البيروفات ديهيدروجيناز في المصل ( PDH ) طقم اختبار النشاط

ديهيدروجيناز في المصل البيروفات )PDH( النشاط كشف عدة تعليمات طريقة تتبع

ملاحظة : الكواشف من هذا المنتج قد تغيرت ، يرجى الانتباه إلى العمل بدقة وفقا للتعليمات .

رقم الشحن :BC0385

مواصفة :100T/96S

تكوين المنتج : قبل الاستخدام ، يرجى التحقق بعناية ما إذا كان حجم الكاشف هو نفسه مع حجم زجاجة ، إذا كان لديك أي أسئلة ، يرجى الاتصال سو laibao الموظفين في الوقت المناسب .

البيروفات ديهيدروجيناز في المصل ( PDH ) طقم اختبار النشاط

البيروفات ديهيدروجيناز في المصل ( PDH ) طقم اختبار النشاط

إعداد الحل :

1. الكاشف الثانيسعن الكواشف المتطايرة ، وختم في أقرب وقت ممكن بعد الاستخدام ،-20℃حفظ .

2. إعداد سائل العمل : التعامل مع قبل الاستخدام5.75 ملكاشف كاشف كاشف أربعة ، خمسة ،0.45 ملكاشف ستة1.75 ملكاشف سبعة نقل إلى زجاجة واحدة من كاشف ثلاثة مختلطة حل جاهزة للاستخداممجموع15.45ملتقريبا85Tوالكواشف التي لا نهاية لها-20℃حزمة التخزين4أسابيع .تجنب تكرار التجميد والذوبان .

وصف المنتج :

PDH( أ )EC 4.1.1.1بيروفات ديهيدروجيناز في المصل معقدة ، PDH(PDHC)الحد من سرعة الانزيم المحفز أكسدة حمض البيروفيك decarboxylationتحلل حمض تريكاربوكسيليتش ترتبط بشكل دائري .

PDHالحفاز ديهيدروجيناشن البيروفات ، في وقت واحد الحد2 , 6dichlorophenol indophenol )2،6-DCPIPمما يؤدي إلى605 نانومترانخفاض امتصاص الضوء .

حمض بيروفيك + ثيامين بيروفوسفات هيدروكسي إيثيل ثيامين بيروفوسفات

Dichlorophenolindophenol (605nm) + Hydroxyethyl Thiamine Pyrophosphate خفض Dichlorophenolindophenol

ملاحظة : اقترح اختيار قبل التجربة2-3ثلاث عينات من المتوقع أن تختلف اختلافا كبيرا . إذا كانت قيمة العينة ليست في نطاق القياس ، فمن المستحسن أن تضعف أو زيادة حجم العينة .

الأدوات واللوازم المطلوبة :

الطيف المرئيوenzymogram ، حمام الماء وعاء ، الجدول نوع الطرد المركزي ، قابل للتعديل ماصة ، تتبع الزجاج طبق اللونيةسفتحة لوحة هاونوخلاط ، والجليد والماء المقطر .

خطوات التشغيل :

واحدتجهيز عينة( حجم العينة يمكن تعديلها بشكل صحيح ، نسبة محددة يمكن الرجوع إليها )

1. المنظمة : دعوة للحصول على العهد0.1gالانضمام إلى منظمة1 ملكاشف10μLالكاشف الثاني ، مع حمام الثلج أو هاون المجانسة المجانسة طحن تماما ،4 ℃ 11000 غرامطرد مركزي10 دقايقإزالةعلى الجليدقياس .

2. عينة من الخلايا أو البكتيريا500عشرة آلاف الخلايا أو البكتيريا في أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي بعد التخلص من طاف . بعد الانضمام1ملكاشف10μLالكاشف الثاني، حمام الثلج بالموجات فوق الصوتية كسر البكتيريا ( السلطة200 Wبالموجات فوق الصوتية3 ثانيةفاصل7 ثانيةمجموع الوقت5 دقايق) ; ثم11000g，4الطرد المركزي10 دقايق，

إزالة وتوضع على الجليد .

3. المصل ( البلازما )وغيرها من عينات السائل: الكشف المباشر .إذا كان الحل هو عكر ، ثم طرد و طاف هو إزالتها .

تحديد الخطوات

ومرئيالإجار أو enzymic جهاز التسخين30 دقيقةضبط الطول الموجي605 نانومترطيفي الماء المقطر .

