الماوس انترلوكين ، IL-2 إليسا كيت

الماوس انترلوكينإليسا كيت

معلومات أساسية :

انترلوكين 2 ( IL-2 ) هو نوع من السيتوكينات التي تلعب دورا هاما في الاستجابة المناعية . في عام 1976 ، تم العثور عليها في الماوس الطحال خلية ثقافة supernatants مورغان ، لأنه يمكن أن تعزز بشكل جيد والحفاظ على المدى الطويل ثقافة الخلايا التائية ، لذلك يسمى عامل نمو الخلايا التائية ، في عام 1979 ، كان اسمه موحد IL - 2 . الفئران IL-2 تحتوي على 133 من مخلفات الأحماض الأمينية مع الوزن الجزيئي 15.5kda . . . . . . . IL-2 يلعب دورا هاما في حمل تكاثر وتمايز الخلايا اللمفية تي . وبالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تنظم الاستجابة المناعية IL-2 العديد من الخلايا . في الجسم الحي ، IL - 2 قد المضادة للورم ، ومكافحة العدوى الميكروبية ، مما تسبب في رفض الكسب غير المشروع ، المناعة الذاتية والمناعية التنظيم .

مبدأ الكشفس

سولاربيو (سولاربيو ®)انزيم مرتبط المناعي فحص ( ELISA ) كان يستخدم للكشف عن الأجسام المضادة على أساس مزدوج ساندويتش الأسلوب . الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة للفئران IL-2 كانت مغلفة على انزيم المسمى لوحة . بعد إضافة معيار التدرج تمييع predilution عينة ، على التوالي ، الفئران IL-2 في معيار عينة يمكن أن تكون مرتبطة بشكل كامل مع الأجسام المضادة المغلفة على انزيم لوحة . biotinylated الأجسام المضادة ضد الماوس IL-2 أضيفت بعد غسل لوحة ، والتي يمكن أن تكون ملزمة على وجه التحديد مع معيار الأجسام المضادة التي تم التقاطها على لوحة الماوس IL-2 في العينة . عندما هورس راديش پراكسيداز ( HRP ) المسمى streptavidin أضيفت إلى لوحة بعد الغسيل ، biotin و streptavidin بقوة غير تساهمي ملزمة . إذا كان هناك تركيز مختلفة من الماوس IL-2 في رد فعل المسام ، ثم برنامج الصحة الإنجابية يمكن أن تجعل عديم اللون TMB تتحول إلى مادة زرقاء مع اختلاف عمق ( علاقة طردية ) . ماكس = 450 إن امتصاص ( التطوير التنظيمي ) من رد فعل حفرة عينة تم قياسها في 0.5 نانومتر ( التطوير التنظيمي = 450 نانومتر ) ، وتركيز IL-2 في العينة يتناسب طرديا مع التطوير التنظيمي .

رسم تخطيطي

ملاحظة :※ ※

• وينبغي أن تستخدم هذه المجموعة خلال فترة الصلاحية ، من فضلك لا تستخدم الكواشف التي انتهت صلاحيتها .
• إذا كانت عدة لا تستخدم ، يجب أن تكون مخزنة في 2-8 ℃ الثلاجة .
• يرجى العودة في درجة حرارة الغرفة قبل استخدام كيت min， وعلاوة على ذلك ، المكونات المختلفة في عدة و إعداد عينة مختلطة تماما .
• أثناء الاختبار ، والمعايير والعينات تشير إلى أن تكون متعددة ثقب اختبار تسلسل إضافة الكواشف ينبغي الحفاظ عليها * .
• لتجنب التلوث الصليب ، يرجى استخدام أنبوب اختبار الثانوية ، رئيس بندقية ، وختم لوحة الغشاء في الاختبار )※تنظيف الحاويات البلاستيكية . ( أ )
• تركيز الأجسام المضادة biotinylated وتركيز انزيم كونجوجاتيس أقل في الحجم ، في عملية النقل ، تتبع السائل سوف تلصق على جدار الأنبوب و زجاجة .

قبل استخدام العلاج بالطرد المركزي ( 5-10 ق ) ، حتى أن السائل على جدار الأنبوب تتركز في الجزء السفلي من الأنبوب ، مع استخدام ماصة بعناية ضربة عدة مرات .

