الماوس انترلوكين 1A إليسا كيت

الماوس انترلوكين 1A إليسا كيت

معلومات أساسية :

هناك نوعان من الأشكال الجزيئية المختلفة من IL - 1 ، IL - 1 α ، التي تتألف من 159 الأحماض الأمينية . آخر ، ودعا IL - 1 بيتا ، يحتوي على 153 الأحماض الأمينية . كل من يتم ترميز الجينات المختلفة . الإنسان والفأر IL - 1 الجينات تقع على كروموسوم 2 ، تحتوي على 7 exons . إن proil-1 السلائف ( proil-1 ) هو 31kda ، ناضجة IL - 1 جزيء يتكون من التحلل البروتيني . IL - 1 عالية تماثل في مختلف الأنواع . على مستوى الأحماض الأمينية ، تماثل il-1 α و il-1 β 60 ٪ ～ 70 ٪ و 75 ٪ ～ 78 في المائة ، على التوالي . ولكن في نفس النوع من جنس ال 1 α و ال 1 β متشابه فقط 25 ٪ . الوزن الجزيئي il-1 α و il-1 β حوالي 17.5kda isoelectric النقاط 5 و 7 ، على التوالي ، تماثل 28 في المائة .سطح الخليةالمستقبلات التي تلعب نفس الدور البيولوجي .

مبدأ الكشفس

سولاربيو (سولاربيو ®)انزيم مرتبط المناعي فحص ( ELISA ) كان يستخدم للكشف عن الأجسام المضادة على أساس مزدوج ساندويتش الأسلوب . الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة للفئران il-1a كانت مغلفة على انزيم المسمى لوحة . إن il-1a الفئران في كل من المعايير و prediluted عينات تم إضافتها ، على التوالي . biotinylated الضد أضيفت بعد غسل لوحة ، والتي يمكن أن تربط على وجه التحديد مع الماوس IL - 1A القياسية التي تم التقاطها بواسطة الأجسام المضادة المغلفة على لوحة الماوس IL - 1A في العينة . عندما هورس راديش پراكسيداز ( HRP ) المسمى streptavidin أضيفت إلى لوحة بعد الغسيل ، biotin و streptavidin بقوة غير تساهمي ملزمة . إذا كانت هناك تركيزات مختلفة من IL - 1A في رد فعل المسام ، ثم برنامج الصحة الإنجابية يمكن أن تجعل عديم اللون TMB تتحول إلى مادة زرقاء مع ظلال مختلفة ( علاقة طردية ) . ماكس = 450 إن امتصاص ( التطوير التنظيمي ) من رد فعل حفرة عينة تم قياسها في 0.5 نانومتر ( التطوير التنظيمي = 450 نانومتر ) ، وتركيز il-1a في الفئران في العينة يتناسب طرديا مع التطوير التنظيمي .

رسم تخطيطي

ملاحظة :※ ※

• وينبغي أن تستخدم هذه المجموعة خلال فترة الصلاحية ، من فضلك لا تستخدم الكواشف التي انتهت صلاحيتها .
• إذا كانت عدة لا تستخدم ، يجب أن تكون مخزنة في 2-8 ℃ الثلاجة .
• يرجى العودة في درجة حرارة الغرفة قبل استخدام كيت min， وعلاوة على ذلك ، المكونات المختلفة في عدة و إعداد عينة مختلطة تماما .
• أثناء الاختبار ، والمعايير والعينات تشير إلى أن تكون متعددة ثقب اختبار تسلسل إضافة الكواشف ينبغي الحفاظ عليها * .
• لتجنب التلوث الصليب ، يرجى استخدام أنبوب اختبار الثانوية ، رئيس بندقية ، وختم لوحة الغشاء في الاختبار )※تنظيف الحاويات البلاستيكية . ( أ )
• تركيز الأجسام المضادة biotinylated وتركيز انزيم كونجوجاتيس أقل في الحجم ، في عملية النقل ، تتبع السائل سوف تلصق على جدار الأنبوب و زجاجة .

قبل استخدام العلاج بالطرد المركزي ( 5-10 ق ) ، حتى أن السائل على جدار الأنبوب تتركز في الجزء السفلي من الأنبوب ، مع استخدام ماصة بعناية ضربة عدة مرات .

