انترلوكين 7 إليسا كيت

انترلوكين 7 إليسا كيت

انترلوكين 7 إليسا كيتهو أداة تستخدم عادة في البحث العلمي ، والتي يمكن استخدامها لتحديد كمية انترلوكين - 7 في العينات البيولوجية . انترلوكين 7 ( IL - 7 ) هو بروتين قابل للذوبان يفرز 25kda ترميز الجينات IL - 7 ، الذي ينتمي إلى عائلة من العوامل المكونة للدم ، ويلعب دورا رئيسيا في تمايز الخلايا اللمفاوية ، انتشار والبقاء على قيد الحياة . هذه المجموعة يمكن أن تساعد في البحث عن آلية الأمراض ذات الصلة ، وتطوير الأدوية ، الخ .

1. تكوين عدة

• انزيم مرتبط لوحة: 96 أو 48 المسام ، والتي كانت قبل المغلفة مع الأجسام المضادة IL - 7 ، كما فعل الناقل .

• معيار المنتجعادة تجميد المجفف ، وعادة ما يكون 2 زجاجات . قبل الاستخدام ، يجب استخدام معيار حل تمييع ، تمييع في تركيزات مختلفة من التدرج ، مثل 0 ، 15.6 ، 31.2 ، 62.5 ، 125 ، 250 ، 500 ، 1000 بيكوغرام / مل ، الخ ، من أجل رسم منحنى القياسية .

• عينة الحادي عشر الإصدارفائدة نموذج يستخدم في تمييع العينة التي يتم اختبارها مع تركيز عال جدا ، والتأكد من أن تركيز العينة في نطاق الكشف الفعال من عدة .

• انزيم المسمى الضدوهي HRP المسمى anti-il-7 الضد ، هو تركيز السائل ، واستخدام وفقا لمتطلبات استخدام انزيم المسمى الضد المخفف .

• انزيم المسمى الضد مخفف: خصوصا لأنّ تمييع انزيم المسمى الأجسام المضادة .

• الركيزة الحلعلى سبيل المثال ، TMB الركيزة ، يمكن أن تتفاعل مع الأجسام المضادة المسمى HRP ، مما أدى إلى تغيير اللون .

• سائل الغسيلعموما هو تركيز السائل ، تحتاج إلى استخدام نسبة معينة من الماء المقطر أو منزوع الأيونات تمييع المياه المستخدمة لغسل انزيم مرتبط لوحة ، وإزالة المواد غير الملزمة ، والحد بشكل فعال من خلفية التدخل .

• إنهاء السائلأكثر من حمض قوي الحل ( مثل حامض الكبريتيك ) المستخدمة في إنهاء الركيزة لون رد فعل ، حتى أن رد فعل السائل لون مستقر ، من السهل متابعة القراءة .

• لوحة ختم الفيلمفائدة نموذج يستخدم لتغطية انزيم ربط لوحة في عملية الاحتباس الحراري لمنع تبخر السائل والتلوث الخارجي .

• دليل الاستخدامطرق الاستخدام ، والمسائل التي تحتاج الى اهتمام ، مؤشرات الأداء ، وما إلى ذلك من عدة عرض بالتفصيل .

2. متطلبات العينة

• سيرومبعد جمع الدم ، والحفاظ على درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة أو 4 ℃ بين عشية وضحاها ، ثم طرد مع 1000 × ز لمدة 20 دقيقة . جمع الدم يجب أن تكون خالية من المواد المسببة للحمى و الذيفان الداخلي .

• البلازمايمكن استخدام الإيثيلين ديامينى حمض الخليك ( EDTA ) ، الهيبارين ، مثل مضادات التخثر . في غضون 30 دقيقة بعد أخذ العينات ، الطرد المركزي في 2-8 ℃ 1000 × ز لمدة 15 دقيقة .

• خلية ثقافة طافالخلايا المستزرعة supernatants كانت centrifuged بواسطة 1000 * ز لمدة 20 دقيقة بعد إزالة الحطام والشوائب .

