رقم الشحنسB1013/4/5/6

حالة التخزينسعندما يتم تخزينها في درجة حرارة تتراوح بين 20 و 20 درجة مئوية ، عنصر يحتاج إلى تجنب الضوء ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان .

مكونات المنتجس

عرض المنتج

واحدة من السمات البارزة في موت الخلايا المبرمج هو كروموسوم الخليةالحمض النووي شظايا مع أطوال مختلفة هي جزء لا يتجزأ من أوقات 180 بي بي بي 200 بي بي ، و سلم سلم سلم نمط معين في الاغاروز الكهربائي الهلامي . في هذه المجموعة ، 3 ′ يا محطة deoxynucleotidyl ترانسفيراز ( TDT ) من الحمض النووي في خلايا أفكارك كانت مختلطة مع YF ®/ Cy-dUTP，YF ®/ الحمض النووي المسمى cy-dutp يمكن ملاحظتها مباشرة من قبل مضان المجهر أو قياس التدفق الخلوي . تونل طريقة يمكن استخدامها بشكل انتقائي للكشف عن الخلايا المبرمج ، بدلا من الخلايا نخرية أو كسر حبلا الحمض النووي الناجم عن الإشعاع والعلاج بالعقاقير . مارك دوتبأرضجاو سينغdUTP ،حياةوو سو-dUTP）， يمكن الكشف عنها مباشرة في الموقع ، هو أسرع وأكثر مباشرة طريقة الكشف .

كاشف عدة لديها تطبيق واسع النطاق ، ويمكن استخدامها للكشف عن حالة موت الخلايا المبرمج في تجميد أو البارافين القسم ، ويمكن أيضا الكشف عن حالة موت الخلايا المبرمج في الخلايا أو الخلايا الملتصقة تعليق مثقف الخلايا . يمكن الكشف عن خلايا أفكارك بشكل انتقائي ، بدلا من الخلايا الميتة أو الناجمة عن الإشعاع أو العلاج بالعقاقير .كسر حبلا الحمض النووي للخلايا . كاشف عدة يمكن الكشف عن موت الخلايا المبرمج للخلايا ، تستغرق وقتا طويلا ، ويمكن الكشف عنها إلا بعد خطوة واحدة تلطيخ فعل الغسيل .

طريقة الاستخدام

المواد التجريبية

برنامج تلفزيوني العازلة ( الرقم الهيدروجيني ~ 7-4 )

تريتون x-100 0.4 في المائة ( برنامج تلفزيوني )

تريتون x-100 0.1 في المائة ( برنامج تلفزيوني ، بما في ذلك 5 ملغ / mlbsa ) .

4%متعددجوكاوان（إعداد برنامج تلفزيوني (

ايمونوهيستوشيمي القلم

dewaxing المذيبات ( البارافين عينة )

قسم البارافين تجهيز الكواشف ذات الصلة

المضادة للتبريد مضان ختم قرص

ddH2O

تصميم التجربة

مراقبة إيجابية

مراقبة إيجابية الشرائح التي أعدتها dnasei العلاج . دناز أنا يمكن هضم الحمض النووي حبلا واحدة أو مزدوجة الذين تقطعت بهم السبل ، والتعرض 3 ' oh الطرفية ، مما تسبب في موت الخلايا المبرمج . يمكنك أن تفعل ذلك مرة واحدة في كل تجربة . ( تستخدم للتحقق من هذه التجربة العملية عدة مشاكل )

باء - الضوابط السلبية

لا تحتوي على استخدامنفق reactionbuffer Tdt enzyme محل Tdt enzyme مع ddh2o . . . . . . . ( أساسا القضاء على الخلايا الخاصة بهم ، عملية التشغيل وغيرها من الأسباب التي تؤدي إلى تلطيخ غير محددة ، فضلا عن ضبط التعرض للتصوير ) .

جيم - فريق المعالجة التجريبية

المجموعة التجريبية تعمل بشكل طبيعي وفقا للتعليمات .

المجموعة الضابطة التجريبية

المجموعة التجريبية تعمل بشكل طبيعي وفقا للتعليمات .

الخطوات التجريبية

1 . إعداد العينة :

（1 ) مسحات الخلايا أو الخلايا الملتصقة

برنامج تلفزيوني تنظيف مرة واحدة .

