خلوي البروتين التعبير كيت - ثاني كبريتيد السندات تعزيز النسخة - تجميد المجفف

رقم الشحن：P0243L

حالة التخزينس-80℃，1سنةفعالية

نقل الثلج الجاف . بعد فتح الخلية خالية من البروتين عن رد الفعل كان العنصر المخزنة في - 80 ℃ . . . . . . . من أجل تجنب تكرار التجميد والذوبان ، وفقا لكمية من رد الفعل ، أ و ب السائل السائل يمكن تحميلها على حدة ، ثم يتم تخزينها في - 80 ℃ . . . . . . .

مكونات المنتج

وصف المنتج

خلوي تخليق البروتين كيتاختراع يوفر المنتج الذي يقوم على تخليق البروتين في المختبر من قبل خلية كولاي ليزات . استخدام المنتجالمواد الفعالة مثل الريبوسوم ، ترجمة العوامل ، انزيم ، وما إلى ذلك يتم إضافتها مع الطاقةالنوكليوتيدات ، الأحماض الأمينية ، الأملاح غير العضوية ، الخ .- نظام الترجمة . الحمض النووي أوالحمض النووي الريبي هو قالب عن البروتين . بروتين خلوي التعبير هو نوع من البكتيريا التي لا تعتمد على العيش ،بالمقارنة مع التقليدية المؤتلف نظام التعبير ، يمكن التعبير عن البروتين بسرعة ومرونة .مزايا متعددة :

1 - التعبير عن البروتين بسرعة ، 1 ~ 2 ساعة عن الهدف من البروتين ، 8 ~ 24 ساعة لتحقيق أقصى قدر منالكثير .

2 - بروتين تعبير عالية ، يمكن أن تصل إلى أكثر من 3 ملغ / مل غاو البروتين .

3 - استجابة بسيطة ومرنة ، فقط إضافة الحمض النووي الريبي أو قالب في نظام رد الفعل ، يمكن أنإستعمال96 - لوحة مثقبة أو أنبوب الطرد المركزي .

ملاحظة : هذا المنتج يمكن أن تعبر عن البروتين العادي ، هو أكثر ملاءمة للتعبير عن البروتينات التي تحتوي على ثاني كبريتيد السندات .

نطاق التطبيق

المنتج جين يقتصر على البحث العلمي من المهنيين ، لا تستخدم في التشخيص السريري أو العلاج ، لا تستخدم في الغذاء أو المخدرات .

تعليمات التشغيل

1. بناء الجينات

بناء الجينات المستهدفة أمر بالغ الأهمية من أجل التعبير عن البروتين . الجينات المستهدفة يمكن بناؤها على البلازميد إيجابية تعلق على هذه المجموعة ( انظر الرسم البياني البلازميد التغليف الخارجي التسمية لمسح الملفات داخل رمز ثنائي الأبعاد بالتفصيل ) ، وهذا هو ، على النحو التالي . الحيوانات الأليفة البلازميدات التي تحتوي على t7 المروج ، ولكن لا تحتوي على اللاكتوز مشغل ( لاك ) متوافقة مع pet9a pet-23a , . . . . . . .

ملاحظة : بلازميد ( مثل pet28a ) تحتوي على لاك اللاكتوز مشغل له تأثير كبير على المحصول .

تسلسل الحمض النووي البلازميد إيجابيةس

2. قالب إعداد

خلوي تخليق البروتين عدة يمكن استخدام الحمض النووي أو مرنا كقالب للتعبير عن البروتينات المؤتلف . الحمض النووي يمكن أن يكون قالب البلازميد ، بكر المنتج ، أو المنتج باستخدام phi29 RCA حلقة المتداول التضخيم .

البلازميدبلازميد تم توليفها من قبل شركة الجينات ، أو subcloned للحصول على البلازميد الذي هو مناسبة للحصول على أي رد فعل الخلية .