• نسيج متجانسغسل الأنسجة مع precooled الفوسفات العازلة ( برنامج تلفزيوني ، 0.01m ، الرقم الهيدروجيني = 7-4 ) ، وإزالة بقايا الدم من che-base . . . . . . . بعد قطع ، إضافة برنامج تلفزيوني في حوالي 1 : 9 ( ث / ت ) نسبة ، وطحن تماما على الجليد . بعد 5-10 دقائق من 5000 * ز الطرد المركزي ، طاف يؤخذ اختبار .

• إذا كانت العينات التي تم جمعها في وقت قصير بعد الاختبار ، يمكن تخزينها في 4 ℃ ؛ إذا كان يحتاج إلى وقت طويل للحفاظ على ، تحتاج إلى أن توضع في - 20 ℃ أو - 80 ℃ التجميد والذوبان ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان ، انحلال الدم عينة ليست مناسبة للكشف .

3. عملية تدفق

• الأعمال التحضيريةإزالة عدة من الثلاجة قبل 30 دقيقة إلى درجة حرارة الغرفة . وفي الوقت نفسه ، تتركز غسل السائل المخفف مع الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء حسب النسبة المطلوبة .

• إضافة عينةمجموعة فارغة ثقب ، ثقب عينة القياسية . عينة الحادي عشر الافراج عن السائل أضيفت إلى ثقب فارغ ، تركيز مختلفة من المواد القياسية أضيفت إلى ثقب القياسية ، وتجهيز العينات أضيفت إلى ثقب العينة ، وكمية من العينات عادة 100

• غسلبعد الانتهاء من الحارة ، والتخلص من السائل في حفرة ، ملء كل حفرة مع سائل الغسيل ، نقع في 1-2 دقيقة ثم تجف ، كرر الغسيل 5 مرات ، تأكد من أن che-bottom غسلها بدون مواد لاصقة .

• إضافة انزيم المسمى الضدإضافة 100 ميكرولتر في كل مسام و تمييع الأجسام المضادة enzymic المسمى حل العمل لمدة 60 دقيقة في 37 ℃ . . . . . . .

• غسل مرة أخرىكرر الخطوات المذكورة أعلاه .

• وضع اللونإضافة 90 μ ل الركيزة الحل في كل مسام ، مزيج لطيف ، وتجنب الضوء في 37 ℃ لمدة 15-30 دقيقة ( حسب اللون الفعلي الحكم ) .

• إنهاء الردإضافة 50 μ ل إنهاء الحل في كل حفرة ، تغيير لون الحل من الأزرق إلى الأصفر .

• قراءاتالامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) من كل ثقب تم قياسها في 450nm الطول الموجي مع انزيم المسمى الصك في غضون 15 دقيقة بعد إضافة إنهاء الحل .

• حساب النتائجرسم المنحنى القياسي مع تركيز المواد القياسية الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي . إذا كانت العينة مخففة ، يجب أن تتضاعف في المقابل تخفيف متعددة ، وبالتالي الحصول على التركيز الفعلي .

4. مؤشرات الأداء

• كشف مدىهناك بعض الاختلافات بين مجموعات مختلفة ، مجموعة مشتركة من 15.6-1000 بيكوغرام / مل ، والتي يمكن أن تلبي متطلبات الكشف عن محتوى IL - 7 في مجموعة متنوعة من العينات .

• حساسيةعموما ، يمكن أن تكون منخفضة مثل 7.8 بيكوغرام / مل أو أقل ، يمكن الكشف عن أثر IL - 7 في العينة .

• خصوصية: IL - 7 محددة للغاية ، مع غيرها من السيتوكينات وغيرها من المواد تقريبا أي رد فعل الصليب .

• تكرارمعامل الاختلاف في لوحة أقل من 10 ٪ ، معامل الاختلاف بين لوحات أقل من 15 ٪ ، والتي تضمن الاستقرار والموثوقية من نتائج الاختبار .