ملاحظة : إذا كنت تشعر بالقلق من أن الخلايا في مسحة لا عصا بقوة ، يمكنك تجفيف عينة لجعل الخلية عصا بقوة أكبر .

ب - ثابت : إضافة كمية مناسبة من 4 ٪متعددجوكاوان（إعداد برنامج تلفزيوني ) ، ثابتة في 4 ℃ لمدة 30 دقيقة . برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

نفاذية : إضافة كمية مناسبة من 0.4 في المائة tritonx-100 ( برنامج تلفزيوني ) ، نفاذية في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة . برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

د - الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

（2 ) تعليق خلية أو تعليق خلية

جمع الخلايا ( 3-5 × 10 )⁶الخلايا1000rpm الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

ب - ثابت : إضافة كمية مناسبة من 4 ٪متعددجوكاوان（برنامج تلفزيوني ) تعليق كامل الخلية ، ثابتة في 4 ℃ لمدة 30 دقيقة . 2000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

نفاذية : إضافة كمية مناسبة من 0.4 في المائة tritonx-100 ( برنامج تلفزيوني ) ، نفاذية في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة . 2000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

د - الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

（3 ) البارافين قسم الأنسجة

أ - وضع شرائح البارافين على شريحة الرف ، خبز شرائح في 60 ℃ لمدة 60 دقيقة .

ب - dewaxing و الترطيب : شريحة من العينات التي وضعت في تسلسل الزيلين الأول ( 10 دقيقة ) الزيلين الثاني ( 10 دقيقة ) 100 ٪ إيثانول الأول ( 5 دقائق ) 100 ٪ إيثانول الثاني ( 5 دقائق ) 95 ٪ إيثانول ( 5 دقائق ) 90 ٪ إيثانول ( 5 دقائق ) 80 ٪ إيثانول ( 5 دقائق ) 70 ٪ إيثانول ( 5 دقائق ) ddh2o لمدة 5 دقائق ، شطف مرتين .

ملاحظة : زايلين السامة ، متقلبة ، يرجى القيام بذلك في خزانة .

ج - استخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل حول العينة ، واستخدام القلم ايمونوهيستوشيمي دائرة محيط العينة ، حتى أن المصب من خلال وسم .

ملاحظة : إذا كان محيط دائرة ايمونوهيستوشيمي السكتات الدماغية تم العثور على أن تكون مكسورة في التجارب اللاحقة ، يجب أن يكون في الوقت المناسب .

د - النفاذية : في نسبة 1 : 50 ، 2 مغ / مل من proteinase ك الحل المخفف مع برنامج تلفزيوني إلى التركيز النهائي من 40 ميكروغرام / مل ، 100 ميكروغرام / لتر قطرات على كل عينة ، بحيث تغطي جميع مناطق العينة ، احتضان في 37 ℃ لمدة 30 دقيقة .

ملاحظة :proteinase ك يمكن أن تخترق غشاء الخلية و الغشاء النووي ، مما يجعل من تلطيخ كاشف في الخطوة التالية بما فيه الكفاية للدخول في نواة الخلية للرد ، وتحسين كفاءة العلامات . فترة الحضانة طويلة جدا يمكن أن تزيد من خطر أن شريحة من الأنسجة سوف تسقط من الناقل شريحة في وقت لاحق في عملية الغسيل . من أجل الحصول على نتائج أفضل ، وتركيز proteinase ك الحضانة الوقت ودرجة الحرارة يجب أن يكون الأمثل وفقا لأنواع مختلفة من عينات الأنسجة .

هـ - نقع العينة في 1 × برنامج تلفزيوني شطف ثلاث مرات ، كل 5 دقائق ، واستخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل الزائدة ، وتجهيز العينة في مربع الرطب للحفاظ على الرطب .

ملاحظة : يجب اتخاذ هذه الخطوةproteinase ك يغسل جيدا ، وإلا فإنه سوف تتداخل مع العلامات اللاحقة .

و الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

（4 ) قسم الأنسجة المجمدة

ثابت : إزالة القسم المجمد و العودة إلى درجة حرارة الغرفة . غمر شريحة عينة في 4%متعددجوكاوان（برنامج تلفزيوني ) في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة . نقع العينة في 1 × برنامج تلفزيوني شطف ثلاث مرات لمدة 10 دقائق في كل مرة .

