خلية اللوكيميا الإنسان الوحيدات thp-1

خلية اللوكيميا الإنسان الوحيدات thp-1

THP1؛ O-THP-1؛ مستشفى توهوكو لطب الأطفال-1

تحديد الخلايا ل

شارع التوثيق قد مرت

ل مصدر الخلية

قاعدة الموارد الوطنية

ل خلية الخلفية

تم العثور على الدم المحيطي من 1 سنة من العمر الصبي الذي انتكس من سرطان الدم الحاد وحيدة ( AML ) في عام 1978 . هذه الخلية يمكن أن تبتلع حبات الحليب وتفعيل خلايا الدم الحمراء ، دون سطح السيتوبلازم المناعي . تمايز الخلايا وحيدة النواة يمكن أن يسببها فوبورول سكتة .

ملاحظة : nras الطفرات بشكل غير صحيح إلى p.gly12ser في مجلات = 9379676 . . . . . . .

ل خصائص الخلية

1 ) المصدر : سرطان الدم الحاد وحيدات ، وحيدات

2 ) التشكل : وحيدة ، تعليق

3 ) المحتوى : > عدد الخلايا 1x106

4 ) المواصفات : T25 زجاجة أو 1ml حزمة أنبوب التخزين المجمد

5 ) إستعمال : فقط لأنّ إستعمال علميّة

ل ظروف الثقافة

1 ) إعداد rpmi-1640 ( أوصت awcell-0002 ) متوسطة الثقافة ؛ مصل بقري جنيني عالي الجودة ، 10 ٪ ؛ 0.05 ملم β - كيو على أساس الإيثانول ( خلية ثقافة الصف : awcell-8211 ) ؛ ضعف المقاومة ، 1 ٪ .

2 ) إشارة مرور نسبة : كثافة الخلية التي تسيطر عليها 2-4 × 105cell / مل و 8-10 × 105cell / مل .

3 ) إشارة تغيير السائل التردد : تغيير السائل عند مرور .

4 ) الثقافة شرط : بخار المرحلة : الهواء ، 95 ٪ ؛ ثاني أكسيد الكربون درجة الحرارة : 37 درجة مئوية ، حاضنة الرطوبة 70 ٪ - 80 ٪ .

5 ) تجميد السائل التخزين : * 95 ٪ متوسطة الثقافة و 5 ٪ DMSO ( معدل البقاء على قيد الحياة حوالي 50 ٪ بعد استخدام هذا السائل التخزين المجمد وفقا لتجربتنا في البنك ، تحتاج إلى زراعة إضافية 7-10 أيام بعد الانتعاش من أجل استعادة النمو )

ل ملاحظة

[ ملاحظة ] :

هذه الخلية هي تعليق الخلية ، اعتمادا على الخبرة في مجال الثقافة و التغذية المرتدة من العملاء ، واستخدام [ نصف طريقة الصرف ] في مرور أكثر فائدة في حالة الخلية ، لذلك أقترح عليك استخدام [ نصف طريقة الصرف ] على المرور .

1 . بعد تلقي الخلايا التي يتم شحنها من قبل 15ml أنابيب الطرد المركزي ، يرجى عدم جمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي ، يمكنك إعداد اثنين من زجاجات جديدة T25 الثقافة ، ثم نقل الخلايا إلى اثنين من زجاجات جديدة T25 الثقافة ، إضافة متوسطة إلى 10 مل . وضعها في 37 ℃ حاضنة .

2 . يمكنك الحصول على الخلايا التي يتم شحنها من قبل T25 قارورة الثقافة ، يرجى جمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي ، ثم إعادة تعليق الخلايا في 12 مل * متوسطة الثقافة التي تم تكوينها وفقا للتعليمات ، وضرب بالتساوي ، ثم نقلها إلى اثنين من زجاجات الثقافة الجديدة T25 الثقافة .

3 . THP-1 تعليق الخلايا . هذه الخلايا تميل إلى أن تكون أكثر اعتدالا في الثقافة ، في حين أن أقل قدر ممكن من الطرد المركزي في الثقافة ، مما تسبب في تلف الخلايا . بدلا من تغيير كامل متوسطة ، أقترح عليك استخدام [ نصف طريقة تغيير السائل ] على المرور ، إضافة خلية متوسطة إلى تمييع الخلايا للحفاظ على كثافة .

4 - الخلايا الحساسة إلى نوعية المصل ، أقترح عليك استخدام العلامة التجارية المستوردة عالية الجودة مصل الثقافة . إذا كانت الخلايا تنمو ببطء ، حاول استخدام سلاح آخر أو زيادة تركيز سلاح مؤقتا إلى 20 في المائة .

5 - إضافة β - كيو إلى الإيثانول ( خلية ثقافة الصف ) قد تؤثر على حالة الخلية .

β - كيو - الايثانول قاعدة محدودة الاستقرار ، لا يمكن أن تضاف إلى * متوسطة التخزين على المدى الطويل ، في كل مرور أو السائل إضافة إلى إضافة β - ثيول الكحول .

β - كيو إلى الإيثانول ( 2-qiu إلى الإيثانول ) أضيفت إلى الخلايا الليمفاوية أو غيرها من الثقافات الخلية ، لأن الأحماض الأمينية السيستين السيستين المستخدمة في وسائل الإعلام أقل من العرض ، في حين أن الكثير . بعض الخلايا ، مثل الخلايا التائية ، لا يمكن نقل السيستين في السيتوبلازم ، ويجب تحويلها إلى السيستين . β - كيو الايثانول يقلل من السيستين في شكل التي يمكن نقلها بواسطة الخلايا ، ومن ثم تحويلها إلى السيستين اللازمة لنمو الخلايا . β - كيو الايثانول هو أيضا الحد من وكيل ، والتي يمكن أن تتحلل العديد من الأيضات السامة التي تنتجها الخلايا المستزرعة ، وبالتالي تحسين البيئة المحيطة بها .

