كفاءة إعداد عدة خلايا مستقبلة

كفاءة إعداد عدة خلايا مستقبلة

رقم الدليل :30018

تكوين مجموعات التخزين والاستقرار :

على المدى القصير استخدام 4 ℃ لتجنب التلوث . الحفاظ على المدى الطويل - 20 ℃ لمدة سنة واحدة .

معايير محددة من المنتجات تخضع المعايير الواردة في مواصفات المنتج

منتوج عرض :

1. كفاءة إعداد عدة خلايا مستقبلةالاختراع هو تحسين على أساس التقليدية عالية الكفاءة طريقة إعداد الخلايا المستقبلة ، عملية مريحة ، وارتفاع كفاءة التحويل .

2. باستخدام هذه المجموعة ، يمكن أن تصل إلى 10 ٪ كفاءة الدولة المستقبلة⁸cfu / ميكروغرام البلازميد . كفاءة البلازميد الصغيرة هو أعلى قليلا ، في حين أن أكبر البلازميد هو أقل قليلا . كفاءة الخلايا الحساسة التي أعدتها عدة لا يمكن إلا أن تحويل البلازميد ، ولكن أيضا مناسبة جدا لتحويل المنتجات المشتركة الصدد ، وخاصة في الحالات التي تحتاج إلى تحويل شقة نهاية الصدد ، وما إلى ذلك مع ارتفاع كفاءة التحويل .

3. كاشف عدة بسيطة في العملية ، ويمكن الانتهاء من إعداد كفاءة الخلايا الحساسة فقط حوالي 60 دقيقة بعد البكتيريا مثقف .

4. كيت هو مناسبة لمعظم المشتركة كولاي ، بما في ذلك أعلى 10 ، DH5 α ، bl21 ( de3 ) ، jm109 ، tg1 hb101 , و xl-1 . . . . . . . ومع ذلك ، فإن كفاءة التحويل قد تختلف اختلافا كبيرا بين سلالات مختلفة .

5. كاشف عدة يمكن استخدامها عدة مرات ، ويمكن إعداد 100 100 ميكرولتر من الخلايا المستشعرة .

v ملاحظة :

1. جميع الكواشف والمواد الاستهلاكية والأدوات والمعدات يجب أن تكون معقمة .

2. المضادات الحيوية مجانا رطل المستخدمة في إعداد الخلايا المستشعرة . المضادات الحيوية مجانا رطل يجب أن تستخدم في 37 ℃ الثقافة بعد الصدمة الحرارية ، حتى لو كان نقل البلازميد مقاومة .

3. بعد إعداد الخلايا الحساسة ، يرجى الانتقال إلى - 70 ℃ . . . . . . .

خطوات التشغيل )يرجى قراءة الملاحظات قبل التجربة (

1. لوحة المغلفة :

من أجل الحصول على أفضل كفاءة في الدولة المستقبلة ، الجلسرين البكتيريا أو غيرها من أشكال الحفاظ على البكتيريا يجب أن تكون مغلفة رطل لوحة الثقافة بين عشية وضحاها .

2. التطعيم

رطل لوحة مع ثقافة جديدة تم الحصول عليها ، ثم العملية تتم في سوبر نظيفة الجدول . تراجع في نهاية العلوي من الملقط في 70 ٪ من الكحول ، وحرق قليلا على ضوء الكحول ، وترك نهاية الملقط معقمة . استخدام الملقط كليب معقم البلاستيك بندقية رئيس أو مسواك ، اختيار واحد من لوحة مسطحة ، ثم تراجع البلاستيك بندقية رئيس أو مسواك مع البكتيريا في الثقافة أنبوب اختبار يحتوي على 3 مل سوب أو رطل ( يجب على العميل اختيار وسائل الإعلام المناسبة لكل سلالة ) . العملية المذكورة أعلاه يمكن أن يؤديها باستخدام التطعيم الدائري ، الخ .