وكل عينة المطلوبة180 ميكرولترسائل العملوفقا لمتطلبات التجربةتأخذ كمية معينة من سائل العمل ووضعها في37℃( الثدييات ) أو25℃الأنواع الأخرىحمام الماء في وعاءحمام مائي10 دقايقمنتدى

وأنابيب فارغة : في أطباق اللونية الصغيرة أو96إضافة فتحة180 ميكرولترسائل العمل10μLالماء ، والخلط ، تسجيل فوري605 نانومترمكتب10sمكتبقيمة امتصاص الضوءA1و1دقيقة10sبعد امتصاص الضوءA2حسابΔAبياض= A1-A2منتدىأنابيب فارغة تحتاج فقط إلى قياس1-2وقت .منتدى

وتحديد أنبوب : في طبق اللونية الصغيرة أو96إضافة فتحة180 ميكرولترسائل العمل10μLعينة ، مزيج ، تسجيل فوري605 نانومترمكتب10sمكتبقيمة امتصاص الضوءA3و1دقيقة10sبعد امتصاص الضوءA4حسابΔAتحديد= A3-A4منتدى

ثالثاPDHحساب النشاط

أ.الصيغة الحسابية لتحديد أثر اللونية طبق على النحو التالي

1. حساب تركيز البروتين حسب العينة

تعريف الوحدة : لكلملغاستهلاك البروتينات النسيجية في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل1nmol 2,6-dichlorophenol indophenol بأنها وحدة نشاط انزيم .

PDHنشط )U / ملغ بروتو=[(ΔA)تحديد- ΔAبياضم( أ )ε × دو× Vعكس مجموعس⁹]÷ (Cpr × V)عينة÷T

= 904.762 × ΔAتحديد- ΔAبياض÷Cpr

2. حسب نوعية العينة

تعريف الوحدة : لكلgاستهلاك الأنسجة في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل1nmol 2,6-dichlorophenol indophenol بأنها وحدة نشاط انزيم .

PDHنشط )U / جالجودة (=[(ΔA)تحديد- ΔAبياضم( أ )ε × دو× Vعكس مجموعس⁹]÷(V)عينة÷Vمجموع العينة× W) ÷T

= 913.81 × ΔAتحديد- ΔAبياض÷W

3. حسب عدد البكتيريا أو الخلايا

تعريف الوحدة : لكل1عشرة آلاف من البكتيريا أو الخلايا المستهلكة في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل1nmol 2,6-dichlorophenol indophenol بأنها وحدة نشاط انزيم .

PDHنشط )U/10⁴الخليةو=[(ΔA)تحديد- ΔAبياض) × Vعكس مجموعم( أ )ε × دوس⁹]÷(V)عينة÷Vمجموع العينة× 500) ÷T

= 1.828 × ΔAتحديد- ΔAبياضو

4. حساب حجم العينة

تعريف الوحدة : لكلملسائل .في رد فعل النظامالاستهلاك في الدقيقة1nmol 2,6-dichlorophenol indophenol بأنها وحدة نشاط انزيم .

PDHنشط( أ )U / ملو=[(ΔA)تحديد- ΔAبياض) × Vعكس مجموع÷ (ε × د) × 10⁹]÷Vعينة÷T

= 904.762 × ΔAتحديد- ΔAبياضو

Vعكس مجموع : مجموع حجم نظام رد الفعل ،1-9 × 10^-4Lنεس2 , 6معامل الخمود المولي dichloroindophenol ،2-1 × 10⁴ل / مول / سمنd: طبق اللونية مسار الضوء ،1 سمنVعينة : إضافة حجم العينة ،0.01 ملنVمجموع العينة : إضافة كاشف كاشف حجم واحد و اثنين ،1.01 ملنTزمن رد الفعل1 دقيقةنسي بي آر: تركيز البروتين عينة ،ملغ / ملنW: نوعية العينة ،gن500: عدد البكتيريا أو الخلايا ،500مليون

ب.استخدام96الصيغة الحسابية لتحديد فتحة لوحة على النحو التالي

1 .حساب تركيز البروتين حسب العينة

تعريف الوحدة : لكلملغاستهلاك البروتينات النسيجية في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل1nmol 2,6-dichlorophenol indophenol بأنها وحدة نشاط انزيم .

PDHنشط )U / ملغ بروتو=[(ΔA)تحديد- ΔAبياض) × Vعكس مجموعم( أ )ε × دوس⁹]÷ (Cpr × V)عينة÷T

= 1809.524 × ΔAتحديد- ΔAبياض÷Cpr

2 .حسب نوعية العينة

تعريف الوحدة : لكلgاستهلاك الأنسجة في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل1nmol 2,6-dichlorophenol indophenol بأنها وحدة نشاط انزيم .