ملاحظة : إذا كان القلق من الفورمالديهايد التنظيف ليست نظيفة ، تأثير الصباغة النهائية . كمية مناسبة من الفورمالديهايد يمكن أن تضاف بعد التثبيت .2 ملغ / ملغانان حمضنظف10min， تحييد بقايا سائل التثبيت ، ثم إجراء برنامج تلفزيوني التنظيف .

ب - استخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل حول العينة ، واستخدام القلم ايمونوهيستوشيمي دائرة محيط العينة ، حتى أن المصب من خلال وسم .

ملاحظة : إذا كان محيط دائرة ايمونوهيستوشيمي السكتات الدماغية تم العثور على أن تكون مكسورة في التجارب اللاحقة ، يجب أن يكون في الوقت المناسب .

ج : النفاذية في نسبة 1 : 50 ، 2 مغ / مل من proteinase ك الحل المخفف مع برنامج تلفزيوني إلى التركيز النهائي من 40 ميكروغرام / مل ، 100 ميكروغرام / لتر في كل عينة ، بحيث تغطي جميع مناطق العينة ، 37 ℃ الحضانة لمدة 20 دقيقة .

ملاحظة :بروتيناز ك يمكن أن تخترق غشاء الخلية و الغشاء النووي ، مما يجعل الخطوة التالية من تلطيخ كاشففي نواة الخلية ، وتحسين كفاءة وضع العلامات . فترة الحضانة طويلة جدا يمكن أن تزيد من خطر أن شريحة من الأنسجة سوف تسقط من الناقل شريحة في وقت لاحق في عملية الغسيل . للحصول على نتائج أفضل ،تركيز proteinase ك ، الحضانة الوقت ودرجة الحرارة يجب أن يكون الأمثل وفقا لأنواع مختلفة من عينات الأنسجة . إذا كان تركيز الأمثل proteinase ك و الحضانة الوقت لا يمكن تحسين تأثير الصباغة ، عينة يمكن أن تكون مغمورة في 1 ٪ تريتون x-100 ( برنامج تلفزيوني ) في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق . ثم شرائح كانت مغمورة في 1 × برنامج تلفزيوني شطف ثلاث مرات لمدة 5 دقائق في كل مرة .

د - غمر العينة في 1 × برنامج تلفزيوني شطف ثلاث مرات ، 5 دقائق في كل مرة ، واستخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل الزائدة ، وتجهيز العينة في مربع الرطب للحفاظ على الرطب .

ملاحظة : يجب اتخاذ هذه الخطوةproteinasek غسلها نظيفة ، أو أنها سوف تتداخل بشدة مع العلامات اللاحقة من ردود الفعل .

هـ - الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

（5 ) العلاج الإيجابي ( فقط إيجابية السيطرة على هذه الخطوة ، وغيرها من العينات مباشرة من خلال نفق رد الفعل )

أ - 10 × دناز أنا عازلة مخففة في 1 : 10 مع ddh2o في 1 × دناز أنا عازلة .

ب - إضافة 100 ميكروغرام / لتر 1 × دناز أنا عازلة على العينة التي تم تجهيزها ، تغطي جميع مناطق العينة ، درجة حرارة الغرفة التوازن لمدة 5 دقائق .

دناز أنا ( 2 ش / μ ل ) إلى التركيز النهائي 20 ش / مل مع 1 × دناز أنا العازلة في 1 : 100 .

د - التخلص من العازلة ، إضافة 100 μ ل تركيز 20 ش / مل dnasei الحل ، احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة .

هـ - التخلص من دناز أنا سائل العمل ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

و الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

نفق رد فعل

（1 ) إعداد نفق رد فعل السائل

（2 ) الخلايا الملتصقة ، مسحات الخلايا أو شرائح الأنسجة

أ - 50 μ ل نفق رد فعل السائل أضيفت إلى كل عينة ، حتى أن رد فعل السائل يغطي العينة بالتساوي . أفضل وقت الحضانة في 37 ℃ تجنب الضوء ( خلية تلطيخ الوقت الموصى به 15-30 دقيقة ، نسيج تلطيخ الوقت الموصى به 1 ساعة ) .