• وبصرف النظر عن تركيز المنظفات و إنهاء السوائل في مجموعات يمكن أن تكون عالمية ، لا تستخدم اختبار

وكيل محل عنصر واحد في هذه المجموعة .

• من أجل ضمان دقة النتائج ، منحنى القياسية المطلوبة في كل اختبار .

نصائح السلامة :إنهاء الحل في عدة هو الحل الحمضي ، المشغل يجب ارتداء القفازات عند استخدامها ، وإيلاء الاهتمام إلى الحماية . تجنب الاتصال مع الجلد والعينين أثناء العملية ، إذا كان الاتصال غير مقصود ، يرجى استخدام الكثير من المياه النظيفة . عند اختبار عينات الدم وغيرها من سوائل الجسم ، يرجى اتباع القواعد ذات الصلة في إدارة السلامة والحماية في المختبر البيولوجي الوطني .

تكوين وتخزين عدةس

معدات المختبرات الخاصة ( غير متوفرة ، يمكن شراؤها بدلا من ذلك )

• enzymolyte ( 450nm الطول الموجي الرئيسي ، إشارة الطول الموجي 630nm ) .
• عالية الدقة ماصة ماصة المتاح : 0.5-10 , 2-20 , 20-200 , 200-1000 ميكرولتر
• غسالة أو زجاجة
• 37℃حاضنة مربع
• مزدوجة تبخير المياه ، ديونيزيد المياه ، اسطوانة قياس ، الخ .
• مادة البولي بروبيلين أنبوب اختبار تخفيف

جمع العينات وتخزينها :

• خلية ثقافة طاف

خلية ثقافة متوسطة تم نقلها إلى أنبوب الطرد المركزي العقيم ، الطرد المركزي في 4 ℃ 1000 × ز لمدة 10 دقائق ، ثم طاف كانت معبأة في أنبوب صغير الجيش الشعبي و تخزينها في - 20 ℃ ( يمكن تخزينها في 2-8 ℃ في غضون 24 ساعة ) لتجنب تكرار التجميد والذوبان .

• عينة مصل

بعد تخثر الدم في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة ، 1000 × ز الطرد المركزي في 4 ℃ لمدة 10 دقائق ، ثم طاف كانت معبأة في أنبوب صغير الجيش الشعبي و تخزينها في - 20 ℃ ( يمكن تخزينها في 2-8 ℃ في غضون 24 ساعة ) .

• عينات البلازما :

الدم كله تم جمعها في أنبوب يحتوي على مضادات التخثر ، يدتا ، سيترات الصوديوم أو الهيبارين كما تم اختيار مضادات التخثر ، مختلطة لمدة 20 دقيقة في 4 ℃ 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 10 دقائق ، ثم طاف كانت معبأة في أنبوب صغير الجيش الشعبي و تخزينها في - 20 ℃ . . . . . . .

※ملاحظةتجنب استخدام عينة مصل الدم الانحلالي ، الدهون في الدم ، وذلك لتجنب التأثير على نتائج الاختبار . إذا كان الكشف عن تركيز الهدف في العينة هو أعلى من قيمة عالية من المعيار ، يرجى الكشف عن العينة بعد تخفيف مناسب متعددة .

إعداد الكواشفس

• درجة حرارة الكاشف : أولا ، في 30 دقيقة قبل الاختبار ، اختبار العينة في درجة حرارة الغرفة ، إذا كان تركيز سائل الغسيل تبلور ، يرجى وضعها في حمام دافئ في 37 ℃ حتى يذوب تماما .
• إعداد محلول الغسيل : استخدام حجم محلول الغسيل المخفف هو محسوب مسبقا ، ثم 20 مرة تتركز محلول الغسيل المخفف إلى 1 مرة تطبيق الحل مع ضعف الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء ، غير المستخدمة تتركز محلول الغسيل يوضع في الثلاجة في 4 ℃ . . . . . . .

