تي العالمي الناقل مستعمرة بكر تحديد كيت

نوربولدتي العالمي الناقل مستعمرة بكر تحديد كيت

العام تي الناقل مستعمرة PCR كيت

رقم الدليل :42015

تكوين مجموعات التخزين والاستقرار :

التخزين : 20 ℃ التخزين .

معايير محددة من المنتجات تخضع المعايير الواردة في مواصفات المنتج

منتوج عرض :

مستعمرة بكر هو أسرع طريقة لتحديد ما إذا كان هناك أي استنساخ إيجابية ( بما في ذلك إدراج جزء ) بعد استنساخ تي ناقلات . ومع ذلك ، يمكن أن ينظر إليه في السوق مستعمرة بكر أدوات تحديد الهوية باستخدام T3 ، T7 أو SP6 وغيرها من ناقلات تي محددة التمهيدي ، يمكن استخدامها فقط لتحديد بعض ناقلات تي ربط إيجابية الاستنساخ . إذا كان مختلف تي الناقلين المستخدمة ، مجموعة متنوعة من أدوات تحديد الهوية تحتاج إلى شراء في وقت واحد ، مما يزيد كثيرا من تكلفة الاستخدام . هذه الشركة تستخدم تي الناقل العالمي التمهيدي لتطوير مستعمرة تي الناقل العالمي بكر تحديد عدة ، تحتاج فقط إلى شراء عدة ، يمكن أن تستخدم في السوق كل مشترك تي الناقل ( بما في ذلك pgem puc , و pbluescript سلسلة ) ربط استنساخ إيجابية الهوية . وعلاوة على ذلك ، فإن المسافة من التمهيدي من مستعمرة بكر تحديد عدة باستخدام T3 ، T7 ، أو SP6 كما التمهيدي هو قصير جدا ، وبالتالي ، عند تحديد الإدراج من حوالي 100 بي بي أو أقل جزء من التمهيدي ديمر الفرقة السلبية استنساخ استنساخ إيجابية التضخيم الفرقة هي قريبة من بعضها البعض و لا يمكن تمييزها . في كثير من الأحيان ، التمهيدي ديمر العصابات تعتبر إيجابية التضخيم العصابات ، مما أدى إلى إيجابية كاذبة . وعلى العكس من ذلك ، فإنه يسبب سلبية كاذبة . المسافة من العام تي الناقل التمهيدي من عدة على الأقل أكثر من 150 بي بي عندما لا يتم إدراج جزء ، بالإضافة إلى طول إدراج جزء ، يمكن أن نميز بوضوح ما إذا كانت الفرقة التي تم تضخيمها من قبل إدراج جزء أو الفرقة التي تم تضخيمها من قبل التمهيدي ديمر . فائدة نموذج يتجنب إيجابية كاذبة أو سلبية كاذبة ، وبالتالي حد كبير في تحسين دقة .نحن نطور المحمولة نظام خلط PCR MASTERMIX ، لا تحتاج إلى إضافة جميع أنواع المكونات ، إضافة مباشرة إلى الحاجة إلى فحص مستعمرة واحدة ، بعد حوالي 1 ساعة من تفاعل البلمرة المتسلسل و الكشف الكهربائي يمكن الحصول على المؤتلف مستعمرة تحديد النتائج .

شظايا التضخيم المتوقع :

ملاحظة :

1. عند تحديد المؤتلف مستعمرة ، قبل اختيار مستعمرة واحدة ، يجب أن يكون علامة جيدة ، من السهل استخدام بعد تحديد الهوية .

2. عند اختيار مستعمرة ، يجب اختيار مستعمرة واحدة ، لا اختيار الكثير من البكتيريا ، لئلا تؤثر على نتيجة PCR .

3. عند إعداد برنامج الاسترداد ، تمديد الوقت يتحدد حجم إدراج جزء ، إذا كان حجم إدراج جزء أقل من 1 كيلو بايت ، تمديد الوقت 30-45 ثانية ، إذا كان جزء أطول ، تمديد الوقت يمكن زيادة في هذه النسبة .

خطوات التشغيلmlعلى سبيل المثال ، يمكن للعملاء أيضا استخدام 20mlالنظام (

1. 1 × طق ماستر ميكس رد فعل السائل تحتوي على التمهيدي تم إعدادها وفقا للنظم التالية .

2.بعد مستعمرة عدد على لوحة مسطحة التي تزرع بين عشية وضحاها هو اختيار جزء من مستعمرة واحدة تضاف إلى رد فعل السائل باستخدام بندقية تعقيم الرأس .

أنبوب واحد من دون مراقبة سلبية مستعمرة يمكن أن تكون أكثر ملاءمة لتحليل النتائج التجريبية .

3.وضع الاسترداد أنبوب على جهاز الدورة الدموية الحرارية والبدء في رد الفعل على النحو التالي :

94 ℃ 10 دقيقة

94 ℃ 30 ثانية

55 ℃ 30 ثانية 30-33 دورات

72 ℃ 0.5-1 دقيقة

72 ℃ 5 دقيقة

ملاحظة : تمديد الوقت حسب حجم إدراج جزء . قبل تبديل طبيعة الوقت تمتد إلى 10 دقائق ، وذلك أساسا من أجل تقسيم مستعمرة ، والإفراج عن الحمض النووي قالب .

بعد رد الفعل ، تأخذ 5-10mل مباشرة على عينة الكهربائي الكشف .

ملاحظة : إذا كان من الصعب تقسيم البكتيريا أو الشوائب أكثر سلبية كاذبة ، جرب الطريقة التالية بعد تكسير الحمض النووي الإصدار .

1. اختيار مستعمرة إضافة 50mل DD المياه ( أو 10mل دد في الماء

2. درجة 99 ، 10 دقيقة لتعطيل انزيم في السائل البكتيرية ، والإفراج عن الحمض النووي .

3. 12000rpm الطرد المركزي 1 دقيقة لإزالة شظايا الخلية .

4. بكر ، 25mنظام الاستردادmل طاف ( بداية 50mل دد ماءmل طافmل دد المياه

تي العالمي الناقل مستعمرة بكر تحديد كيت