مستقبلات انترلوكين 5 ( القابلة للذوبان ) طقم إليسا ، وذلك باستخدام تقنية مزدوجة ساندويتش إليسا ، دقة تحديد المصل وغيرها من العينات من مستقبلات ، عملية بسيطة ، وتعزيز الحصانة وغيرها من مجالات البحث العلمي .
مستقبلات انترلوكين 5 ، ذوبان إليسا كيت
مستقبلات انترلوكين 5 ، ذوبان إليسا كيتهو أداة تستخدم في الكشف عن كمية ذوبان مستقبلات انترلوكين 5 المحتوى في العينات البيولوجية ، ويلعب دورا هاما في مجال البحث العلمي ، ويساعد على فهم عميق immunoregulation ، التهاب وغيرها من العمليات الفسيولوجية والمرضية . وفيما يلي مقدمة من العديد من الطرق بالنسبة لك :
مبدأ الكشفمزدوجة ساندويتش انزيم مرتبط المناعي فحص ( إليسا ) كان يعمل . إليسا عدة المغلفة مع الأجسام المضادة المحددة ضد مستقبلات انترلوكين 5 القابلة للذوبان . عندما أضيفت إلى العينة ، للذوبان مستقبلات انترلوكين 5 في العينة على وجه التحديد ملزمة الأجسام المضادة الصلبة . انزيم المسمى الأجسام المضادة للمستقبلات انترلوكين 5 للذوبان ثم تضاف على شكل " الأجسام المضادة للمستقبلات انترلوكين 5 للذوبان الصلبة الأجسام المضادة للمستقبلات التي تربط الأجسام المضادة انزيم المسمى " معقدة . بعد ما يكفي من الغسيل ، إزالة المواد غير الملزمة ، ثم إضافة الركيزة الحل ( على سبيل المثال ، 3 ، 3 ، 5 ، 5 ' - tetramethyl ثنائي فينيلامين ، TMB ) . في إطار تحفيز انزيم انزيم المسمى الأجسام المضادة ، الركيزة تنتج رد فعل اللون ، وعمق اللون يتناسب مع محتوى قابل للذوبان مستقبلات انترلوكين 5 في العينة . من خلال قياس الامتصاصية في الطول الموجي محددة ( عادة 450nm ) مع انزيم أداة رسم الخرائط ، مقارنة مع معيار منحنى ، تركيز المستقبلات في العينة يمكن حسابها .
تكوين عدة
انزيم مرتبط لوحةهناك 96 حفرة أو 48 حفرة المواصفات التي كانت قبل المغلفة مع الأجسام المضادة مستقبلات انترلوكين 5 القابلة للذوبان ، هو رد فعل الناقل .
معيار المنتجعادة تجميد المجفف ، وعادة ما تكون مجهزة 2 زجاجات . قبل الاستخدام ، من الضروري إعادة حل مع معيار تمييع ، تمييع في تركيزات مختلفة من التدرج ، مثل 0 ، 15.6 ، 31-2 ، 62.5 ، 125 ، 250 ، 500 ، 1000 بيكوغرام / مل ، الخ .
عينة الحادي عشر الإصدارفائدة نموذج يستخدم في تمييع العينة التي يتم اختبارها مع تركيز عال جدا ، والتأكد من أن تركيز العينة في نطاق الكشف الفعال من عدة .
انزيم المسمى الضد( HRP هورس راديش پراكسيداز ) المسمى الأجسام المضادة مستقبلات انترلوكين 5 للذوبان ، هو تركيز السائل ، عندما تستخدم في حاجة إلى تمييع مع انزيم المسمى الضد المخفف .
انزيم المسمى الضد مخفف: خصوصا لأنّ تمييع انزيم المسمى الأجسام المضادة .
الركيزة الحلعلى سبيل المثال ، TMB الركيزة ، يمكن أن تتفاعل مع الأجسام المضادة المسمى HRP ، مما أدى إلى تغيير اللون .
سائل الغسيلعموما هو تركيز السائل ، تحتاج إلى استخدام نسبة معينة من الماء المقطر أو الماء منزوع الأيونات المخفف ، غسل انزيم مرتبط لوحة ، وإزالة المواد غير الملزمة ، والحد من خلفية التدخل .