ملاحظة :50 μ ل نفق رد فعل السائل هو مناسبة لأنّ مسحة ، شريحة أو 96 لوحة المسام ( حجم النفق رد فعل السائل يمكن تعديلها بشكل صحيح من قبل مختلف لوحات المسام لتغطية الخلايا ) . إذا كانت العينة لفحصها هو مسحة ، شريحة ، أو في 24 حفرة لوحة ، لوحة 12 حفرة أو 6 حفرة لوحة ، فيلم تبخير يمكن استخدامها ، أو محاولة استخدام الختم الذاتي حقيبة أو غيرها من المواد المناسبة إلى قطع تلقائيا إلى جولة من البلاستيك ورقة أصغر قليلا من حفرة ، بعد إسقاط تونل رد فعل السائل مغطى على العينة ، تونل رد فعل السائل يمكن منعه من التبخر ، و تونل رد فعل السائل يمكن أن تغطي العينة بالتساوي .

ب - التخلص من نفق رد فعل الحل ، بعد تنظيف برنامج تلفزيوني مرتين ، ثم استخدام 0.1 في المائة تريتون x-100 ( برنامج تلفزيوني ، بما في ذلك 5mg / mlbsa ) لتنظيف 3 مرات ، 5 دقائق في كل مرة ، حتى أن مواقف مردود العلامات يمكن تنظيفها .

ج ( اختياري ) كل عينة من 5 ميكروغرام / مل من dapi تركيز مناسب ، درجة حرارة الغرفة لتجنب الضوءاحتضان5min。 بعد الانتهاء من الصباغة ، dapi الحل هو التخلص من برنامج تلفزيوني هو تنظيفها مرتين في كل مرة لمدة 5 دقائق .

د ( اختياري ) شرائح : 20 ميكرولتر المضادة للتبريد مضان أقراص ( المضادة للتبريد مضان ) في كل عينة .التبريد ختم أقراص قد لا تكون مناسبة لبعض الأصباغ ، قبل التجربة اقترح إجراء اختبار المطابقة ) ، وتغطي الزجاج ، مع نهاية حادة من الملقط برفق اضغط على تغطية الزجاج ، وإزالة فقاعات الهواء لجعل ختم

وان كامل

هـ - استخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل الزائدة ، إضافة 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني إلى منطقة العينة للحفاظ على عينة رطبة .على الفور تحت المجهر الفلورسنت .

（3 ) تعليق خلية أو تعليق خلية

أ 50 μ ltunel رد فعل السائل أضيفت إلى كل عينة أنبوب تعليق الخلايا بلطف .15-30min。 تعليق الخلايا بلطف كل 10 دقائق مع مايكرو ماصة .

ب 2000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، تخلى عن نفق رد فعل السائل ، مع 0.1 ٪ تريتون x-100（برنامج تلفزيوني ، بما في ذلك 5 ملغ / مل جيش صرب البوسنة ) يغسل مرتين في كل مرة لمدة 5 دقائق ، حتى أن مواقف مردود العلامات يمكن تنظيفها .

( ج ) كل عينة أنبوب يضاف دابي مع تركيز 100 ميكرولتر 5 ميكروغرام / مل و حضنت لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة .

بعد إضافة 400 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني تعليق الخلايا ، تم الكشف عن تدفق عداد الكريات أو مسحها على الفور .لاحظ تحت المجهر مضان .

الاحتياطات

1 . قبل استخدام المنتج فورا الطرد المركزي إلى أسفل الأنبوب ، ثم إجراء التجارب اللاحقة .

2 . تلطيخ الوقت يمكن تخفيضها بشكل صحيح عندما يكون لون الخلفية الثقيلة أو غير محددة .

3 - زيادة سلبية وإيجابية السيطرة على المجموعة المقترحة في التجربة .

4 . ارتداء قناع ، والقفازات عند استخدام العنصر ، إذا لمس الجلد ، شطف فورا مع الكثير من الماء .

5 . الأصباغ الفلورية لديها مشاكل التبريد ، يرجى الانتباه إلى تجنب الضوء قدر الإمكان ، من أجل إبطاء التبريد الفلورية .

6 - هذا المنتج يقتصر على البحث العلمي ، لا تستخدم في التشخيص السريري أو العلاج ، لا تستخدم في الغذاء أو المخدرات ، لا يمكن تخزينها في المنازل العادية .

7 - من أجل سلامتك وصحتك ، يرجى ارتداء ملابس المختبر و القفازات القابل للتصرف .