حمض الفوسفاتيز )ACPوطقم اختبار النشاط

طريقة تتبع 100T/48S

يجب أن تؤخذ قبل التصميم الرسمي 2-3 توقعات الطقس من عينة كبيرة مع توقع الفرق .تحديد المعنى :

ACP التحلل من monoester الفوسفات تحت ظروف حامضية تسمى العضوية حمض الفوسفوريك .ACP تستخدم عادة في تشخيص سرطان البروستاتا .

مبدأ القياس :

في بيئة حمضية ،ACP الحفاز التحلل من p-nitrobenzene فوسفات ثنائي الصوديوم 4نيترو بنالفينول405 نانومتر خاصية امتصاص الضوء . من خلال قياسمجموعة405 نانومترزيادة معدل الامتصاصACPنشط .

حمض الفوسفاتيز ( ACP ) طقم إليسا

تكوين

المعدات واللوازم :

انزيم العلامات96 فتحة لوحة ، الجدول نوع الطرد المركزي ، حمام الماء عموم ، قابل للتعديل ماصة السائل والماء المقطر .

معايير محددة من المنتجات تخضع المعايير الواردة في مواصفات المنتج

استخراج انزيم الخام :

1. التنظيم : حسب نوعية التنظيم )g) : كاشف حجم واحد(مل)في 1س5-10 نسبة )اقتراح دعوة 0.1g الانضمام إلى منظمة 1 مل الكواشفأ ) إجراء حمام الثلج خليط ،4℃و10000gطرد مركزي 10 دقايقأخذ طاف اختبار .

2. البكتيريا أو الخلايا : حسب عدد البكتيريا أو الخلايا )10⁴ كاشف حجم واحد )ملوفي 500-1000س1 نسبة )اقتراح 500 عشرة آلافإضافة الخلايا 1 مل الكاشف الأول ) ، حمام الثلج بالموجات فوق الصوتية سحق الخلايا )قوة . 300wبالموجات فوق الصوتية 3 ثانية ، فاصل 7 مجموع الوقت 3 دقيقة) ;ثم 10000gو4℃الطرد المركزي 10 دقايقإزالة وتوضع على الجليد .

3. الدم يمكن قياسها مباشرة أو بعد تخفيف مناسب . . .

التصميم

1. جهاز التسخين 30 دقيقةضبط الطول الموجي 405 نانومترمنتدى

2. في إيب الكواشف التالية تضاف إلى أنبوب

تخلط جيدا 200µL انضمام 96 في حفرة ،405 نانومتر امتصاص الضوء قيمة كل أنبوب تم قياسها .ΔA = أ تحديد أنبوب- ألف الرعاية .

ملاحظة : كل قياس أنبوب يجب أن يكون زوج من الرعاية .

ACP حساب النشاط

منحنى القياسية y س7.3336x س0.0179نR² س0.9996نx تركيز المادة القياسية )ميكرومول / ملوy قيمة امتصاص الضوءΔAمنتدى

1. في الدمACP حساب النشاط

تعريف الوحدة النشطة :30℃في كل ملليلتر من الدم في الدقيقة 1 ميكرومول 4nitrobenzene الفينول 1 نشاط انزيم وحدة .

ACP 活力(ميكرومول / دقيقة / مل) =( أ )ΔA-0.0179و• ÷ 7.3336 × V عكس مجموع÷T÷V عينة

س 0.4545 س( أ )ΔA -0.0179و

2. في الأنسجة أو البكتيريا أو الخلايا . ACP حساب النشاط

（1）حسب تركيز البروتين

تعريف الوحدة النشطة :30℃كل ملليغرام من البروتين في الدقيقة 1 ميكرومول 4nitrobenzene الفينول 1 نشاط انزيم وحدة .

ACP 活力(ميكرومول / دقيقة / ملغ بروتمΔA-0.0179) ÷ 7.3336 سV عكس مجموع÷T÷(V) عينة× Cpr)

= 0.4545 س( أ )ΔA-0.0179و÷Cpr

（2）حسب نوعية العينة

تعريف الوحدة النشطة :30℃في غرام من الأنسجة في الدقيقة 1 م مول 4nitrobenzene الفينول 1 نشاط انزيم وحدة .

ACP 活力 (ميكرومول / دقيقة / غرام الوزن الطازج(=(ΔA-0.0179)÷7.3336 × V عكس مجموع÷T÷ (W × V) عينة÷V مجموع العينةو

س 0.4545 س( أ )ΔA -0.0179و÷W

（3）حسب عدد البكتيريا أو الخلايا

تعريف الوحدة النشطة :30℃في كل 10⁴ إنتاج البكتيريا أو الخلايا المحفزة في الدقيقة الواحدة 1 م مول 4nitrobenzene الفينول 1 نشاط انزيم وحدة .

ACP 活力(ميكرومول / دقيقة / 10⁴ الخلية) = (ΔA-0.0179) ÷ 7.3336 × V عكس مجموع÷T÷عدد الخلايا )× V عينة÷V مجموع العينةو

س0.4545 س( أ )ΔA-0.0179ومعدد الخلايا

Vعكس مجموع : مجموع حجم نظام رد الفعل )ملو1 ملن W : نوعية العينة ،gن V حجم العينة في نظام رد الفعل( أ )mlوو

0.01 ملنV مجموع العينة : استخراج حجم ،1 ملنTزمن رد الفعل )دقيقةو30 دقيقةن500: عدد الخلايا أو البكتيريا ،500 مليون

ملاحظة :

ACP غير مستقر ، لا سيما في 37℃والـ pH أكبر من 7 ولذلك ، حمض الفوسفاتيز عينات عادة ما تحتاج إلى إعداد في نفس اليوم .في عينة مصل الدم ، كل مل من المصل 10 ملغثنائي الصوديوم سيترات الهيدروجين 5 ملغبيكبريتات الصوديومالـ pHانخفض 6.5 التالية ، أو 5 ملالدم .إضافة واضحة 30%حمض الخليك الحل 2و3 قطرة 4℃حفظ 1 أسابيع .

حمض الفوسفاتيز ( ACP ) طقم إليسا