PDHنشط )U / جالجودة (=[(ΔA)تحديد- ΔAبياض) × Vعكس مجموعم( أ )ε × دوس⁹]÷(V)عينة÷Vمجموع العينة× W) ÷T

= 1827.62 × ΔAتحديد- ΔAبياض÷W

3 .حسب عدد البكتيريا أو الخلايا

تعريف الوحدة : لكل1عشرة آلاف من البكتيريا أو الخلايا المستهلكة في الدقيقة الواحدة في نظام رد الفعل1nmol 2,6-dichlorophenol indophenol بأنها وحدة نشاط انزيم .

PDHنشط )U/10⁴الخليةو=[(ΔA)تحديد- ΔAبياض) × Vعكس مجموعم( أ )ε × دوس⁹]÷(V)عينة÷Vمجموع العينة× 500) ÷T

= 3.655 × ΔAتحديد- ΔAبياضو

4 .حساب حجم العينة

تعريف الوحدة : لكلملسائل .في رد فعل النظامالاستهلاك في الدقيقة1nmol 2,6-dichlorophenol indophenol بأنها وحدة نشاط انزيم .

PDHنشط( أ )U / ملو=[(ΔA)تحديد- ΔAبياض) × Vعكس مجموع÷ (ε × د) × 10⁹]÷Vعينة÷T

= 1809.524 × ΔAتحديد- ΔAبياضو

Vعكس مجموع : مجموع حجم نظام رد الفعل ،1-9 × 10^-4Lنεس2 , 6معامل الخمود المولي dichloroindophenol ،2-1 × 10⁴ل / مول / سمنdس96فتحة قطرها الخفيفة ،0.5 سمنVعينة : إضافة حجم العينة ،0.01 ملنVمجموع العينة : إضافة كاشف كاشف حجم واحد و اثنين ،1.01 ملنTزمن رد الفعل1 دقيقةنسي بي آر: تركيز البروتين عينة ،ملغ / ملنW: نوعية العينة ،gن500: عدد البكتيريا أو الخلايا ،500مليون

ملاحظة :

وجميع العينات التي تم وضعها على الجليد2الكشف في غضون ساعة لتجنب التشويه والتحريف والتعطيل .

وتحديد أنبوبΔAقيمة0.01-0.25إذا كان قياس أنبوبΔAقيمة أكبر من0.25العينة يجب أن تكون مخففة .الصيغة الحسابية مضروبة في تخفيف متعددة .إذا كان قياس أنبوبΔAالقيمةصغيرفي0.01بعد زيادة حجم العينة ، ينبغي إعادة تحديد الصيغة الحسابية ينبغي تعديلها بشكل متزامن .

ولأن كاشف واحد يحتوي على تركيز معين من البروتين1 ملغ / ملحتى في تحديد تركيز البروتين في العينة تحتاج إلى طرحكاشفمحتوى البروتين .

أمثلة تجريبية :

و取0.1gكبد الفئرانانضمام1 ملكاشف10μLالكاشف الثاني ، مع حمام الثلج أو هاون المجانسة المجانسة طحن تماما ،4℃و11000gطرد مركزي10 دقايقإزالة الجليد ووضعها على الجليد .تتبع الكوارتز طبق اللونيةقياسحسابΔAتحديد=A3-A4=1.3106-1.1183=0.1923وΔAبياض=A1-A2 =1.3325-1.3314=0.0011، يحسب نشاط انزيم حسب نوعية العينة :

PDHنشط(U / غ)جودة= 913.81 × ΔAتحديد- ΔAبياض÷W = 1747 وحدة / غرامالجودة .

المنشورات ذات الصلة :

[ 1 ]Peng S, Wang Y, Zhou Y, et al. Ginsenosides النادرة تحسن مقاومة الأنسولين في عضلة القلب الناجمة عن زيادة الحمل الدهني عن طريق تعديل مرونة الأيض [J]. الطب النباتي ، 2019 ، 58: 152745.

المراجع :

[ 1 ]Guitart M، Andreu A L، García-Arumi E، وآخرون. FATP1 يتوطن على الميتوكوندريات ويعزز نشاط بيروفات ديهيدروجيناز في الأنابيب العضلية الهيكلية [J]. ميتوكوندريا، 2009، 9(4): 266-272.

سلسلة من المنتجات ذات الصلة :

BC0710/BC0715 ألفا-ketoglutarate ديهيدروجيناز في المصل )ألفا-KGDH) طقم اختبار النشاط

BC2150/BC2155حامض الستريك )كاليفورنيا) كشف محتوى عدة

BC0950/BC0955سكسينات ديهيدروجيناز في المصل )SDH) طقم اختبار النشاط