إنهاء السائلأكثر من حمض قوي الحل ( مثل حامض الكبريتيك ) المستخدمة في إنهاء الركيزة لون رد فعل ، حتى أن رد فعل السائل اللون مستقرة وسهلة القراءة .
لوحة ختم الفيلمتغطية لوحة enzymic خلال فترة الحضانة لمنع تبخر السائل والتلوث الخارجي .
دليل الاستخدامطرق الاستخدام ، والمسائل التي تحتاج الى اهتمام ، مؤشرات الأداء ، وما إلى ذلك من عدة عرض بالتفصيل .
متطلبات العينة
سيرومبعد جمع الدم ، وضعت في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة أو 4 ℃ بين عشية وضحاها ، ثم طرد مع 1000 × ز لمدة 20 دقيقة . جمع الدم يجب أن تكون خالية من المواد المسببة للحمى و الذيفان الداخلي .
البلازمايمكن استخدام الإيثيلين ديامينى حمض الخليك ( EDTA ) ، الهيبارين ، مثل مضادات التخثر . في غضون 30 دقيقة بعد أخذ العينات ، الطرد المركزي في 2-8 ℃ 1000 × ز لمدة 15 دقيقة .
خلية ثقافة طافالخلايا المستزرعة supernatants كانت centrifuged بواسطة 1000 * ز لمدة 20 دقيقة بعد إزالة الحطام والشوائب .
نسيج متجانسغسل الأنسجة مع precooled الفوسفات العازلة ( برنامج تلفزيوني ، 0.01m ، الرقم الهيدروجيني = 7-4 ) لإزالة بقايا الدم . بعد قطع ، إضافة برنامج تلفزيوني في حوالي 1 : 9 ( ث / ت ) نسبة ، وطحن تماما على الجليد . بعد 5-10 دقائق من 5000 * ز الطرد المركزي ، طاف يؤخذ اختبار .
بعد أخذ العينات ، إذا كان الكشف في وقت قصير ، يمكن تخزينها في 4 ℃ ؛ إذا كان يحتاج إلى وقت طويل للحفاظ على ، تحتاج إلى أن توضع في - 20 ℃ أو - 80 ℃ التجميد والذوبان ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان ، انحلال الدم عينة ليست مناسبة للكشف .
عملية تدفق
الأعمال التحضيريةإزالة عدة من الثلاجة قبل 30 دقيقة إلى درجة حرارة الغرفة . وفي الوقت نفسه ، تتركز غسل السائل المخفف مع الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء حسب النسبة المطلوبة .
إضافة عينةمجموعة فارغة ثقب ، ثقب عينة القياسية . عينة الحادي عشر الافراج عن السائل أضيفت إلى ثقب فارغ ، تركيز مختلفة من المواد القياسية أضيفت إلى ثقب القياسية ، وتجهيز العينات أضيفت إلى ثقب العينة ، وكمية من العينات عادة 100
غسلبعد الانتهاء من الحارة ، والتخلص من السائل في حفرة ، ملء كل حفرة مع سائل الغسيل ، نقع في 1-2 دقيقة ثم تجف ، كرر الغسيل 5 مرات ، تأكد من أن che-bottom غسلها بدون مواد لاصقة .
إضافة انزيم المسمى الضدإضافة 100 ميكرولتر في كل مسام و تمييع الأجسام المضادة enzymic المسمى حل العمل لمدة 60 دقيقة في 37 ℃ . . . . . . .
غسل مرة أخرىكرر الخطوات المذكورة أعلاه .
وضع اللونإضافة 90 μ ل الركيزة الحل في كل مسام ، مزيج لطيف ، وتجنب الضوء في 37 ℃ لمدة 15-30 دقيقة ( حسب اللون الفعلي الحكم ) .
إنهاء الردإضافة 50 μ ل إنهاء الحل في كل حفرة ، تغيير لون الحل من الأزرق إلى الأصفر .
قراءاتالامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) من كل ثقب تم قياسها في 450nm الطول الموجي مع انزيم المسمى الصك في غضون 15 دقيقة بعد إضافة إنهاء الحل .
حساب النتائجرسم المنحنى القياسي مع تركيز المواد القياسية الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي . إذا كانت العينة مخففة ، يجب أن تتضاعف في المقابل تخفيف متعددة ، وبالتالي الحصول على التركيز الفعلي .
