إليسا كيت انترلوكين 6 ( IL - 6 ) كانت تستخدم لتحديد IL - 6 في عينات من مصل الدم باستخدام مزدوج ساندويتش إليسا .
انترلوكين 6 إليسا كيت
انترلوكين 6 إليسا كيتهو أداة تستخدم في الكشف عن كمية انترلوكين 6 في عينات بيولوجية ، ويستخدم على نطاق واسع في مجال علم المناعة والتهاب البحث . وفيما يلي مقدمة لك :
مبدأ الكشفمزدوجة ساندويتش إليسا الأضداد المستخدمة . انزيم مرتبط لوحات في عدة كانت مغلفة مع الأجسام المضادة المحددة ضد IL - 6 . بعد إضافة العينة ، IL - 6 في عينة محددة ملزمة مع الأجسام المضادة الصلبة على شكل مستضد الضد المعقدة . في وقت لاحق ، انزيم المسمى anti-il-6 أضداد أضيفت إلى مزيد من التفاعل مع الأجسام المضادة IL-6 ملزمة على شكل شطيرة هيكل " الأجسام المضادة الصلبة IL - 6 انزيم المسمى الضد " . بعد عملية الغسيل ، غير ملزمة المواد إزالتها ، ثم الركيزة الحل ( مثل TMB ) يضاف . تحت حفز الانزيم ، الركيزة تنتج لون رد الفعل ، و عمق اللون يتناسب مع محتوى IL - 6 في العينة . تركيز IL - 6 في عينات يمكن حسابها من خلال قياس الامتصاص في الطول الموجي محددة ( عادة 450nm ) مع انزيم أداة رسم الخرائط .
تكوين عدة
انزيم مرتبط لوحةهناك 96 أو 48 حفرة المواصفات ، قبل المغلفة مع الأجسام المضادة IL - 6 ، هو رد فعل الناقل .
معيار المنتجعادة تجميد المجفف ، وعادة ما يكون 2 زجاجات . قبل الاستخدام ، من الضروري استخدام معيار تمييع حل ، تمييع في تركيزات مختلفة من التدرج ، مثل 0 , 15.6 , 31.2 , 62.5 , 125 , 250 , 500 , 1000 بيكوغرام / مل ، وما إلى ذلك ، من أجل رسم منحنى القياسية .
عينة الحادي عشر الإصدارتستخدم في تمييع العينة التي هي عالية جدا في تركيز الاختبار ، وضمان تركيز العينة في الكشف عن مجموعة من مجموعات .
انزيم المسمى الضدوهي HRP المسمى anti-il-6 الضد ، هو تركيز السائل ، تحتاج إلى استخدام انزيم المسمى الضد المخفف وفقا لمتطلبات تمييع .
انزيم المسمى الضد مخفف: خصوصا لأنّ تمييع انزيم المسمى الأجسام المضادة .
الركيزة الحلعلى سبيل المثال ، TMB الركيزة يتفاعل مع HRP في انزيم المسمى الأجسام المضادة لإنتاج لون التغيير .
سائل الغسيلمعظم التركيز ، استخدام نسبة تمييع مع الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء لغسل انزيم مرتبط لوحة ، وإزالة المواد غير الملزمة ، والحد من خلفية التدخل .
إنهاء السائلعموما هو حل حامض قوي ( مثل حامض الكبريتيك ) المستخدمة في إنهاء رد فعل الركيزة اللونية ، حتى أن رد فعل السائل اللون مستقرة وسهلة القراءة .
لوحة ختم الفيلمتغطية لوحة enzymic خلال فترة الحضانة لمنع تبخر السائل والتلوث الخارجي .
دليل الاستخدامطرق الاستخدام ، والمسائل التي تحتاج الى اهتمام ، مؤشرات الأداء ، وما إلى ذلك من عدة عرض بالتفصيل .
متطلبات العينة
سيرومجمع الدم في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة أو 4 ℃ بين عشية وضحاها ، 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة . جمع الدم يجب أن تكون خالية من المواد المسببة للحمى و الذيفان الداخلي .