• وبصرف النظر عن تركيز المنظفات و إنهاء السوائل في مجموعات يمكن أن تكون عالمية ، لا تستخدم اختبار

وكيل محل عنصر واحد في هذه المجموعة .

• من أجل ضمان دقة النتائج ، منحنى القياسية المطلوبة في كل اختبار .

نصائح السلامة :إنهاء الحل في عدة هو الحل الحمضي ، المشغل يجب ارتداء القفازات عند استخدامها ، وإيلاء الاهتمام إلى الحماية . تجنب الاتصال مع الجلد والعينين أثناء العملية ، إذا كان الاتصال غير مقصود ، يرجى استخدام الكثير من المياه النظيفة . عند اختبار عينات الدم وغيرها من سوائل الجسم ، يرجى اتباع القواعد ذات الصلة في إدارة السلامة والحماية في المختبر البيولوجي الوطني .

تكوين وتخزين عدةس

معدات المختبرات الخاصة ( غير متوفرة ، يمكن شراؤها بدلا من ذلك )

• enzymolyte ( 450nm الطول الموجي الرئيسي ، إشارة الطول الموجي 630nm ) .
• عالية الدقة ماصة ماصة المتاح : 0.5-10 , 2-20 , 20-200 , 200-1000 ميكرولتر
• غسالة أو زجاجة
• 37℃حاضنة مربع
• مزدوجة تبخير المياه ، ديونيزيد المياه ، اسطوانة قياس ، الخ .
• مادة البولي بروبيلين أنبوب اختبار تخفيف

جمع العينات وتخزينها :

• خلية ثقافة طاف

خلية ثقافة متوسطة تم نقلها إلى أنبوب الطرد المركزي العقيم ، الطرد المركزي في 4 ℃ 1000 × ز لمدة 10 دقائق ، ثم طاف كانت معبأة في أنبوب صغير الجيش الشعبي و تخزينها في - 20 ℃ ( يمكن تخزينها في 2-8 ℃ في غضون 24 ساعة ) لتجنب تكرار التجميد والذوبان .

• عينة مصل

بعد تخثر الدم في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة ، 1000 × ز الطرد المركزي في 4 ℃ لمدة 10 دقائق ، ثم طاف كانت معبأة في أنبوب صغير الجيش الشعبي و تخزينها في - 20 ℃ ( يمكن تخزينها في 2-8 ℃ في غضون 24 ساعة ) .

• عينات البلازما :

الدم كله تم جمعها في أنبوب يحتوي على مضادات التخثر ، يدتا ، سيترات الصوديوم أو الهيبارين كما تم اختيار مضادات التخثر ، مختلطة لمدة 20 دقيقة في 4 ℃ 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 10 دقائق ، ثم طاف كانت معبأة في أنبوب صغير الجيش الشعبي و تخزينها في - 20 ℃ . . . . . . .

※ملاحظةتجنب استخدام عينة مصل الدم الانحلالي ، الدهون في الدم ، وذلك لتجنب التأثير على نتائج الاختبار . إذا كان الكشف عن تركيز الهدف في العينة هو أعلى من قيمة عالية من المعيار ، يرجى الكشف عن العينة بعد تخفيف مناسب متعددة .

إعداد الكواشفس

• درجة حرارة الكاشف : أولا ، في 30 دقيقة قبل الاختبار ، اختبار العينة في درجة حرارة الغرفة ، إذا كان تركيز سائل الغسيل تبلور ، يرجى وضعها في حمام دافئ في 37 ℃ حتى يذوب تماما .
• إعداد محلول الغسيل : استخدام حجم محلول الغسيل المخفف هو محسوب مسبقا ، ثم 20 مرة تتركز محلول الغسيل المخفف إلى 1 مرة تطبيق الحل مع ضعف الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء ، غير المستخدمة تتركز محلول الغسيل يوضع في الثلاجة في 4 ℃ . . . . . . .