المنتجات PCRتم تصميم الاشعال ، التمهيدي إيجابية حوالي 200 بي المنبع T7 المروج ، عكس التمهيدي حوالي 200 بي المصب إنهاء رامزة ( بما في ذلك محطة T7 ) لتضخيم القالب ، الحصول على الحمض النووي يمكن أن تكون مباشرة في نظام رد فعل خلوي دون تنقية . المنبع والمصب 200 بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي بي .

2-3 منتجات انديانابوليسالحمض النووي المنتج يمكن أن تستخدم مباشرة في نظام رد فعل خلوي باستخدام phi29 بوليميريز و كلمة ستة التمهيدي .

2.4 تفاعل البوليميراز المتسلسل ( PCR ) و ( RCA ) يمكن أن تستخدم جنبا إلى جنب مع البوابة الذهبية و جيبسون العامة ، مما يزيد كثيرا من سرعة تدفق الحمض النووي قالب إعداد .

2.5قالب الحمض النووي يجب أن يكون كميا بدقة قبل استخدامها . نوصي باستخدام عالية الجودة عدة لاستخراج البلازميد البلازميد ، وتجنب إدخال ريبونوكلياز . بلازميد عاد من تخليق الجينات الشركة ينبغي أن تركز على استخدام العمود تنقية ، وإلا فإنه لا يمكن استخدامها مباشرة دون رد فعل الخلية .

3. لا التعبير عن البروتين الخلوي

3.1أ و ب السائل ( حجم نسبة 1 : 2 ) تحسب على أساس المبلغ الإجمالي من نظام رد الفعل ، كاشف يضاف إلى رد فعل السفينة على الجليد ( على سبيل المثال ، 2 مل جولة أسفل أنبوب الطرد المركزي ) ويخلط جيدا . القفازات والأقنعة يجب أن ترتديه في جميع أنحاء العملية ، ماصة السائل و رد فعل حاوية دون مصدر الإنزيم المعتمدة لتجنب إدخال nuclease . . . . . . .

يمكن إعداد نظام خلوي مختلطة بالرجوع إلى الجدول التالي :

3.2إضافة قالب الحمض النووي في رد فعل النظام ، مع التركيز النهائي من 5 إلى 10 ميكروغرام / مل ، قالب الحمض النووي يمكن أن يكون الأمثل .

3.3وضع رد فعل السفينة في شاكر أو درجة حرارة ثابتة خلاط ، والتعبير عن البروتين الخلوي مجانا ، درجة حرارة التفاعل الموصى بها من 25 إلى 30 ℃ . . . . . . . انخفاض درجة الحرارة يمكن أن تقلل من معدل تخليق البروتين ، ولكن زيادة ذوبان البروتين . رد الفعل العام حوالي 8 ساعات يمكن أن تصل إلى أقصى إنتاج البروتين ، ويمكن أيضا أن يكون رد فعل بين عشية وضحاها 16 ساعة .

3.4التعبير عن بروتين خلوي يتطلب ما يكفي من الأوكسجين عند 2 مل أنبوب الطرد المركزي يستخدم رد فعل السفينة ، رد فعل النظام لا يتجاوز 100 ميكرولتر . أي رد فعل البروتين الخلوي يمكن تكبيرها في نسبة متساوية ، تضخيم نظام رد الفعل يتطلب استخدام أكبر رد فعل السفينة ، مثل زجاجة هزاز ، وما إلى ذلك ، مع ضمان سرعة دوران هزاز ( 200 دورة في الدقيقة ) .

4 - الكشف

في نهاية رد الفعل ، رد فعل السائل ( الكشف عن جميع البروتينات ) أو رد فعل طاف ( الكشف عن البروتينات القابلة للذوبان ) حوالي 1

5 - الضوابط الإيجابية

هذه الشراكه البلازميد في هذه المجموعة بمثابة مراقبة إيجابية ، يمكن أن نلاحظ رد فعل نتيجة مباشرة بالعين المجردة . بعد النجاح في التعبير عن هذه الشراكه ، نظام رد فعل الخلية خالية من الواضح أن الأخضر .

إذا كان sf-gfp يحتاج إلى أن يكون كميا بدقة ، يمكن الكشف عنها بواسطة انزيم العلامات ( السابقين / م = 485 / 528 نانومتر ) .