جهاز استخراج الحمض النووي

trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف

رقم المنتج :R1000

ظروف التخزين :trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشفيمكن أن تبقى مستقرة لمدة 12 شهرا في درجة حرارة الغرفة .نوصي حفظ2-8 ° C البيئة .

نصائح هامة :

هذا المنتج يحتوي على الفينول السامة والتآكل . استنشاق ، لمس الجلد ، البلع ، وما إلى ذلك يمكن أن يؤدي إلى التسمم ، الحروق وغيرها من الإصابات الجسدية . عند استخدام هذا المنتج ، يجب عليك ارتداء المواد الواقية ، مثل القفازات ، أقنعة العين ، أقنعة الوجه ، الخ . إذا كان الاتصال غير دقيق ، شطف فورا مع الكثير من الماء و الذهاب إلى المستشفى للعلاج .

منتوج عرض :

trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشفهو مجموع الحمض النووي الريبي واسعة الطيف استخراج كاشف . التجربة العملية سريعة ومريحة ، لون مشرق ، ومريحة الطبقات . كاشف يمكن استخدامها على نطاق واسع في استخراج الحمض النووي الريبي الكلي من عينات من الأنسجة الحيوانية ، والمواد النباتية ، والكائنات الحية الدقيقة المختلفة و مثقف الخلايا . هذه الطريقة فعالة في عزل كمية صغيرة من الأنسجة ( 50-100mg ) و ( 5 × 106 ) و عدد كبير من الأنسجة ( أكثر من 1 جرام ) و الخلايا ( 107 ) . العينة كانت مجزأة تماما في مجموع الحمض النووي الريبي تريزول استخراج كاشف مع ضمان سلامة الحمض النووي الريبي قدر الإمكان . بعد إضافة الكلوروفورم الطرد المركزي ، الحل يمكن تقسيمها إلى ثلاث طبقات : الطبقة العليا من المياه عديم اللون المرحلة ، الطبقة الوسطى و الطبقة السفلى من الأحمر المرحلة العضوية ، والجيش الملكي النيبالي في طاف طبقة . بعد جمع supernatants ، مجموع الحمض النووي الريبي يمكن استردادها من خلال هطول الأمطار من الكحول الآيزوبروبيل . . . . . . . مجموع الحمض النووي الريبي هو جيد في السلامة ، لا تلوث البروتين والحمض النووي ، ويمكن استخدامها في مختلف التجارب التقليدية في علم الأحياء الجزيئي ، مثل RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、 الترجمة في المختبر .

trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف يمكن أن تعزز هطول الأمطار من الحمض النووي الريبي من مختلف الأنواع والأحجام مع مختلف الأوزان الجزيئية . على سبيل المثال ، الحمض النووي الريبي الاغاروز الكهربائي الهلامي المستخرج من كبد الفئران و تلطيخ مع ethylpyridine بروميد أظهرت أن هناك العديد من نطاقات منفصلة عالية الوزن الجزيئي ( مرنا و hnrna المكونات ) بين 7 و 15 كيلو بايت ، واثنين من الريبوسوم المهيمنة ~ 5 كيلو بايت ( 28s ) و ~ 2 كيلو بايت ( 18S ) ، وانخفاض الوزن الجزيئي الحمض النووي الريبي بين 0.1 و 0.3 كيلو بايت ( الحمض الريبي النووي النقال ، 5S ) . عندما تم استخراج الحمض النووي الريبي المخفف مع تي ، نسبة a260 / a280 ≥ 1.8 . لاحظ أنه إذا كان المشترك الاغاروز الكهربائي الهلامي ، 28s حوالي 2 كيلو بايت و 18s حوالي 1 كيلو بايت ، مع تركيزات مختلفة من هلام الكلمات تختلف اختلافا كبيرا .

ملاحظة :

1.عينةبعد trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج خليط ، إذا لم يكن على الفور إضافة الكلوروفورم ، يمكن وضعها تحت - 70 درجة مئوية لمدة شهر أو أكثر . الحمض النووي الريبي هطول في 75 ٪ من الإيثانول يمكن الحفاظ عليها لمدة أسبوع في 2-8 درجة مئوية لمدة سنة في 20 درجة مئوية . الحمض النووي الريبي هو نصف الحياة قصيرة نسبيا ، من السهل أن تتحلل ، لذلك فمن المستحسن أن التجربة التالية ينبغي القيام به في أقرب وقت ممكن بعد استخراج الحمض النووي الريبي ، مثل النسخ العكسي كدنا ، شمال لطخة وهلم جرا .