3 . التدرج تمييع القياسية : إضافة معيار / عينة مخفف ( SR1 ) 1 مل من تجميد المجفف القياسية ، وترك لمدة 15 دقيقة حتى يذوب الخليط بلطف ( التركيز هو 2000pg / مل ) ، ثم تمييع وفقا للتركيزات التالية : 2000 ، 1000 ، 500 ، 250 ، 125 ، 62.5 ، 31.25 ، 0 بيكوغرام / مل . حل القياسية ( 2000pg / مل ) ينبغي التخلي عنها أو تعبئتها حسب الحاجة ، وتخزينها في الثلاجة - 20 - 80 ℃ ، على النحو المبين أدناه .

4 . biotinylated الضد السائل العامل : حساب الجرعة المطلوبة من قبل الاختبار ، تمييع 100 مرة تركيز الأجسام المضادة مع الكشف عن تمييع السائل ( SR2 ) في 1 مرة تطبيق العمل السائل ( قبل تمييع تماما مختلطة ) ، يرجى إضافة إلى رد فعل حفرة في 30 دقيقة .

البيوتين الضد السائل العامل محددةطريقة التخفيفعلى النحو التالي :

5 - عمل انزيم كونجوجاتيس الحل : حسب الجرعة المطلوبة في كل اختبار ، 100 مرة تركيز انزيم كونجوجاتيس المخفف مع انزيم كونجوجاتيس ( SR3 ) إلى 1 مرة تركيز انزيم كونجوجاتيس تطبيق ( الطرد المركزي قبل تمييع ) ، يرجى استخدامها في غضون 30 دقيقة .

عمل انزيم كونجوجاتيس السائل محددةطريقة التخفيفعلى النحو التالي :

6 . طريقة الغسيل :

• التلقائي غسل لوحة : قذف السائل من خلال ثقب في لوحة enzymic التسمية ، بات الجافة على ورقة سميكة مغلفة ماصة ، حقن سائل الغسيل 300ul / حفرة ، حقن وامتصاص الفاصلة 30 ثانية ، وغسل لوحة 5 مرات .
• ومن ناحية غسل المجلس : قذف السائل من خلال ثقب في انزيم علامة المجلس ، بات الجافة على ورقة سميكة مغلفة ماصة ، إضافة سائل الغسيل 300 ماي / حفرة مع غسل زجاجة ، لا يزال 30 ثانية بعد قذف السائل من خلال ثقب في انزيم علامة المجلس ، بات الجافة على ورقة سميكة مغلفة ماصة ، وغسل المجلس 5 مرات .

خطوات الكشف :

نتيجة الحكمس

1 - تحديد قيمة التطوير التنظيمي في 450nm الطول الموجي . اختيار مزدوج الطول الموجي للكشف عن إشارة الطول الموجي 630 نانومتر . إذا كان لا يمكن الكشف عن ضعف الطول الموجي ، طرح 630 نانومتر التطوير التنظيمي مع 450 نانومتر التطوير التنظيمي .

2 - حساب متوسط قيمة التطوير التنظيمي القياسية ، عينة : التطوير التنظيمي قيمة كل معيار عينة تطرح قيمة التطوير التنظيمي من ثقب صفر

3 - منحنى القياسية مع تركيز معيار الإحداثي السيني ، الامتصاصية التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي ، و il-1a المحتوى في العينة يمكن تحويلها من منحنى القياسية من خلال المقابلة التطوير التنظيمي القيمة .

4 . إذا كان التطوير التنظيمي قيمة العينة أعلى من الحد الأعلى من منحنى القياسية ، ينبغي إعادة الكشف عن بعد تخفيف مناسب ، ثم حساب تركيز مضروبا في تخفيف متعددة .

معلمة التمثيلس

1 - البيانات والمنحنيات القياسية

هذا الرسم البياني هو كمرجع فقط ، وينبغي أن تستخدم في حساب محتوى العينة من الفئران il-1a

2. حساسية

تركيز IL - 1A في الفئران يمكن أن تصل إلى 15 بيكوغرام / مل .

متوسط تركيز التطوير التنظيمي 20 صفر القياسية بالإضافة إلى اثنين من الانحرافات المعيارية ، المقابلة يمكن الكشف عن تركيز محسوبة .