3 . التدرج تمييع القياسية : إضافة معيار / عينة تمييع ( SR1 ) 1 مل من تجميد المجفف القياسية ، وترك لمدة 15 دقيقة حتى يذوب الخليط بلطف ( التركيز هو 1000pg / مل ) ، ثم وفقا للتركيزات التالية : 1000 ، 500 ، 250 ، 125 ، 62.5 31.25 , 15.625 , 0 بيكوغرام / مل تمييع الإصدار . حل القياسية ( 1000 بيكوغرام / مل ) ينبغي التخلي عنها أو تعبئتها حسب الحاجة ، وتخزينها في الثلاجة - 20 - 80 ℃ ، على النحو المبين أدناه .

4 . biotinylated الضد السائل العامل : حساب الجرعة المطلوبة من قبل الاختبار ، تمييع 100 مرة تركيز الأجسام المضادة مع الكشف عن تمييع السائل ( SR2 ) في 1 مرة تطبيق العمل السائل ( قبل تمييع تماما مختلطة ) ، يرجى إضافة إلى رد فعل حفرة في 30 دقيقة .

البيوتين الضد السائل العامل محددةطريقة التخفيفعلى النحو التالي :

5 - عمل انزيم كونجوجاتيس الحل : حسب الجرعة المطلوبة في كل اختبار ، 100 مرة تركيز انزيم كونجوجاتيس المخفف مع انزيم كونجوجاتيس ( SR3 ) إلى 1 مرة تركيز انزيم كونجوجاتيس تطبيق ( الطرد المركزي قبل تمييع ) ، يرجى استخدامها في غضون 30 دقيقة .

عمل انزيم كونجوجاتيس السائل محددةطريقة التخفيفعلى النحو التالي :

6 . طريقة الغسيل :

• التلقائي غسل لوحة : قذف السائل من خلال ثقب في لوحة enzymic التسمية ، بات الجافة على ورقة سميكة مغلفة ماصة ، حقن سائل الغسيل 300ul / حفرة ، حقن وامتصاص الفاصلة 30 ثانية ، وغسل لوحة 5 مرات .
• ومن ناحية غسل المجلس : قذف السائل من خلال ثقب في انزيم علامة المجلس ، بات الجافة على ورقة سميكة مغلفة ماصة ، إضافة سائل الغسيل 300 ماي / حفرة مع غسل زجاجة ، لا يزال 30 ثانية بعد قذف السائل من خلال ثقب في انزيم علامة المجلس ، بات الجافة على ورقة سميكة مغلفة ماصة ، وغسل المجلس 5 مرات .

خطوات الكشف :

نتيجة الحكمس

1 - تحديد قيمة التطوير التنظيمي في 450nm الطول الموجي . اختيار مزدوج الطول الموجي للكشف عن إشارة الطول الموجي 630 نانومتر . إذا كان لا يمكن الكشف عن ضعف الطول الموجي ، طرح 630 نانومتر التطوير التنظيمي مع 450 نانومتر التطوير التنظيمي .

2 - حساب متوسط قيمة التطوير التنظيمي القياسية ، عينة : التطوير التنظيمي قيمة كل معيار عينة تطرح قيمة التطوير التنظيمي من ثقب صفر

3 - منحنى القياسية تم رسمها باستخدام البرمجيات ، مع تركيز المواد المرجعية الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الامتصاصية الإحداثي الطولي .

4 . إذا كان التطوير التنظيمي قيمة العينة أعلى من الحد الأعلى من منحنى القياسية ، ينبغي إعادة الكشف عن بعد تخفيف مناسب ، ثم حساب تركيز مضروبا في تخفيف متعددة .

معلمة التمثيلس

1 - البيانات والمنحنيات القياسية

هذا الرسم البياني هو كمرجع فقط ، وينبغي أن تستخدم في حساب محتوى العينة من الفئران IL - 2

2. حساسية

تركيز IL-2 في الفئران يمكن أن تصل إلى 7 جزء في المليون / مل .

متوسط تركيز التطوير التنظيمي 20 صفر القياسية بالإضافة إلى اثنين من الانحرافات المعيارية ، المقابلة يمكن الكشف عن تركيز محسوبة .

3. خصوصية

لا تتفاعل مع الفئران IL-2 ، 4 ، 6 ، 8 ، 10 ، الفئران IL-2 ، 4 ، 6 ، 8 ، الخ .