3. زراعة

الثقافة في 37 ℃ حوالي 250 دورة في الدقيقة بين عشية وضحاها ، وعادة ما يكون الوقت المناسب للسيطرة على الثقافة حوالي 16 ساعة . يجب أن لا تتجاوز 18 ساعة .

4. إعادة تلقيح الثقافة :

وفقا لكمية من كفاءة الخلايا المستشعرة عن الحاجة ، تلقيح ومثقف مع الطازجة ومثقف بين عشية وضحاها البكتيريا في نسبة 1 : 500 . على سبيل المثال ، 100 ميكرولتر من البكتيريا الطازجة بين عشية وضحاها كانت تزرع في 50 مل سوب أو رطل في 37 ℃ حوالي 250 دورة في الدقيقة .

5. إعداد الخلايا المستقبلة :

في ملاحظة : سرعة الطرد المركزي الطرد المركزي الوقت مهم جدا في إنتاج الخلايا المستشعرة . أفضل سرعة الطرد المركزي الطرد المركزي الوقت من أنواع مختلفة من البكتيريا المختلفة ، وينبغي أن يكون الأمثل وفقا للظروف المحددة . أفضل حالة هي السرعة المناسبة و الطرد المركزي الطرد المركزي الوقت للسماح للبكتيريا فقط هطول الأمطار ، ولكن أيضا لا يمكن أن تكون قريبة جدا ، وإلا من الصعب إعادة تعليق ، فقط يمكن أن يكون من الصعب إعادة تعليق ضربة ، وسوف يسبب ضررا على الخلايا ، مما يؤثر على كفاءة التحويل .

( 1 ) عندما تصل إلى حوالي 0.5 od600 البكتيريا مثقف ، مثقف البكتيريا السائل يوضع في حمام الثلج و يبرد لمدة 15 دقيقة . ملاحظة : جميع العمليات اللاحقة يجب أن تتم في 4 درجات أو حمام الثلج .

( 2 ) 4 ℃ ( الطرد المركزي يجب أن تكون مبردة مسبقا ) 3000-3500g الطرد المركزي لمدة 5 دقائق لجمع البكتيريا ، والتخلص من طاف ( قدر الإمكان إزالة نظيفة طاف ، وبقايا أقل قدر ممكن ) .

( 3 ) إذا كانت كمية البكتيريا قبل الطرد المركزي هطول هو 50 مل ، ثم يتم إجراء العملية التالية ، إذا كان حجم آخر ، ثم يتم إجراء العملية التالية بعد التحويل النسبي .

( 4 ) إعداد الحل مع 10 مل precooling كفاءة عالية في الدولة المستقبلة بلطف إعادة تعليق البكتيرية هطول ( من أجل راحة تعليق الثقيلة ، يمكنك إضافة كمية صغيرة من الحل ، تعليق الثقيلة ثم إضافة بقية الحل ) ، ضربة تعليق الثقيلة يجب أن تكون لينة جدا ، وإلا فإن تأثير سوف تتأثر .

( 5 ) حمام الثلج لمدة 15 دقيقة .

( 6 ) 4 ℃ ( الطرد المركزي يجب أن تكون مبردة مسبقا ) 3000-3500g الطرد المركزي لمدة 5-7 دقائق لجمع البكتيريا والتخلص من طاف .

( 7 ) 2 مل من precooled كفاءة عالية في حالة حساسة لإعداد الحل ب برفق تعليق الثقيلة البكتيرية هطول . ضربة ثقيلة معلقة دائما يجب أن تكون لينة جدا ، أو أنها سوف تؤثر على النتائج .

( 8 ) حمام الثلج لمدة 15 دقيقة .

( 9 ) حمام الجليد يمكن أن تكون معبأة في 50-200 ميكرولتر / أنبوب حسب الحاجة .

( 10 ) على الفور استخدام أو استخدام النيتروجين السائل أو الإيثانول حمام الثلج الجاف بعد التجميد السريع - 70 ℃ التخزين .