3. خصوصية

لا تتفاعل مع الفئران IL - 1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 ، 7 ، 9 ، 10 ، 12 ، 13 .برد فعل مماثل

4. التكرار

في لوحة ، لوحة معامل الاختلاف < 10%

5. معدل الاسترداد

ثلاثة مستويات مختلفة من il-1a أضيفت إلى البلازما و خلية ثقافة supernatants من الفئران صحية ، ومعدل الاسترداد حسبت .

6. خطي تخفيفس

تركيزات عالية من الفئران il-1a أضيفت إلى البلازما و خلية ثقافة supernatants من أربع مجموعات من الفئران صحية ، على التوالي .

المراجعس

1- Greenfeder, S.A. وآخرون (1995) J. Biol. كيمياء.270: 13575 .

2- Wesche، H. وآخرون (1997) J. Biol. كيمياء.272: 7727 .

3. سيمز، جي إي وآخرون (1994) كلين. المناعة. Immunopathol.72س

4- سيمز، ج. إي وآخرون (1993) Proc. ناتل. أكاديمية. العلوم. الولايات المتحدة الأمريكية90: 6155 .

5. Colotta، F. وA. Mantovani (1994) الاتجاهات Pharmacol. العلوم.14: 138 .

6. Svenson، M. وآخرون (1993) Cytokine5: 427 .

7- جيري، ج. جي وآخرون (1994).153: 5802 .

المشاكل المشتركة والحلولس

الماوس انترلوكين 1A إليسا كيتتعليمات الطلب :

1 ، فإن الغالبية العظمى من المنتجات المتاحة في الأوراق المالية ، في ظل الظروف العادية يمكن أن يأمر يوم التسليم .
2 ، بعض المنتجات غير العادية ، تحتاج إلى حجز 1-2 أيام مقدما ، العقود الآجلة في الخارج تحتاج إلى حجز 3-6 أسابيع مقدما .
3 ، بعض أسعار المنتجات سوف تتغير بسبب تاريخ الشحن ، الكثير ، وغيرها من العوامل ، إذا كان هناك تغيير في الأسعار الجديدة في تاريخ النظام .
4 ، من أجل الموعد النهائي اليومي هو 16 دقيقة ، بعض المدن يمكن أن تصل إلى 17 دقيقة ، لأن أكثر من الموعد النهائي في ذلك اليوم لن تكون قادرة على تسليم البضائع سوف تكون مرتبة في اليوم التالي .
5 ، يرجى الانتهاء من الدفع ، جنبا إلى جنب مع أسفل قائمة عنوان المرسل إليه ، الاسم ، الخ الفاكس ، الرسائل القصيرة ، وغيرها من أشكال إعلامنا .

تعليمات النقل :

درجة حرارة منخفضة للغاية من المنتجات : نقل المنتجات المبردة للغاية مع الثلج الجاف أثناء النقل . التفاف المنتجات مع الثلج الجاف ، مختومة مع رغوة مربع ، شريط لاصق طبقة على طبقة من الرغوة مربع ، وضعت في صندوق Solaibao ، ثم تسليمها إلى التعاون السريع ، آمنة وفعالة في أيدي العملاء ، وضمان استقرار طبيعة المنتج ، مثل واحد ، من أجل حماية التجربة الخاصة بك .
انخفاض درجة حرارة المنتج : انخفاض درجة حرارة المنتج في عملية النقل إضافة إلى حقيبة الثلج Solaibao النقل . قبل التفاف المنتج مع كيس الثلج ، ثم استخدام رغوة مربع مختومة ، مختومة بإحكام مع شريط لاصق رغوة مربع ، ثم وضع في مربع ( sulaibao تأثير العزل الحراري يمكن أن تستمر لمدة أقل من أسبوع ) ، ثم تسليمها إلى التعاون السريع ، آمنة وفعالة وموثوق بها تسليم أيدي العملاء ، وضمان استقرار طبيعة المنتج ، مثل واحد ، مرافقة التجربة الخاصة بك .
المنتجات في درجة الحرارة العادية : لا الجليد أو التعبئة والتغليف الخاصة المطلوبة أثناء نقل المنتجات في درجة الحرارة العادية . المنتجات من قبل موظفي الشركة مستودع سريع التسليم ، سريعة ودقيقة وفعالة لضمان التسليم السريع من المنتجات في يديك .