مستقبلات انترلوكين 7 ( القابلة للذوبان ) طقم إليسا هو أداة تستخدم في الكشف عن كمية من مستقبلات انترلوكين 7 القابلة للذوبان في العينات البيولوجية .
انترلوكين 7 مستقبلات للذوبان إليسا كيت
انترلوكين 7 مستقبلات للذوبان إليسا كيتهو أداة تستخدم في الكشف عن كمية من مستقبلات انترلوكين 7 للذوبان في العينات البيولوجية ، ويستخدم على نطاق واسع في مجال البحوث المناعية .
مبدأ الكشفطرق مزدوجة ساندويتش إليسا الأضداد المستخدمة . لوحات microporous في عدة كانت مغلفة مع الأجسام المضادة المحددة ضد مستقبلات انترلوكين 7 القابلة للذوبان . عند إضافة العينة ، للذوبان مستقبلات انترلوكين 7 في العينة ملزمة الأجسام المضادة الصلبة . انزيم المسمى الأجسام المضادة للمستقبلات انترلوكين 7 ثم تضاف إلى شكل " الأجسام المضادة للمستقبلات انترلوكين 7-receptor-enzyme-labelled الصلبة الأجسام المضادة " معقدة مع المستقبلات التي تم ربط المرحلة الصلبة . بعد الغسيل ، unconjugated المسألة أزيلت ، الركيزة الحل ( على سبيل المثال ، TMB ) أضيفت ، واللون رد فعل الركيزة وقعت في إطار العمل من الانزيم المحفز ، وعمق اللون يتناسب مع محتوى قابل للذوبان مستقبلات انترلوكين 7 في العينة . تركيز المستقبلات في عينة يمكن حسابها عن طريق قياس الامتصاصية في الطول الموجي محددة ( عادة 450nm ) مع انزيم أداة رسم الخرائط مقارنة مع معيار منحنى .
تكوين عدة
انزيم مرتبط لوحة96 أو 48 المسام ، قبل المغلفة مع الأجسام المضادة مستقبلات انترلوكين 7 للذوبان ، هو رد فعل الناقل .
معيار المنتج: عادة تجميد المجفف ، وهناك 2 زجاجات . قبل الاستخدام ، من الضروري استخدام معيار تمييع حل و تمييع في تركيزات مختلفة من التدرج ، مثل 0 , 31.2 , 62.5 , 125 , 250 , 500 , 1000 بيكوغرام / مل ، وما إلى ذلك ، من أجل رسم منحنى القياسية .
عينة الحادي عشر الإصدارفائدة نموذج يستخدم في تمييع العينة التي يتم اختبارها مع تركيز عال جدا ، وضمان تركيز العينة في الكشف عن مجموعة من مجموعات .
انزيم المسمى الضدوهي HRP المسمى الأجسام المضادة مستقبلات انترلوكين 7 للذوبان ، هو تركيز السائل ، عندما تستخدم مع تمييع انزيم المسمى الضد .
انزيم المسمى الضد مخفف: خصوصا لأنّ تمييع انزيم المسمى الأجسام المضادة .
الركيزة الحلعلى سبيل المثال ، TMB الركيزة يمكن أن تتفاعل مع HRP في انزيم المسمى الأجسام المضادة لإنتاج لون التغيير .
سائل الغسيلعموما هو تركيز السائل ، تحتاج إلى استخدام نسبة الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء المخفف ، تستخدم لغسل انزيم ربط لوحة ، وإزالة المواد غير الملزمة ، والحد من خلفية التدخل .
إنهاء السائلأكثر من حمض قوي الحل ( مثل حامض الكبريتيك ) المستخدمة في إنهاء الركيزة لون رد فعل ، حتى أن رد فعل السائل اللون مستقرة وسهلة القراءة .
لوحة ختم الفيلمفائدة نموذج يستخدم لتغطية انزيم ربط لوحة في عملية الاحتباس الحراري لمنع تبخر السائل والتلوث الخارجي .
دليل الاستخدامطرق الاستخدام ، والمسائل التي تحتاج الى اهتمام ، مؤشرات الأداء ، وما إلى ذلك من عدة عرض بالتفصيل .
متطلبات العينة
سيرومجمع الدم في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة أو 4 ℃ بين عشية وضحاها ، 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة . جمع الدم يجب أن تكون خالية من المواد المسببة للحمى و الذيفان الداخلي .
البلازمايمكن استخدام يدتا ، الهيبارين وغيرها من مضادات التخثر . في غضون 30 دقيقة بعد أخذ العينات ، 1000 × ز الطرد المركزي في 2-8 ℃ لمدة 15 دقيقة .
خلية ثقافة طافالخلايا المستزرعة supernatants 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة بعد إزالة الحطام والشوائب .
