوزن الطازج حسب العينة

كاري تعريف الوحدة النشطة : لكلg تنظيم 37℃زيادة امتصاص الضوء الحفاز في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل 1 تعريف 1 نشاط انزيم وحدة .

كاري نشاط انزيم(U / غ) الوزن الطازجمدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغو× V عكس مجموعس( أ )V مجموع العينة÷V عينةو÷W÷T

* 13.67 )دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷W 2البكتيريا أو الخلاياكارينشط

كاري تعريف الوحدة النشطة : لكل 1 عشرة آلاف البكتيريا أو الخلايا في 37℃زيادة امتصاص الضوء الحفاز في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل 1 تعريفكاري حي .

وحدة الجنس .

كاري نشاط انزيم(U/10⁴ الخليةمدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغسV عكس مجموعس( أ )V مجموع العينة÷V عينة (مكثافة الخلية )10⁴ الخلية / ملو

÷T = 13.67×(دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغمكثافة الخلية )10⁴ الخلية / ملو 3في السائلكارينشط

كاري تعريف وحدة النشاط : لكل ملليلتر من العينة في 37℃زيادة امتصاص الضوء الحفاز في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل 1 تعريف 1 نشاط انزيم وحدة .

كاري نشاط انزيم(U / مل) مدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغو× V عكس مجموع÷V عينة÷T

* 13.67 )دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغو

V عكس مجموع : مجموع حجم نظام رد الفعل ،205μl = 2.05 × 10^-4LنV مجموع العينة : مجموع حجم طاف ،1 ملنV عينة : إضافة حجم طاف(مل)و

0.005 ملنسي بي آرتركيز البروتينملغ / ملنWجودة العينة )g) ;Tزمن رد الفعل )دقيقةو3 دقايقمنتدى

ب.استخدام 96 الصيغة الحسابية لتحديد فتحة لوحة على النحو التالي

1في المنظمةكاري نشط

（3）حسب تركيز البروتين

كاري تعريف الوحدة النشطة : لكلملغ نسيج البروتين 37℃زيادة امتصاص الضوء الحفاز في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل 1 تعريف 1 نشاط انزيم وحدة .

كاري نشاط انزيم(U / ملغ) بروتمدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغو× V عكس مجموع÷ (Cpr × V) عينة÷T

س13.67 * )دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷Cpr

（4）حساب الوزن الطازج حسب العينة

كاري تعريف الوحدة النشطة : لكلg تنظيم 37℃زيادة امتصاص الضوء الحفاز في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل 1 تعريف 1 نشاط انزيم وحدة .

كاري نشاط انزيم(U / غ) الوزن الطازجمدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغسV عكس مجموعس( أ )V مجموع العينة÷V عينةو÷W÷T

* 13.67 )دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷W 2البكتيريا أو الخلاياكارينشط

كاري تعريف الوحدة النشطة : لكل 1 عشرة آلاف البكتيريا أو الخلايا في 37℃زيادة امتصاص الضوء الحفاز في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل 1 تعريفكاري حي .

وحدة الجنس .

كاري نشاط انزيم(U/10⁴ الخليةمدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغو× V عكس مجموعس( أ )V مجموع العينة÷V عينة (مكثافة الخلية )10⁴ الخلية / ملو

÷T = 13.67×(دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغمكثافة الخلية )10⁴ الخلية / ملو

3. السائل فيكاري نشط

كاري تعريف وحدة النشاط : لكل ملليلتر من العينة في 37℃زيادة امتصاص الضوء الحفاز في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل 1 تعريف 1 نشاط انزيم وحدة .

كاري نشاط انزيم(U / مل) مدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغو× V عكس مجموع÷V عينة÷T

* 13.67 )دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغو

V عكس مجموع : مجموع حجم نظام رد الفعل ،205μl = 2.05 × 10^-4LنV مجموع العينة : مجموع حجم طاف ،1 ملنV عينة : إضافة حجم طاف(مل)و

0.005 ملنسي بي آرتركيز البروتينملغ / ملنWجودة العينة )g) ;Tزمن رد الفعل )دقيقةو3 دقايقمنتدى

إليسا كيت carboxylesterase ( الرعاية الصحية الأولية ) النشاط