التفاعل الجزيئي التجربة : كليب اللك immunoprecipitation

أولاً - مقدمة فنية

CLIP (الترابط المتقاطع المناعي) 交联immunoprecipitation المشاركمن خلال الجمع بينالأشعة فوق البنفسجية يشابكو immunoprecipitation لتحليل مواقع ملزمة البروتين والجيش الملكي النيبالي التفاعل .

ثانياً - المبادئ التقنية

كليب يستخدم تقنية الأشعة فوق البنفسجية لجعل الحمض النووي الريبي الحمض النووي الريبي ملزمة البروتين ( RBP ) تساهمي crosslinked في الخلية ، ثم من خلال immunoprecipitation طريقة تخصيب الحمض النووي الريبي ملزمة محددة RBP شظايا ، ثم من خلال النسخ العكسي ، وارتفاع تدفق التسلسل وغيرها من الخطوات للحصول على الحمض النووي الريبي ملزمة مواقع RBP تسلسل المعلومات في الجسم الحي .

تطبيق المشهد

1 - دراسة التفاعل بين البروتين والجيش الملكي النيبالي : تحديد موقع ملزم الحمض النووي الريبي تسلسل البروتين محددة في الجسم الحي ، وكشف عن آلية عمل البروتين في تنظيم ما بعد النسخ .

2 - البحوث ذات الصلة بالأمراض : من خلال مقارنة RBP الحمض النووي الريبي ملزمة في حالة طبيعية و حالة المرض ، ونحن العثور على الحمض النووي الريبي ملزمة الأحداث ذات الصلة مع حدوث وتطور المرض وتنظيم الشبكات .

3 - البحث والتطوير المخدرات : توفير أهداف جديدة وآليات البحث والتطوير المخدرات للمساعدة في تطوير العقاقير التي تستهدف الحمض النووي الريبي محددة ملزمة البروتينات أو جزيئات الحمض النووي الريبي التنظيمية . . . . . . .

4 - تحليل المعلوماتية الحيوية : من خلال تحليل البيانات clip-seq المعلوماتية الحيوية ، والتنبؤ الحمض النووي الريبي ملزمة البروتين ملزمة المواقع وأنماط بناء الجيش الملكي النيبالي التنظيم الشبكة .

رابعاً - المزايا التقنية

1 - في الجسم الحي في الموقع الكشف : يمكن التقاط البروتين والجيش الملكي النيبالي التفاعل في الخلايا الحية ، تعكس حقا الحالة الفسيولوجية في الجسم الحي .

2 . عالية الدقة والدقة في تنقية : تنقية عبر ربط المجمعات مع الأجسام المضادة المحددة أو العلامات ، يمكن إزالة الحمض النووي الريبي والبروتينات ملزمة غير محددة على نحو فعال ، وتحسين موثوقية النتائج .

3 . جنبا إلى جنب مع تدفق عالية تسلسل الحمض النووي الريبي ملزمة المواقع ملزمة تسلسل RBP يمكن تحديدها على نطاق الجينوم .

نوع العينة

الخلايا الطازجة ( خلايا ملتصقة / تعليق الخلايا ) ، بعد الأشعة فوق البنفسجية عبر ربط عينات من الخلايا .

عينة الطلب

عينات من الخلايا : حوالي 1 × 10 ^ 7 ( يمكن أن يكون 10 سم طبق ، أو تعليق الخلايا المخزنة في أنبوب الطرد المركزي ، أو 1 زجاجة T75 ) ؛

عبر ربط الخلايا : 254 نانومتر ، 150 مل / سم ² الأشعة فوق البنفسجية القياسية عبر ربط الخلايا .

إعداد العينات والنقل

الخلايا الحية : عينات من الخلايا الطازجة التي أثيرت في أطباق / t75 زجاجات / أنابيب الطرد المركزي يمكن نقلها عن طريق البريد السريع في درجة حرارة الغرفة ( في اليوم التالي على الأكثر ) في أقرب وقت ممكن .

بعد يشابك ، عينات من الخلايا تم نقلها بواسطة الثلج الجاف في درجة حرارة 80 ℃ . . . . . . .

ثامناً - الكواشف المطلوبة

تم الكشف عن الأجسام المضادة باستخدام رقاقة الصف .

الدورة التجريبية

1-2 أسابيع ( بدون تسلسل )

عاشراً - مسائل أخرى

في وقت لاحق من الكشف عن اختيار RT - PCR ، الكشف عن الموقع يجب أن تكون المقدمة .