سيتوكرومب5( أ )سيتوكروم ب5وتحديد محتوى عدة

طريقة تتبع 100T/96S

يجب أن تؤخذ قبل التصميم الرسمي 2-3 توقعات الطقس من عينة كبيرة مع توقع الفرق .تحديد المعنى :

سيتوكرومP450 الإنزيمات هي مجموعة من الإنزيمات التي توجد أساسا في الكبد و تلعب دورا هاما في استقلاب المواد الأجنبية ، ولا سيما المخدراتالسموم الأيض . سيتوكروم P450 سيتوكرومب5 نعمP450 اثنين من البروتينات الهيم في نظام الإنزيم P450 النشاط الأيضيالجنس هو وثيق الصلة .

مبدأ القياس :

سيتوكروم الأكسدة ب5 بعد التخفيض ، في 424 نانومتر أقصى امتصاص الذروة . 424 نانومتر و 490 نانومتر الفرق في امتصاص الضوءخارجسيتوكرومب5المحتوى .

السيتوكروم ب 5 طقم إليسا

تكوين

كاشف واحد : مسحوقس قارورة4℃حفظ . قبل استخدام كل زائد 100 مل الماء المقطر يذوب تماما .

إعداد سائل العمل :

إعداد قبل الاستخدام ، وارتداء القفازات القابل للتصرف ، بعناية فتح زجاجة الكاشف ثلاثة ، إضافة الكاشف الثاني 20 مل حل كامل4℃تجنب الضوء يمكن حفظها 1 أسابيع .

معايير محددة من المنتجات تخضع المعايير الواردة في مواصفات المنتج

المعدات واللوازم :

العام الطرد المركزي ، الطرد المركزي السرعة الزائدة ، قابل للتعديل بندقية ماصة ، الأشعة فوق البنفسجية الإجاروenzymic جهاز قياس الألوان ، تتبع الزجاج طبقس فتحة لوحة تبخيرالماء المقطر .

السيتوكروم في عينات ب5 استخراجس

1、إزالة نواة الميتوكوندريا وغيرها من المواد الجزيئية :دعوة حول 0.5g الانضمام إلى منظمة 1 مل كاشف واحد ، وطحن تماما على الجليد ،10 000g 4℃بعيداقلب . 30 دقيقةثم أخذ طاف ونقله إلى أنبوب الطرد المركزي .

2、الميكروسومي الخشن100 000gو4℃طرد مركزي 60 دقيقةتجاهل طاف .

3、إزالة الشوائب مثل الهيموجلوبين :نحو خطوة 2 إضافة إلى هطول الأمطار 1 مل كاشف واحد ، بعد تغطية مغلقة تماما يهز حل ،100 000g طرد مركزي 30 دقيقةمهجورطاف .

4、السائل تحت الاختبار :نحو خطوة 3 إضافة الكاشف الثاني 0.5 ملبعد تغطية مغلقة ، كامل الاهتزاز حل ، وهذا هو ، السائل إلى اختبار ، اختبار السائل في نفس اليوم .

سيتوكروم ب5 عملية تحديد المحتوى :

1. طيفيوجهاز التسخين 30 دقيقةمنتدى

2. وضع سائل العمل 25℃التسخين في حمام مائي 30 دقيقةمنتدى

3. أنابيب فارغة取 1 مل زجاج طبق اللونية ، إضافة 10 ميكرولتر الماء المقطر200 ميكرولتر العامل السائل في درجة حرارة الغرفة 2 دقيقةو424 نانومتر و 490 نانومتر شفطقيمة الضوء424 نانومتر قيمة امتصاص الضوءA أنبوب فارغ 1و490 نانومتر قيمة امتصاص الضوءA أنبوب فارغ 2منتدىدلتاA أنبوب فارغسA أنبوب فارغ 1-A فارغ .أنبوب أبيض 2

4. تحديد أنبوب :取 1 مل زجاج طبق اللونية ، إضافة 10 ميكرولتر السائل تحت الاختبار ،200 ميكرولتر العامل السائل في درجة حرارة الغرفة 2 دقيقةو424 نانومتر و 490 نانومتر شفطقيمة الضوء424 نانومتر قيمة امتصاص الضوءA تحديد أنبوب 1و490 نانومتر قيمة امتصاص الضوءA تحديد أنبوب 2منتدى

دلتاA تحديد أنبوبسA تحديد أنبوب 1-A تحديد أنبوب 2منتدى

لاحظ: فقط جعل أنبوب فارغ .

عينة سيتوكروم ب5 صيغة حساب المحتوى :

أ.الصيغة الحسابية لتحديد أثر الكوارتز اللونية طبق على النحو التالي

（1）حسب تركيز البروتين

سيتوكرومب5 المحتويات(nmol / ملغ) بروتمدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷ (ε × د) × V عكس مجموعم( أ )Cpr × V عينةو

س122.8 * )دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷Cpr

（2）حسب نوعية العينة

سيتوكرومب5 المحتوى )nmol / غ الوزن الطازج (سدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷ (ε × د) × V عكس مجموعس( أ )V مجموع العينة÷V عينةو÷W

سسدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷W

εانخفاض سيتوكرومب5 معامل الخمودس^-6 L / nmol / سمنdأطباق اللونية الخفيفة )سمو1 سمن V عكس مجموع : مجموع حجم نظام رد الفعل ،210 ميكرولتر = 2.1 × 10^-4 Lنسي بي آرتركيز البروتين في السائل المراد قياسه )ملغ / مل( أ ) تحديد الاحتياجات الإضافية؛Vعينة : إضافة حجم السائل في نظام رد الفعل ،10 ميكرولتر = 0.01 ملنVمجموع العينة : مجموع حجم السائل تحت الاختبار ،0.5 ملنWجودة العينة )g. لا

ب.استخدام 96 الصيغة الحسابية لتحديد فتحة لوحة على النحو التالي

（1）حسب تركيز البروتين

سيتوكرومب5 المحتويات(nmol / ملغ) بروتمدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷ (ε × د) × V عكس مجموعم( أ )Cpr × V عينةو

سسدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷Cpr

（2）حسب نوعية العينة

سيتوكرومب5 المحتوى )nmol / غ الوزن الطازج (سدلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷ (ε × د) × V عكس مجموعس( أ )V مجموع العينة÷V عينةو÷W

س122.8 * )دلتاA تحديد أنبوب-دلتاA أنبوب فارغ÷W

εانخفاض سيتوكرومب5 معامل الخمودس^-6 L / nmol / سمنdس96 قطر فتحة الضوء )سمو0.5 سمن V عكس مجموع : مجموع حجم نظام رد الفعل ،210 ميكرولتر = 2.1 × 10^-4 Lنسي بي آرتركيز البروتين في السائل المراد قياسه )ملغ / مل( أ ) تحديد الاحتياجات الإضافية؛Vعينة : إضافة حجم السائل في نظام رد الفعل ،10 ميكرولتر = 0.01 ملنVمجموع العينة : مجموع حجم السائل تحت الاختبار ،0.5 ملنWجودة العينة )g. لا

السيتوكروم ب 5 طقم إليسا