إليسا عدة مستقبلات انترلوكين 6 ( القابلة للذوبان ) تم تطبيقها على نطاق واسع في البحث العلمي .
مستقبلات انترلوكين 6 ، ذوبان إليسا كيت
مستقبلات انترلوكين 6 ، ذوبان إليسا كيتتهدف إلى الكشف عن كمية من ذوبان مستقبلات انترلوكين 6 في العينات البيولوجية ، وهي ذات أهمية كبيرة في مجال البحوث المناعية والتهاب .
مبدأ الكشفعلى أساس مزدوج ساندويتش انزيم مرتبط المناعي فحص الأجسام المضادة . انزيم مرتبط لوحة المغلفة مع الأجسام المضادة المحددة ضد مستقبلات انترلوكين 6 القابلة للذوبان . بعد إضافة العينة ، للذوبان مستقبلات انترلوكين 6 ملزمة الأجسام المضادة الصلبة . في وقت لاحق ، انزيم المسمى anti-soluble مستقبلات انترلوكين 6 الأجسام المضادة أضيفت إلى شكل " الصلبة مرحلة الأجسام المضادة مستقبلات انترلوكين 6-soluble-soluble-enzymic المسمى الأجسام المضادة " معقدة . بعد الغسيل ، unconjugates إزالتها ، الركيزة الحل ( مثل TMB ) أضيفت إلى الركيزة اللونية تحت حفز الانزيم . تركيز قابل للذوبان مستقبلات انترلوكين 6 في عينة تم الحصول عليها من خلال مقارنة مع معيار منحنى الامتصاص في 450nm الطول الموجي .
تكوين عدة
انزيم مرتبط لوحةهناك 96 أو 48 حفرة المواصفات ، قبل المغلفة الأجسام المضادة ، رد فعل الناقل .
معيار المنتجعادة ما تكون المنتجات المجففة بالتجميد ، تحتاج إلى إعادة حل مع معيار المخفف و تمييع في سلسلة من التدرج في التركيز ، مثل 0 ، 15.6 ، 31.2 ، 62.5 ، 125 ، 250 ، 500 ، 1000 بيكوغرام / مل ، رسم المنحنى القياسي .
عينة الحادي عشر الإصدارتستخدم في تمييع العينة التي هي عالية جدا في التركيز ، مما يجعل تركيز العينة مناسبة للكشف عن مجموعة من مجموعات .
انزيم المسمى الضدوهي HRP المسمى الأجسام المضادة مستقبلات انترلوكين 6 للذوبان ، والتركيز ، تحتاج إلى استخدام انزيم المسمى الضد المخفف وفقا لمتطلبات .
انزيم المسمى الضد مخفف: خصوصا لأنّ تمييع انزيم المسمى الأجسام المضادة .
الركيزة الحلعلى سبيل المثال ، TMB الركيزة ، يتفاعل مع HRP في انزيم المسمى الأجسام المضادة لإنتاج لون التغييرات .
سائل الغسيلعادة ما تكون مركزة ، المخفف مع الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء في نسبة ، وتستخدم لغسل انزيم ربط لوحة ، وإزالة المواد غير الملزمة ، والحد من خلفية التدخل .
إنهاء السائلأكثر من حل حامض قوي ( مثل حامض الكبريتيك ) المستخدمة في إنهاء الركيزة لون رد فعل ، رد فعل السائل استقرار اللون من أجل القراءة .
لوحة ختم الفيلمتغطية لوحة enzymic خلال فترة الحضانة لمنع تبخر السائل والتلوث الخارجي .
دليل الاستخدامطرق الاستخدام ، والمسائل التي تحتاج الى اهتمام ، مؤشرات الأداء ، الخ .
متطلبات العينة
سيرومبعد جمع الدم ، وضعت في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة أو 4 ℃ بين عشية وضحاها ، 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة للحصول على طاف ، وأخذ عينات الدم تحتاج إلى استخدام أي مولد الحمى ، لا الذيفان الداخلي المتاح المعدات .
