TOPO-TA/Blunt بسيطة البرق استنساخ مجموعة

نوربولدTOPO-TA/Blunt بسيطة البرق استنساخ مجموعة

TOPO-TA مجموعة استنساخ البرق البسيطة

رقم الدليلس42212

محتوى المنتج :

شروط الحفظ :

-20تخزين12 لا تؤثر على استخدام تأثير .

وصف المنتج :

في درجة حرارة الغرفة ، تا استنساخ أو بلونت استنساخ يمكن أن تكتمل في 20 دقيقة ، مع معدل الإيجابية ما يقرب من 100 ٪ ، لا حمام الثلج ، لا صدمة الحرارة ، لا البقع الزرقاء الفرز ، ولكن أيضا ربط ما يصل إلى 10 كيلوبايت من الحمض النووي شظايا .

خطوات الاستنساخ( < 3KB جزء )س

خطوات مبسطة(≤10 كيلوبايت شظاياو إنعاش السوائل مجانا ليبل

1 ، اتصال : درجة حرارة الغرفة 5 ساعاتن

1 . اتصال : اتصال 5 دقيقةمنتدى

2 . تحويل : غرفةفاتر 5 الساعةن

2 ، تحويل : حمام الثلج 5 min， الصدمة الحرارية 1 min， على الجليد 2 دقيقةمنتدى

3 - الإنعاش : 180 دورة في الدقيقة ، 37تتأرجح الثقافة10 دقيقة طلاء لوحة .

3 ، تأخذ جميع البكتيريا السائل طلاء لوحة ، 37 ℃ مقلوب الثقافة .

خطوات التشغيل :

1. الـ PCRإعداد المنتجات :

أ. التمهيدي : التمهيدي لا يمكن الفسفرة .

ب. اختيار الإنزيمات : اختيار حسب الحاجةالحمض النووي بوليميريز ، الناقل متوافقالـ PCR المنتجA نهاية إلى نهاية .

ج. الكشف الكهربائيكمية ونوعية المنتجات PCR :

cyclophos phamide فقط الهدف الشريط ، يمكن أن تحمل على ربط رد الفعل مباشرة ، لا تحتاج إلى تنقية .

② إذا كان هناك العديد من العصابات ، فمن المستحسن لاستعادة الحمض النووي الشظايا من هلام ( dc011-100 ) ؛

إذا كان استخدام البلازميد كقالب التضخيم ، هلام الانتعاش يجب القيام به ، لأن قالب البلازميد سوف تنمو أيضا غير مستعمرة .

2. رد الاتصال :

( 1 ) درجة حرارة الغرفة ( 20 ℃ - 37 ℃ ) إنشاء نظام اتصال نظامق

الجرعة الموصى بها من إدراج أجزاء من أحجام مختلفة :

بعد إضافة الكاشف ، مزيج من أسفل الأنبوب ( أو ضربة بلطف )و، نقطة رمي الطرد المركزي لجمع جميع السوائل في الجزء السفلي من أنبوب الطرد المركزي .

( 2 ) درجة حرارة الغرفة ( 20-37 ℃ )ربط5 دقيقة . ربط المنتجات يمكن تحويلها مباشرة إلى الخلايا المستقبلة أو وضعها على الجليد .

3. التحويل والإنعاش ، لوحة المغلفة :

1）100ul الخلايا المستقبلة ، مذاب في درجة حرارة الغرفة )تقريبا .1 نفض الغبار بلطف عدة مرات لتعليق الخلايا بالتساوي .

( 2 ) انضم10ul ربط السائل ، مزيج بلطف ، في درجة حرارة الغرفة ( 20-37 ℃ )وضع5 دقائق

( 3 ) انضم500ulالتوازن إلى درجة حرارة الغرفةليبلأوسوك وسائل الإعلام ( بدون المضادات الحيوية ) ، 37℃180 دورات في الدقيقةتتأرجح الثقافة10 دقيقةمنتدى

（ملاحظة : أكبر من3 كيلوبايت متذبذبة الثقافة الوقت لفترات طويلة إلى 30-60 دقيقة ، يمكنك إضافة محول . أو باستخدام خطوات مبسطةو

( 4 ) 取200l لوحة طلاء السائل البكتيري )أمبيل تشينغ تحتوي على50-100ug/ml）， تدريب بين عشية وضحاها . من أجل الحصول على مزيد من الاستنساخ ، 4000 دورات في الدقيقة طرد مركزي1 min， إزالة جزء من supernatants والاحتفاظ بها100-150ul， ضوء مرونة تعليق البكتيريا ، تأخذ جميع البكتيريا السائل طلاء لوحة )

ملاحظة : إذا كان استخدام5ul كل عنصر هو خفض إلى النصف وفقا لنسبة استخدام مرات يمكن مضاعفة .

4. فحص وتحديد transformants :

معدل الإيجابية من المنتجات عالية جدا ، في ظل الظروف العادية ، يمكن أن تصل إلى ما تراه هو ما تحصل عليه ، طالما أنها تنمو مستعمرة طبيعية ( ليست ملوثة ) .البكتيريا ، عدد قليل جدا من transformantsوإدراج الأساسية . حتى إدراج جزء لا يتجاوز2-3 كيلوبايت الحالات التي لا يمكن تحديدهااختيار مباشرة1-2 سلالات متسلسلة .

( 1 ) مستعمرةالـ PCR الكشف : اختيار مستعمرة واحدة في 10ul الماء المعقم ، والخلط ، تأخذ 1 لتروضع25ul الـ PCR نظاممستعملبكر الاشعال أو M13 الاشعال العالمي لتحديد استنساخ إيجابية . . . . . . .

( 2 )إن m13f ( - 20 ) / m13r ( - 26 ) التمهيدي كانت متسلسلة لتحديد ما إذا كان الهدف من استنساخ .

بتوبو تا / بلونتخريطة الناقل

بتوبو تا / بلونت تسلسل الناقل

TOPO-TA/Blunt بسيطة البرق استنساخ مجموعة