2 . إذا كان المصب تجربة حساسة جدا إلى الحمض النووي الريبي ، نوصي باستخدام الحمض النووي الريبي الحرة أنا .

3.إعداد الكواشف : الكلوروفورم ، الآيزوبروبيل الكحول )جديد فتح أو استخراجالحمض النووي الريبي محددة ) ، 75 ٪ إيثانول ( أعدت مع المياه المعالجة من قبل DEPC ) ، ريبونوكلياز المياه مجانا أو المياه المعالجة من قبل DEPC . . . . . . .

هذه الشركة تنتج trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف reagent نوعية ممتازة ، يمكن أن تحل محل invitrogen trizol reagent . . . . . . . نوعية الاستخراج هو نفسه كما في المصب التجربة .

خطوات استخراج الحمض النووي الريبي : ( يرجى قراءة الملاحظات قبل التجربة )

نصيحة

استخدامارتداء القفازات والعيون الواقية عند استخراج الحمض النووي الريبي من trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف . تجنب لمس الجلد والملابس . الانتهاء من العملية في خزانة الكيميائية . تجنب استنشاق الجهاز التنفسي . جميع العمليات يجب أن تتم في درجة حرارة الغرفة من 15 إلى 30 درجة مئوية ، ما لم ينص على خلاف ذلك .

1 . خليط

أ - الأنسجة النباتية :

الأنسجة النباتية الطازجة تماما مطحون في النيتروجين السائل أو تعامل مع الأنسجة النباتية سحقت مباشرة فيtrizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف1 مل من مجموع الحمض النووي الريبي استخراج الكاشف أضيفت إلى كل 50-100mg الأنسجة ، ثم يخلط جيدا . ملاحظة : حجم العينة عموما لا تتجاوز 10 ٪ من مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف حجم تريزول . . . . . . .

ب - الأنسجة الحيوانية :

الطازجة أوفي درجة حرارة تتراوح بين 30 إلى 100 ملغ من الأنسجة ، 1 مل من مجموع الحمض النووي الريبي استخراج الكاشف أضيفت إلى الأنسجة الحيوانية المجمدة ، ثم تعامل مع خليط متجانس الصك . أو إضافة trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج الكاشف 1 مل بعد طحن في النيتروجين السائل . ملاحظة : حجم العينة عموما لا تتجاوز 10 ٪ من مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف حجم تريزول . . . . . . .

ج - الخلايا المستزرعة أحادية الطبقة :

إزالة ما تبقى من الثقافة المتوسطة قدر الإمكان مباشرة إلى القطر1 مل من مجموع الحمض النووي الريبي trizol استخراج الكاشف أضيفت إلى 3.5 سم لوحة الثقافة ، ثم انقسام الخلايا مرارا وتكرارا في مهب . المبلغ المطلوب من مجموع الحمض النووي الريبي استخراج trizol كاشف ( إضافة 1 مل لكل 10 سم 2 ) يتحدد على أساس مساحة لوحة الثقافة بدلا من عدد الخلايا . عندما trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف كمية كافية ، يمكن أن يؤدي إلى استخراج الحمض النووي الريبي الحمض النووي من التلوث .

ملاحظة

في كثير من الأحيان لا يمكن فصل الخلايا الملتصقة من قارورة أو صحن ، وهذا لا يعني أن الانقسام لا يحدث ، في حين أن غشاء الخلية هو في الواقع كسر مفتوح و قد أفرج عنه بالكامل .RNA， مجرد الاستمرار في القيام بذلك .

د - تعليق الخلية :

الطرد المركزي جمع الخلايا . فيإن trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف يستخدم الماصة مرارا وتكرارا ضربة لتفريق الخلايا . كل 5-10 ×10⁶الخلايا الحيوانية أو النباتية أو خلايا الخميرة أو كل 1 × 107 البكتيريا بالإضافة إلى 1 ملtrizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشفغسل الخلايا ينبغي تجنبها قبل إضافة trizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشف ، لأن ذلك يزيد من احتمال تدهور مرنا . كسر بعض الخمائر والبكتيريا قد تتطلب استخدام خلاط .

