انترلوكين - 5 إليسا كيت ، وذلك باستخدام تقنية مزدوجة ساندويتش إليسا ، دقة قياس مصل الدم وغيرها من عينات انترلوكين - 5 ، عملية مريحة ، وتعزيز المناعة والتهاب وغيرها من البحوث العلمية .
انترلوكين 5 إليسا كيت
انترلوكين 5 إليسا كيتهو أداة رئيسية في الكشف عن كمية interleukin-5 المحتوى في العينات البيولوجية في البحث العلمي ، الذي يوفر دعما قويا من أجل مزيد من التحقيق في آلية الاستجابة المناعية والتهاب .
مبدأ الكشفمزدوجة ساندويتش انزيم مرتبط المناعي فحص الأجسام المضادة المستخدمة . إليسا عدة المغلفة مع الأجسام المضادة المحددة ضد IL - 5 . عندما أضيفت إلى العينة ، IL - 5 في العينة على وجه التحديد ملزمة الأجسام المضادة الصلبة . ثم ، انزيم المسمى anti-il-5 أضداد أضيفت إلى شكل " الأجسام المضادة الصلبة il-5-enzyme المسمى الأجسام المضادة " معقدة . بعد الغسيل ، unconjugates أزيلت ، الركيزة الحل ( مثل TMB ) أضيفت ، واللون رد فعل الركيزة حدث تحت حفز الانزيم . قياس الامتصاصية في الطول الموجي 450nm بواسطة انزيم أداة رسم الخرائط ، مقارنة مع معيار منحنى ، ثم تركيز IL - 5 في العينة التي تم الحصول عليها .
تكوين عدة
انزيم مرتبط لوحةهناك 96 أو 48 المسام ، قبل المغلفة مع الأجسام المضادة ضد IL - 5 ، هو رد فعل الناقل .
معيار المنتجعادة تجميد المجفف ، وعادة ما يكون 2 زجاجات . قبل الاستخدام ، من الضروري إعادة حل مع معيار المخفف ، تمييع في تركيزات مختلفة من التدرج ، مثل 0 ، 7-8 ، 15-6 ، 31-2 ، 62.5 ، 125 ، 250 ، 500 بيكوغرام / مل ، وما إلى ذلك ، من أجل رسم منحنى القياسية .
عينة الحادي عشر الإصدارتستخدم في تمييع العينة التي هي عالية جدا في تركيز الاختبار ، وضمان تركيز العينة في نطاق اختبار عدة .
انزيم المسمى الضدHRP المسمى anti-il-5 الأجسام المضادة ، هو تركيز السائل ، عند الاستخدام ، تحتاج إلى استخدام انزيم المسمى الضد المخفف .
انزيم المسمى الضد مخفف: خصوصا لأنّ تمييع انزيم المسمى الأجسام المضادة .
الركيزة الحلعلى سبيل المثال ، TMB الركيزة ، يتفاعل مع HRP في انزيم المسمى الأجسام المضادة لإنتاج لون التغييرات .
سائل الغسيلمعظم التركيز ، استخدام نسبة تمييع مع الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء لغسل انزيم مرتبط لوحة ، وإزالة المواد غير الملزمة ، والحد من خلفية التدخل .
إنهاء السائلعموما هو حل حامض قوي ( مثل حامض الكبريتيك ) المستخدمة في إنهاء رد فعل الركيزة اللونية ، حتى أن رد فعل السائل اللون مستقرة وسهلة القراءة .
لوحة ختم الفيلمتغطية لوحة enzymic خلال فترة الحضانة لمنع تبخر السائل والتلوث الخارجي .
دليل الاستخدامطرق الاستخدام ، والمسائل التي تحتاج الى اهتمام ، مؤشرات الأداء ، وما إلى ذلك من عدة عرض بالتفصيل .
متطلبات العينة
سيرومجمع الدم في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة أو 4 ℃ بين عشية وضحاها ، 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة . جمع الدم يجب أن تكون خالية من المواد المسببة للحمى و الذيفان الداخلي .
البلازمايمكن استخدام يدتا ، الهيبارين وغيرها من مضادات التخثر . في غضون 30 دقيقة بعد أخذ العينات ، 1000 × ز الطرد المركزي في 2-8 ℃ لمدة 15 دقيقة .
خلية ثقافة طافالثقافة طاف 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة ، ثم إزالة الحطام والشوائب .
نسيج متجانسغسل الأنسجة مع precooled الفوسفات العازلة ( برنامج تلفزيوني ، 0.01m ، الرقم الهيدروجيني = 7-4 ) لإزالة بقايا الدم . بعد قطع ، إضافة برنامج تلفزيوني في 1 : 9 ( ث / ت ) و الأرض على الجليد . بعد 5-10 دقائق من 5000 * ز الطرد المركزي ، طاف يؤخذ اختبار .
بعد أخذ العينات ، إذا كان الكشف في وقت قصير ، يمكن تخزينها في 4 ℃ ؛ إذا كان يحتاج إلى وقت طويل للحفاظ على ، تحتاج إلى أن توضع في - 20 ℃ أو - 80 ℃ التجميد والذوبان ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان ، انحلال الدم عينة ليست مناسبة للكشف .
عملية تدفق
الأعمال التحضيريةإزالة عدة من الثلاجة ، وتحقيق التوازن بين 30 دقيقة في وقت مبكر إلى درجة حرارة الغرفة . وفي الوقت نفسه ، تتركز غسل السائل المخفف مع الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء حسب النسبة المطلوبة .
إضافة عينةمجموعة فارغة ثقب ، ثقب عينة القياسية . عينة الحادي عشر الافراج عن السائل أضيفت إلى ثقب فارغ ، تركيز مختلفة من المواد القياسية أضيفت إلى ثقب القياسية ، وتجهيز العينات أضيفت إلى ثقب العينة ، وكمية من العينات عادة 100
غسلبعد الانتهاء من الحارة ، والتخلص من السائل في حفرة ، ملء كل حفرة مع سائل الغسيل ، نقع في 1-2 دقيقة ثم تجف ، كرر الغسيل 5 مرات ، تأكد من أن che-bottom غسلها بدون مواد لاصقة .
إضافة انزيم المسمى الضدإضافة 100 ميكرولتر في كل مسام و تمييع الأجسام المضادة enzymic المسمى حل العمل لمدة 60 دقيقة في 37 ℃ . . . . . . .
غسل مرة أخرىكرر الخطوات المذكورة أعلاه .
وضع اللونإضافة 90 μ ل الركيزة الحل في كل مسام ، مزيج لطيف ، وتجنب الضوء في 37 ℃ لمدة 15-30 دقيقة ( حسب اللون الفعلي الحكم ) .
إنهاء الردإضافة 50 μ ل إنهاء الحل في كل حفرة ، تغيير لون الحل من الأزرق إلى الأصفر .
قراءاتالامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) من كل ثقب تم قياسها في 450nm الطول الموجي مع انزيم المسمى الصك في غضون 15 دقيقة بعد إضافة إنهاء الحل .
حساب النتائجرسم المنحنى القياسي مع تركيز المواد القياسية الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي . إذا كانت العينة مخففة ، يجب أن تتضاعف في المقابل تخفيف متعددة ، وبالتالي الحصول على التركيز الفعلي .