البلازمايمكن استخدام يدتا ، الهيبارين لمنع تخثر الدم ، وجمع العينات في 30 دقيقة ، 2-8 ℃ 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة .
خلية ثقافة طافالطرد المركزي : 1000 * ز لمدة 20 دقيقة ، وإزالة الخلايا الحطام والشوائب ، ثم أخذ طاف الكشف .
نسيج متجانسشطف الأنسجة مع precooled برنامج تلفزيوني ( 0.01m ، الرقم الهيدروجيني = 7-4 ) ، وإزالة بقايا الدم ، وقطع الأنسجة ، إضافة برنامج تلفزيوني في 1 : 9 ( ث / ت ) ، تماما الأرض على الجليد ، 5 ، 000 × ز الطرد المركزي لمدة 5-10 دقائق .
إذا كانت العينات التي تم جمعها في غضون فترة قصيرة من الزمن ، يمكن تخزينها في 4 ℃ . . . . . . . الحفاظ على المدى الطويل يجب أن تكون - 20 ℃ أو - 80 ℃ المجمدة ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان ، انحلال الدم عينات عموما ليست مناسبة للكشف .
عملية تدفق
الأعمال التحضيريةإزالة عدة من الثلاجة ، والتوازن في درجة حرارة الغرفة ( حوالي 30 دقيقة ) ، تمييع تتركز المنظفات .
إضافة عينةمجموعة فارغة ثقب ، ثقب عينة القياسية . عينة فارغة ثقب زائد الحادي عشر الافراج عن السائل ، ثقب القياسية بالإضافة إلى تركيزات مختلفة من المواد القياسية ، عينة ثقب بالإضافة إلى معالجة العينات ، عينة من كل ثقب عادة إضافة 100 ميكرولتر ، بلطف مختلطة ، 37 ℃ 90 دقيقة من الحضانة .
غسلالتخلص من السائل في حفرة ، ملء كل حفرة مع سائل الغسيل ، نقع في 1-2 دقيقة ثم تجف ، كرر الغسيل 5 مرات ، تأكد من أن المواد غير الملزمة غسلها .
إضافة انزيم المسمى الضدإضافة 100 ميكرولتر في كل مسام تضعف انزيم المسمى الضد السائل العامل ، 37 ℃ لمدة 60 دقيقة .
غسل مرة أخرىكرر الخطوات المذكورة أعلاه .
وضع اللونإضافة 90 μ ل الركيزة الحل في كل مسام ، مزيج لطيف ، وتجنب الضوء في 37 ℃ لمدة 15-30 دقيقة ( حسب اللون الفعلي الحكم ) .
إنهاء الردإضافة 50 μ ل إنهاء الحل في كل حفرة ، تغيير لون الحل من الأزرق إلى الأصفر .
قراءاتالامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) من كل مسام تم قياسها في 450nm بواسطة انزيم أداة رسم الخرائط في غضون 15 دقيقة بعد إضافة إنهاء الحل .
حساب النتائجرسم المنحنى القياسي باستخدام معيار تركيز الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي . إذا كانت العينة مخففة ، يجب أن تتضاعف في المقابل تخفيف متعددة للحصول على التركيز الفعلي .
مؤشرات الأداء
كشف مدىالمشترك هو 15.6-1000 بيكوغرام / مل الفاصل الزمني ، لتلبية مجموعة متنوعة من متطلبات الكشف عن عينة .
حساسيةيمكن أن تصل إلى 7.8 بيكوغرام / مل أو أقل ، يمكن الكشف عن كمية صغيرة من ذوبان مستقبلات انترلوكين 6 .
خصوصيةمستقبلات محددة للغاية ، مع القليل من التفاعل مع غيرها من السيتوكينات المستقبلات .
تكرارمعامل الاختلاف داخل المجلس هو عادة أقل من 10 ٪ ، معامل الاختلاف بين المجلس هو أقل من 15 ٪ ، وضمان نتائج الاختبار مستقرة وموثوق بها .