و الدم :

إستعمالtrizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشفالمفاعل LS.

2.وضع الخليط في درجة حرارة الغرفة بعد صدمة شديدة5 دقائق لتفريق نوکلئو پروتئین . . . . . . .

3 - الخطوات الاختيارية :

فيقوة الطرد المركزي في 4 ° C مع 12 ، 000 دورة في الدقيقةالطرد المركزي لمدة 10 دقائق .

إذا كانت العينة تحتوي على المزيد من البروتين ، الدهون ، السكريات أو العضلات ، الدرنات النباتية العقيدات يمكن إزالتها بالطرد المركزي . الطرد المركزي هطول يتضمن الغشاء الخارجي ، السكاريد ، وارتفاع الوزن الجزيئيDNA， supernatants تحتوي على الحمض النووي الريبي . عند التعامل مع عينات من الأنسجة الدهنية ، ينبغي إزالة الطبقة العليا من الدهون بكميات كبيرة . إزالة الطين واضحة وموحدة والمضي قدما في الخطوة التالية .

4.كل1 ملtrizol مجموع الحمض النووي الريبي استخراج كاشفإضافة 0.2ml الكلوروفورم . تغطية الأنابيب ، اهتز بشدة لمدة 15 ثانية و وضعها في درجة حرارة الغرفة لمدة 2-3 دقائق .

5.في4 ° C 12 ، 000 دورة في الدقيقة قوة الطرد المركزي الطرد المركزي عالية السرعة تجميد 10-15 دقيقة . بعد الطرد المركزي ، الخليط ينقسم إلى ثلاث طبقات : الطبقة السفلى من الأحمر العضوية الفينول كلوروفورم طبقة ، طبقة وسطى ، الطبقة العليا من عينة المياه عديم اللون طبقة . الحمض النووي الريبي موجود في طبقة المياه دون استثناء . حجم عينة المياه طبقة حوالي 50-60 ٪ من مجموع الحمض النووي الريبي استخراج الكاشف . الطبقة العضوية و الطبقة الوسطى هي البروتينات والحمض النووي ، إذا لزم الأمر ، يرجى الاتصال بنا للحصول على طريقة استخراج .

6.عينة المياه طبقة يتم نقلها إلى تنظيف أنابيب الطرد المركزي ، isovolume الآيزوبروبيل الكحول المضافة . يوضع الخليط رأسا على عقب في درجة حرارة الغرفة10 دقائق

الحمض النووي الريبي هطول عادة ما تكون غير مرئية قبل الطرد المركزي ، بعد الطرد المركزي على شكل هلامي هطول الأمطار على الجانب السفلي من الأنبوب .

7.في درجة حرارة الغرفة أوالطرد المركزي 4 ° C 12 , 000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، وإزالة طاف .

8.انضمام75 ٪ الايثانول غسل هطول . الأمطار كانت تغسل مع 1 مل من 75 ٪ من الإيثانول في 1 مل من مجموع الحمض النووي الريبي تريزول استخراج كاشف .

9.في درجة حرارة الغرفة أو4 ° C 12 , 000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 3 دقائق ، التخلي عن طاف ، وإيلاء الاهتمام إلى عدم فقدان الحمض النووي الريبي هطول .

ملاحظة : ما تبقى من كمية صغيرة من السائل يمكن أن تكون قصيرة الطرد المركزي ، ثم امتص مع بندقية رئيس ، الحرص على عدم التخلي عن امتصاص الرواسب .

10.وضع في درجة حرارة الغرفة2-3 دقائق لتجف . إضافة 30-100 μ ل ريبونوكلياز المياه مجانا ، تماما حل الحمض النووي الريبي ، الحمض النووي الريبي التي تم الحصول عليها في - 70 ℃ لمنع التدهور .

ملاحظة : ما تبقى من كمية صغيرة من السائل يمكن أن تكون قصيرة الطرد المركزي ، ثم امتص مع بندقية رئيس ، الحرص على عدم التخلي عن امتصاص الرواسب .