الجزيئية الجزيئية التجريبية التفاعل : سحب أسفل التجربة

أولاً - مقدمة فنية

سحب أسفل التجربةفي المختبر تقارب تنقية التكنولوجيا .

ثانياً - المبادئ التقنية

يجمد البروتين على ركيزة معينة ، مثلسيفاروسومع ذلك ، عندما يمر من خلال استخراج الخلية المصفوفة ، يجند البروتين التي يمكن أن تتفاعل مع البروتين يجمد كثف ، في حين أن " النجاسة " التي لا كثف يتدفق مع eluent . . . . . . . البروتين كثف يمكن استردادها عن طريق تغيير eluent أو عملية الاستخراج الشرط .

تطبيق المشهد

1 . التحقق من البروتين البروتين التفاعل : من خلال سحب أسفل التجربة ، إذا كان يمكن الكشف عن وجود بروتين الفريسة ، يمكننا التحقق من التفاعل بينهما .

2 - فحص البروتين غير معروف التفاعل : الطعم البروتين مع الخلية ليزات أو غيرها من خليط البروتين سحب أسفل التجربة ، ثم تحديد البروتين ملزمة ، يمكن أن الشاشة الطعم البروتين البروتين غير معروف التفاعل .

3 - دراسة تكوين مجمعات البروتين : عزل مجمعات البروتين من خلال سحب أسفل التجربة ، ثم تحديد البروتينات في المجمعات ، يمكن تحديد تكوين مجمعات البروتين .

4 - دراسة التفاعل بين البروتين والحمض النووي باستخدام الحمض النووي الريبي الحمض النووي الريبي سحب سحب سحب أسفل التكنولوجيا ، يمكن دراسة التفاعل بين البروتين والحمض النووي الريبي ، مثل عامل النسخ و المروج ، الحمض النووي الريبي ملزمة البروتين والجيش الملكي النيبالي ملزمة ، وهلم جرا .

رابعاً - المزايا التقنية

يمكن تحديد ما إذا كان الهدف من البروتين البروتين يمكن أن تتفاعل مباشرة مع الاختبار .

نوع العينة

الخلايا الطازجة ( خلايا ملتصقة / تعليق الخلايا ) ، الخلايا المجمدة ، المجمدة الأنسجة ، ليزات عينات .

عينة الطلب

عينات من الخلايا : حوالي 5 × 10 ^ 6 ( يمكن أن تكون 2 أطباق 6 سم ، أو تعليق الخلايا المخزنة في أنابيب الطرد المركزي ، أو 2 زجاجات T25 ) ؛

الأنسجة المجمدة : حوالي 40 ملغ .

عينة من الانحلال الحراري السائل : تركيز البروتين لا يقل عن 2 ملغ / ملغ ، البروتين الكلي لا يقل عن 3 ملغ .

إعداد العينات والنقل

عينات من الخلايا الحية : عينات جديدة يمكن توفيره من مسافة قريبة ، الطازجة عينات من الخلايا المستزرعة في طبق / t25 زجاجة / أنابيب الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عن طريق البريد السريع ( في اليوم التالي على الأكثر ) في المدينة يمكن أن يكون فلاش أو تسليمها شخصيا ، المسافة بعيدة ، يمكن أن تكون - 80 ℃ تجميد الخلايا المجمدة النقل ؛

عينات الأنسجة و الانحلال الحراري السائل عينات : تجميد الجليد الجاف النقل في 80 ℃ . . . . . . .

ثامناً - الكواشف المطلوبة

إذا كان البنك الدولي اختبار الأجسام المضادة المقابلة يجب أن تقدم .

الدورة التجريبية

3-4 أسابيع ( بدون مطياف الكتلة )

عاشراً - مسائل أخرى

RNA-Pull-down、DNA-Pull-down、GST-Pull-down， الأنواع و البروتينات المستهدفة يجب أن تكون على علم ، ثم لطخة غربية / البروتين الطيف تم الكشف عن التعبير عن البروتينات الانصهار في المختبر يجب أن تحسب على أساس تقييم مستقل من البروتينات المستهدفة .

في بعض التجارب ، المؤتلف البروتين يمكن أن تستخدم أيضا .

عينة الطلب

عينات من الخلايا : حوالي 1 × 10 ^ 7 ( يمكن أن يكون 10 سم طبق ، أو تعليق الخلايا المخزنة في أنبوب الطرد المركزي ، أو 1 زجاجة T75 ) ؛

الأنسجة المجمدة : حوالي 400 ملغ .

الأنسجة النباتية : حوالي 2 غ ، البروتين النووي ، وتنقية عامل النسخ ، المؤتلف البروتين التعبير ، وما إلى ذلك : كل غشاء على الأقل 50 مل ، تركيز لا يقل عن 0.5 ملغ / مل .

إعداد العينات والنقل

الخلايا الحية : عينات من الخلايا الطازجة التي أثيرت في أطباق / t75 زجاجات / أنابيب الطرد المركزي يمكن نقلها عن طريق البريد السريع في درجة الحرارة العادية ( في اليوم التالي على الأكثر ) في أقرب وقت ممكن ، يمكن أن يكون فلاش أو تسليمها شخصيا في هذه المدينة ، بعيدا ، يمكن أن يكون - 80 ℃ تجميد الخلايا المجمدة النقل ؛

عينات الأنسجة وغيرها من عينات السائل : - 80 ℃ تجميد الجليد الجاف النقل .

ثامناً - الكواشف المطلوبة

البروتين ملزمة الأجسام المضادة المحددة أكثر من 50 مل ، تركيز أكثر من 0.5mg / ml .

الدورة التجريبية

أسبوع

عاشراً - مسائل أخرى

إذا كان هناك أي تحقيقات ، يرجى تقديم معلومات عن الحمض النووي ملزم البروتينات أو الأدب .