نسيج متجانسشطف الأنسجة مع precooled برنامج تلفزيوني ، وإزالة بقايا الدم ، وقطع الأنسجة ، إضافة إلى برنامج تلفزيوني في 1 : 9 ( ث / ت ) ، وطحن تماما على الجليد . بعد 5-10 دقائق من 5000 * ز الطرد المركزي ، طاف يؤخذ اختبار .
إذا كانت العينات التي تم جمعها في غضون فترة قصيرة من الزمن ، يمكن تخزينها في 4 ℃ . . . . . . . إذا كان الحفاظ على المدى الطويل ، تحتاج إلى - 20 ℃ أو - 80 ℃ التجميد تحسن ، وتجنب تكرار التجميد تحسن ، انحلال الدم عينة ليست مناسبة للكشف .
عملية تدفق
الأعمال التحضيريةإزالة عدة من الثلاجة ، والتوازن في درجة حرارة الغرفة ( حوالي 30 دقيقة ) . تمييع تتركز المنظفات .
إضافة عينةمجموعة فارغة ثقب ، ثقب عينة القياسية . عينة الحادي عشر الافراج عن السائل أضيفت إلى ثقب فارغ ، تركيز مختلفة من المواد القياسية أضيفت إلى ثقب القياسية ، وتجهيز العينات أضيفت إلى ثقب العينة ، وكمية من العينات عادة 100
غسلالتخلص من السائل في حفرة ، ملء كل حفرة مع سائل الغسيل ، نقع في 1-2 دقيقة ثم تجف ، كرر الغسيل 5 مرات ، تأكد من أن المواد غير الملزمة غسلها .
إضافة انزيم المسمى الضدإضافة 100 ميكرولتر في كل مسام و تمييع الأجسام المضادة enzymic المسمى حل العمل لمدة 60 دقيقة في 37 ℃ . . . . . . .
غسل مرة أخرى: نفس الخطوات الغسيل المذكورة أعلاه .
وضع اللونإضافة 90 μ ل الركيزة الحل في كل مسام ، مزيج لطيف ، وتجنب الضوء في 37 ℃ لمدة 15-30 دقيقة ( حسب اللون الفعلي الحكم ) .
إنهاء الردإضافة 50 μ ل إنهاء الحل في كل حفرة ، تغيير لون الحل من الأزرق إلى الأصفر .
قراءاتالامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) من كل ثقب تم قياسها في 450nm الطول الموجي مع انزيم المسمى الصك في غضون 15 دقيقة بعد إضافة إنهاء الحل .
حساب النتائجرسم المنحنى القياسي مع تركيز المواد القياسية الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي . تركيز المقابلة يمكن العثور عليها في منحنى القياسية حسب قيمة التطوير التنظيمي من العينة ، إذا كانت العينة المخففة ، يجب أن تتضاعف في المقابل تخفيف متعددة للحصول على التركيز الفعلي .
مؤشرات الأداء
كشف مدىفي فترات مختلفة ، مثل 31.2-2000 بيكوغرام / مل ، يمكن أن تلبي متطلبات الكشف عن مستقبلات انترلوكين 7 للذوبان في عينات مختلفة .
حساسيةيمكن أن تصل إلى 15.6 بيكوغرام / مل أو أقل ، ويمكن الكشف عن كمية صغيرة من هذه المستقبلات في العينة .
خصوصيةالخلاصة : هذا الاختراع قد خصوصية عالية للذوبان انترلوكين 7 مستقبلات ، لا عبر التفاعل مع غيرها من المواد مثل مستقبلات سيتوكين . . . . . . .
تكرارمعامل الاختلاف في لوحة أقل من 10 ٪ ، معامل الاختلاف بين لوحات أقل من 15 ٪ ، والتي تضمن الاستقرار والموثوقية من نتائج الاختبار .
ملاحظة
تعمل بدقة وفقا للتعليمات ، مجموعات من دفعات مختلفة لا يمكن أن تكون مختلطة .
استخدام المتاح شفط الرأس في عملية التشغيل ، وتجنب التلوث الصليب ، إضافة عينة دقيقة .
غسل كامل هو المفتاح لضمان دقة النتائج ، لوحة الغسيل لا cheche أسفل يؤدي بسهولة إلى إيجابية كاذبة .
الركيزة الحل حساس للضوء ، تحتاج إلى تجنب الضوء والحفاظ على استخدام اللون رد فعل يجب أن تتم في ظل حالة من الضوء .
وقف السائل للتآكل ، وإيلاء الاهتمام إلى الحماية أثناء العملية ، وتجنب الاتصال مع الجلد والعينين .
من أجل تحسين دقة النتائج ، فمن المستحسن أن جميع العينات القياسية يجب أن يتم الكشف عن ثقب مزدوج . كاشف عدة تستخدم فقط في البحث العلمي و لا يمكن استخدامها في التشخيص السريري .