6 - هذه الخلية هي حساسة جدا إلى كثافة الخلية ، يرجى الانتباه إلى الحفاظ على كثافة الخلية في نطاق مناسب في الثقافة و مرور ( يرجى الرجوع إلى تعليمات الخلية على وجه التحديد ) .

7 - معدل استرداد الخلايا بعد الحفظ بالتبريد منخفضة ، إذا لزم الأمر ، زيادة حجم الخلايا

8 - عادة ، يمكن الحفاظ على نمو الخلايا عن طريق إضافة * متوسطة إلى نمو الخلايا ، كل 7 أيام يمكن أن تكون الخلايا الطرد المركزي وإعادة تعليق في وسائل الإعلام الجديدة لاستكمال تبادل كامل الخلية .

ATCC تعليمات بشأن الحفاظ على حيوية الخلية من خلايا تي إتش بي - 1

جهاز = مودال

كثرة العد الخلوي هو أفضل طريقة لرصد إتش بي - 1 . هذه الخلايا يجب أن تزرع كل 2-3 أيام ببساطة عن طريق إضافة كمية صغيرة من وسائل الإعلام الجديدة ( مكيفة ) إلى قارورة . أنت لا تحتاج إلى طرد الخلايا في كل مرة و إعادة تمريرها . عندما تزرع في المختبر ، في اليوم التالي ، الخلايا عادة ما تنمو إلى أكبر قارورة مع المزيد من وسائل الإعلام . مرور مطلوب عند كثافة الخلية تصل إلى 8 × 10 5 خلايا حية / مل . كثافة الخلية غير مسموح بها أكثر من 1 × 10 ( 6 ) الخلايا الحية / مل ) .

1 - إزالة طاف ، وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني بدون أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم 1-2 مرات .

2 - إضافة 0.25 ٪ ( ث / ت ) trypsin-0.53 ملم EDTA في قارورة ( T25 1-2ml ، T75 2-3ml ) في 37 ℃ لمدة 1-2 دقيقة ( عسر الهضم الخلايا يمكن أن تطيل فترة الهضم بشكل صحيح ) ، ثم لاحظ تحت المجهر الهضم . إذا كان جزء كبير من الخلايا تصبح مستديرة و تقشر ، ثم العودة إلى طاولة العمليات بسرعة ، اضغط على عدة زجاجات ، إضافة 3-4ml تحتوي على 10 مل في المتوسط لإنهاء عملية الهضم .

3 - ضخ بلطف ، الطرد المركزي في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 3-5 دقائق ، تجاهل طاف ، إضافة 1-2 مل متوسطة الثقافة ثم تهب بالتساوي . تعليق خلية تم تقسيمها إلى 2 : 1 زجاجة جديدة T25 ، 6-8ml * الثقافة المتوسطة التي تم تكوينها وفقا لمتطلبات تعليمات للحفاظ على نمو الخلايا وحيويتها .

cryopreserved الخلايا : بعد تلقي الخلايا ، فمن المستحسن أن cryopreserved دفعة من بذور الخلايا في أول 3 أجيال من الثقافة لاستخدامها في التجارب اللاحقة .

4 ) وسائل النقل ( وسائل الإعلام وسائل الإعلام الري ) لا يمكن أن تستخدم في زراعة الخلايا ، يرجى تغيير وفقا لتعليمات جديدة من خلية ثقافة الظروف * وسائل الإعلام إلى زراعة الخلايا . بعد الحصول على الخلايا ، أول مرور اقترح T25 قارورة الثقافة 1 : 2 مرور .

ل شكل النقل

انخفاض درجة الحرارة : ( 1 ) 1 مل من الجليد الجاف التعبئة والتغليف والنقل ، بعد تلقي - 80 درجة الثلاجة بين عشية وضحاها بعد الحفظ في النيتروجين السائل أو الانتعاش المباشر ، إذا وجدت أن الثلج الجاف قد تبخرت نظيفة ، تجميد أنبوب غطاء زجاجة قبالة ، تلف الخلايا الملوثة ، يرجى الاتصال بنا على الفور .

درجة الحرارة العادية : ( 2 ) زجاجة T25 تعافى الخلايا الحية يتم شحنها في درجة الحرارة العادية ، بعد تلقي الخلايا وفقا لطريقة المعالجة .

ل السلامة البيولوجية

1 - جميع الخلايا الحيوانية تعتبر خطرة بيولوجيا ، يجب أن تعمل في المرحلة الثانية من السلامة البيولوجية منصة . يرجى ملاحظة أن جميع النفايات السائلة والأواني التي تأتي في اتصال مع هذه الخلايا يجب أن تكون معقمة قبل التخلص منها .

2 - ينصح دائما استخدام القفازات الواقية ، والملابس الواقية أقنعة الوجه عند استعادة الخلايا المجمدة . ملاحظة : تجميد الأنابيب المغمورة في النيتروجين السائل سوف تتسرب ، وسوف ببطء ملء النيتروجين السائل . عندما يذوب النيتروجين السائل في مرحلة الغاز يمكن أن يؤدي إلى انفجار السفينة أو ضربة قبالة غطاء مع قوة خطيرة ، مما أدى إلى ارتفاع الحطام ، مما تسبب في أضرار بشرية .