التفاعل الجزيئي التجربة : الملكية الفكرية / co-ip immunoprecipitation

أولاً - مقدمة فنية

الملكية الفكرية ( immunoprecipitation ) و ( شركة الملكية الفكرية immunoprecipitation المشارك immunoprecipitation ) هي التقنيات الرئيسية في دراسة وظيفة البروتين والتفاعل ، وتستخدم على نطاق واسع في مجال البيولوجيا الجزيئية والبيولوجيا الخلوية .

ثانياً - المبادئ التقنية

الأجسام المضادة المحددة والبروتينات المستهدفةالهدف من البروتين ( أي مستضد ) معزولة باستخدام الأجسام المضادة للكشف عن التعبير عن البروتين .و co-ip هو التحقق من التفاعل بين البروتينات على أساس الملكية الفكرية . عن طريق التقاط البروتين ( الطعم البروتين ) ، والكشف عن التفاعل البروتين ( البروتين الهدف ) التي تربط مع البروتين ،وهكذاالتخصيب محددة من البروتين الهدفوعلاوة على ذلك ، فإن البروتينات التي تتفاعل مع البروتينات المعروفة في المجمعات التي تجري دراستها .

تطبيق المشهد

• الملكية الفكرية : التخصيب انخفاض وفرة البروتين المستخدمة في تحديد الطيف الكتلي ( ip-ms ) والتحقق من خصوصية الأجسام المضادة .

• co-ip : دراسة عوامل النسخ المعقدة ، كيناز الركيزة التفاعلات والتحقق من التفاعلات المعروفة أو اكتشاف شركاء جدد ( مثل مسارات الإشارات المعقدة ) .

رابعاً - المزايا التقنية

• الملكية الفكرية : محددة للغاية ، تعتمد على الأجسام المضادة للمستضد محددة ملزمة .

• المرونة : الدعم يمكن أن تكون إما الخرز المغناطيسي ( سهلة التشغيل الآلي متوافق ) أو الاغاروز ( عالية القدرة الملزمة ) .

• شركة- الملكية الفكرية : الأصالة في الجسم الحي : دراسة التفاعل البروتين في الجسم الحي في حالة طبيعية ، يمكن أن تعكس أكثر حقيقية من البروتين التفاعل .

نوع العينة

الخلايا الطازجة ( خلايا ملتصقة / تعليق الخلايا ) ، الخلايا المجمدة ، المجمدة الأنسجة ، ليزات عينات .

عينة الطلب

• عينات من الخلايا : حوالي 5 × 10 ^ 6 ( يمكن أن تكون 2 أطباق 6 سم ، أو تعليق الخلايا المخزنة في أنابيب الطرد المركزي ، أو 2 زجاجات T25 ) ؛

• الحفاظ على الأنسجة : حوالي 40 ملغ ، حل عينة : تركيز البروتين لا يقل عن 2 ملغ / ملغ ، البروتين الكلي لا يقل عن 3 ملغ .

إعداد العينات والنقل

• عينات من الخلايا الحية : عينات جديدة يمكن توفيره من مسافة قريبة ، الطازجة عينات من الخلايا المستزرعة في طبق / t25 زجاجة / أنابيب الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عن طريق البريد السريع ( في اليوم التالي على الأكثر ) في المدينة يمكن أن يكون فلاش أو تسليمها شخصيا ، المسافة بعيدة ، يمكن أن تكون - 80 ℃ تجميد الخلايا المجمدة النقل ؛

• عينات الأنسجة و الانحلال الحراري السائل عينات : تجميد الجليد الجاف النقل في 80 ℃ . . . . . . .

ثامناً - الكواشف المطلوبة

IB الأجسام المضادة ، والملكية الفكرية الأجسام المضادة

الدورة التجريبية

1-2 أسابيع ( بدون مطياف الكتلة )

عاشراً - مسائل أخرى

بعد الكشف عن لطخة غربية / البروتين الشخصي