4. التكرار

في لوحة ، لوحة معامل الاختلاف < 10%

5. معدل الاسترداد

ثلاثة مستويات مختلفة من الفئران IL-2 أضيفت إلى البلازما و خلية ثقافة supernatants من الفئران صحية ، ومعدل الاسترداد حسبت .

6. خطي تخفيفس

تركيزات عالية من الفئران IL-2 أضيفت إلى البلازما و خلية ثقافة supernatants من أربع مجموعات من الفئران صحية ، على التوالي .

المراجعس

1- يوكوتا، تي وآخرون (1985) Proc. ناتل. حمض. العلوم. USA 82:68.

2- Kashima، N. et al. (1985) Nature 313:401.

3- Fuse، A. et al. (1984) Nucl. الأحماض. 12: 9323.

4- توماس، ر. وآخرون (2003)J Leukocyte Bio.961-965

5- برونتي، ف. وآخرون (1995) J. Immunol.5282-5292

6- يوكوتا، تي وآخرون (1985) Proc. ناتل. أكاديمية. العلوم. USA 82:68.

7- Kashima، N. et al. (1985) Nature 313:401.

المشاكل المشتركة والحلولس

الماوس انترلوكينإليسا كيتتعليمات الطلب :

1 ، فإن الغالبية العظمى من المنتجات المتاحة في الأوراق المالية ، في ظل الظروف العادية يمكن أن يأمر يوم التسليم .
2 ، بعض المنتجات غير العادية ، تحتاج إلى حجز 1-2 أيام مقدما ، العقود الآجلة في الخارج تحتاج إلى حجز 3-6 أسابيع مقدما .
3 ، بعض أسعار المنتجات سوف تتغير بسبب تاريخ الشحن ، الكثير ، وغيرها من العوامل ، إذا كان هناك تغيير في الأسعار الجديدة في تاريخ النظام .
4 ، من أجل الموعد النهائي اليومي هو 16 دقيقة ، بعض المدن يمكن أن تصل إلى 17 دقيقة ، لأن أكثر من الموعد النهائي في ذلك اليوم لن تكون قادرة على تسليم البضائع سوف تكون مرتبة في اليوم التالي .
5 ، يرجى الانتهاء من الدفع ، جنبا إلى جنب مع أسفل قائمة عنوان المرسل إليه ، الاسم ، الخ الفاكس ، الرسائل القصيرة ، وغيرها من أشكال إعلامنا .

إليسا كيتتعليمات النقل :

درجة حرارة منخفضة للغاية من المنتجات : نقل المنتجات المبردة للغاية مع الثلج الجاف أثناء النقل . التفاف المنتجات مع الثلج الجاف ، مختومة مع رغوة مربع ، شريط لاصق طبقة على طبقة من الرغوة مربع ، وضعت في صندوق Solaibao ، ثم تسليمها إلى التعاون السريع ، آمنة وفعالة في أيدي العملاء ، وضمان استقرار طبيعة المنتج ، مثل واحد ، من أجل حماية التجربة الخاصة بك .
انخفاض درجة حرارة المنتج : انخفاض درجة حرارة المنتج في عملية النقل إضافة إلى حقيبة الثلج Solaibao النقل . قبل التفاف المنتج مع كيس الثلج ، ثم استخدام رغوة مربع مختومة ، مختومة بإحكام مع شريط لاصق رغوة مربع ، ثم وضع في مربع ( sulaibao تأثير العزل الحراري يمكن أن تستمر لمدة أقل من أسبوع ) ، ثم تسليمها إلى التعاون السريع ، آمنة وفعالة وموثوق بها تسليم أيدي العملاء ، وضمان استقرار طبيعة المنتج ، مثل واحد ، مرافقة التجربة الخاصة بك .
المنتجات في درجة الحرارة العادية : لا الجليد أو التعبئة والتغليف الخاصة المطلوبة أثناء نقل المنتجات في درجة الحرارة العادية . المنتجات من قبل موظفي الشركة مستودع سريع التسليم ، سريعة ودقيقة وفعالة لضمان التسليم السريع من المنتجات في يديك .