الجزيئية الجزيئية التجريبية التفاعل : EMSA جل الهجرة التجربة

أولاً - مقدمة فنية

EMSA التكنولوجيا ، أو التنقل الكهربائي الهلامي ، يستخدم لدراسة التفاعل بين الحمض النووي / الحمض النووي الريبي ملزمة البروتين / الحمض النووي الريبي ملزمة تسلسل .

ثانياً - المبادئ التقنية

تنقية البروتين أو الخلية استخراج الخام المحتضنة مع المسمى الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي التحقيق في غير تبديل طبيعة هلام بولياكريلاميدي الاستشراب ، والتنقل من الحمض النووي البروتين أو الحمض النووي الريبي البروتين معقدة أبطأ من غير ملزمة التحقيق ، وبالتالي تفعيل النسخ أو المنظمين من البروتين ملزمة الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي يتم الكشف عنها .

تطبيق المشهد

1 - تنظيم التعبير الجيني : تحديد موقع ملزم ملزم خصائص عوامل النسخ والحمض النووي ، ودراسة آلية تنظيم التعبير الجيني .

2 - دراسة آلية المرض : تحليل التعبير غير طبيعية من الجينات ذات الصلة بالأمراض ، واستكشاف آلية حدوث وتطور المرض .

3 - اكتشاف المخدرات المستهدفة : فحص وتحديد الحمض النووي ملزم البروتينات المرتبطة بالمرض ، وتوفير أهداف البحث والتطوير المخدرات .

4 - مسارات الإشارات : دراسة التغيرات في نشاط الحمض النووي ملزم البروتينات في مسارات الإشارات وتأثيرها على الجينات المصب .

رابعاً - المزايا التقنية

1 . عملية تجريبية بسيطة نسبيا ، وليس من الصعب على الظروف التجريبية .

2 . يمكن الكشف عن العديد من أنواع الحمض النووي جزيء حجم وهيكل ، فضلا عن مجموعة واسعة من حجم البروتين ، يمكن الكشف عن رد فعل واحد في نظام مختلف البروتينات مع مختلف جزيئات الحمض النووي ملزم .

3 . biotinylated تحقيقات مستقرة وآمنة ودقيقة عالية تقارب .

نوع العينة

الخلايا الطازجة ( خلايا ملتصقة / تعليق الخلايا ) ، الخلايا المجمدة ، المجمدة الأنسجة ، عينات من البروتين النووي أو تنقية عوامل النسخ ، بعض التجارب يمكن أن تستخدم أيضا المؤتلف البروتين التعبير .

عينة الطلب

عينات من الخلايا : حوالي 1 × 10 ^ 7 ( يمكن أن يكون 10 سم طبق ، أو تعليق الخلايا المخزنة في أنبوب الطرد المركزي ، أو 1 زجاجة T75 ) ؛

الأنسجة المجمدة : حوالي 400 ملغ .

الأنسجة النباتية : حوالي 2 غ ، البروتين النووي ، وتنقية عامل النسخ ، المؤتلف البروتين التعبير ، وما إلى ذلك : كل غشاء على الأقل 50 مل ، تركيز لا يقل عن 0.5 ملغ / مل .

إعداد العينات والنقل

الخلايا الحية : عينات من الخلايا الطازجة التي أثيرت في أطباق / t75 زجاجات / أنابيب الطرد المركزي يمكن نقلها عن طريق البريد السريع في درجة الحرارة العادية ( في اليوم التالي على الأكثر ) في أقرب وقت ممكن ، يمكن أن يكون فلاش أو تسليمها شخصيا في هذه المدينة ، بعيدا ، يمكن أن يكون - 80 ℃ تجميد الخلايا المجمدة النقل ؛

عينات الأنسجة وغيرها من عينات السائل : - 80 ℃ تجميد الجليد الجاف النقل .

ثامناً - الكواشف المطلوبة

البروتين ملزمة الأجسام المضادة المحددة أكثر من 50 مل ، تركيز أكثر من 0.5mg / ml .

الدورة التجريبية

أسبوع

عاشراً - مسائل أخرى

إذا كان هناك أي تحقيقات ، يرجى تقديم معلومات عن الحمض النووي ملزم البروتينات أو الأدب .