البلازمايمكن استخدام يدتا ، الهيبارين وغيرها من مضادات التخثر . في غضون 30 دقيقة بعد أخذ العينات ، 1000 × ز الطرد المركزي في 2-8 ℃ لمدة 15 دقيقة .
خلية ثقافة طافالثقافة طاف 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة ، ثم إزالة الحطام والشوائب .
نسيج متجانسغسل الأنسجة مع precooled الفوسفات العازلة ( برنامج تلفزيوني ، 0.01m ، الرقم الهيدروجيني = 7-4 ) لإزالة بقايا الدم . بعد قطع ، إضافة برنامج تلفزيوني في 1 : 9 ( ث / ت ) و الأرض على الجليد . بعد 5-10 دقائق من 5000 * ز الطرد المركزي ، طاف يؤخذ اختبار .
بعد أخذ العينات ، إذا كان الكشف في وقت قصير ، يمكن تخزينها في 4 ℃ ؛ إذا كان يحتاج إلى وقت طويل للحفاظ على ، تحتاج إلى أن توضع في - 20 ℃ أو - 80 ℃ التجميد والذوبان ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان ، انحلال الدم عينة ليست مناسبة للكشف .
عملية تدفق
الأعمال التحضيريةإزالة عدة من الثلاجة ، وتحقيق التوازن بين 30 دقيقة في وقت مبكر إلى درجة حرارة الغرفة . وفي الوقت نفسه ، تتركز غسل السائل المخفف مع الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء حسب النسبة المطلوبة .
إضافة عينةمجموعة فارغة ثقب ، ثقب عينة القياسية . عينة الحادي عشر الافراج عن السائل أضيفت إلى ثقب فارغ ، تركيز مختلفة من المواد القياسية أضيفت إلى ثقب القياسية ، وتجهيز العينات أضيفت إلى ثقب العينة ، وكمية من العينات عادة 100
غسلبعد الانتهاء من الحارة ، والتخلص من السائل في حفرة ، ملء كل حفرة مع سائل الغسيل ، نقع في 1-2 دقيقة ثم تجف ، كرر الغسيل 5 مرات ، تأكد من أن che-bottom غسلها بدون مواد لاصقة .
إضافة انزيم المسمى الضدإضافة 100 ميكرولتر في كل مسام و تمييع الأجسام المضادة enzymic المسمى حل العمل لمدة 60 دقيقة في 37 ℃ . . . . . . .
غسل مرة أخرىكرر الخطوات المذكورة أعلاه .
وضع اللونإضافة 90 μ ل الركيزة الحل في كل مسام ، مزيج لطيف ، وتجنب الضوء في 37 ℃ لمدة 15-30 دقيقة ( حسب اللون الفعلي الحكم ) .
إنهاء الردإضافة 50 μ ل إنهاء الحل في كل حفرة ، تغيير لون الحل من الأزرق إلى الأصفر .
قراءاتالامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) من كل ثقب تم قياسها في 450nm الطول الموجي مع انزيم المسمى الصك في غضون 15 دقيقة بعد إضافة إنهاء الحل .
حساب النتائجرسم المنحنى القياسي مع تركيز المواد القياسية الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي . إذا كانت العينة مخففة ، يجب أن تتضاعف في المقابل تخفيف متعددة ، وبالتالي الحصول على التركيز الفعلي .
مؤشرات الأداء
كشف مدىهناك بعض الاختلافات بين مجموعات مختلفة ، مجموعة مشتركة من 15.6-1000 بيكوغرام / مل ، والتي يمكن أن تلبي متطلبات الكشف عن محتوى IL - 6 في مجموعة متنوعة من العينات .
حساسيةعموما ، يمكن أن تكون منخفضة مثل 7.8 بيكوغرام / مل أو أقل ، يمكن الكشف عن أثر IL - 6 في العينة .
خصوصية: IL - 6 محددة للغاية ، مع غيرها من السيتوكينات وغيرها من المواد تقريبا أي رد فعل الصليب .
تكرارمعامل الاختلاف في لوحة أقل من 10 ٪ ، معامل الاختلاف بين لوحات أقل من 15 ٪ ، والتي تضمن الاستقرار والموثوقية من نتائج الاختبار .
