رقم الشحن：B1013/4/5/6

حالة التخزينالمكونات يجب أن تكون محمية من الضوء لتجنب تكرار التجميد والذوبان .

مكونات المنتجس

عرض المنتج

واحدة من السمات البارزة من موت الخلايا المبرمج هو تدهور الكروموسومات الحمض النووي ، والتي هي محددة جدا ومنتظمة . شظايا من الحمض النووي مع أطوال مختلفة من 180 بي بي بي بي بي بي بي 200 صحيح مرات ، مما يدل على سلم سلم خاص في الاغاروز الكهربائي الهلامي . في هذه المجموعة ، 3 ′ يا محطة deoxynucleotidyl ترانسفيراز ( TDT ) من الحمض النووي في خلايا أفكارك كانت مختلطة مع YF ®/ Cy-dUTP，YF ®/ الحمض النووي المسمى cy-dutp يمكن ملاحظتها مباشرة من قبل مضان المجهر أو قياس التدفق الخلوي . تونل طريقة يمكن استخدامها بشكل انتقائي للكشف عن الخلايا المبرمج ، بدلا من الخلايا نخرية أو كسر حبلا الحمض النووي الناجم عن الإشعاع والعلاج بالعقاقير . إن dutp المسمى ( على سبيل المثال ، digao symplectic dutp ، shengwusu dutp ) يمكن الكشف عنها مباشرة في الموقع .

كاشف عدة لديها تطبيق واسع النطاق ، ويمكن استخدامها للكشف عن حالة موت الخلايا المبرمج في تجميد أو البارافين القسم ، ويمكن أيضا الكشف عن حالة موت الخلايا المبرمج في الخلايا أو الخلايا الملتصقة تعليق مثقف الخلايا . يمكن الكشف عن خلايا أفكارك بشكل انتقائي ، بدلا من الخلايا نخرية أو الخلايا التي كسر حبلا الحمض النووي بسبب الإشعاع والعلاج بالعقاقير . كاشف عدة يمكن الكشف عن موت الخلايا المبرمج للخلايا ، تستغرق وقتا طويلا ، ويمكن الكشف عنها إلا بعد خطوة واحدة تلطيخ فعل الغسيل .

طريقة الاستخدام

المواد التجريبية

برنامج تلفزيوني العازلة ( الرقم الهيدروجيني ~ 7-4 )

تريتون x-100 0.4 في المائة ( برنامج تلفزيوني )

تريتون x-100 0.1 في المائة ( برنامج تلفزيوني ، بما في ذلك 5 ملغ / mlbsa ) .

4 ٪ polyformaldehyde ( برنامج تلفزيوني )

ايمونوهيستوشيمي القلم

dewaxing المذيبات ( البارافين عينة )

قسم البارافين تجهيز الكواشف ذات الصلة

المضادة للتبريد مضان ختم قرص

ddH2O

تصميم التجربة

مراقبة إيجابية

مراقبة إيجابية الشرائح التي أعدتها dnasei العلاج . DNase أنا يمكن هضم الحمض النووي حبلا واحدة أو مزدوجة الذين تقطعت بهم السبل التي تعرض 3 ' oh الطرفية ، مما تسبب في موت الخلايا المبرمج . يمكنك أن تفعل ذلك مرة واحدة في كل تجربة . ( تستخدم للتحقق من هذه التجربة العملية عدة مشاكل )

باء - الضوابط السلبية

استخدام لا تحتوي على تقرير التجارة والتنمية نفق إنزيمي رد فعل Buffer， استبدال TDT مع ddh2o Enzyme。 ( أساسا القضاء على الخلايا الخاصة بهم ، عملية التشغيل وغيرها من الأسباب التي تؤدي إلى تلطيخ غير محددة ، فضلا عن ضبط التعرض للتصوير ) .

جيم - فريق المعالجة التجريبية

المجموعة التجريبية تعمل بشكل طبيعي وفقا للتعليمات .

المجموعة الضابطة التجريبية

المجموعة التجريبية تعمل بشكل طبيعي وفقا للتعليمات .

الخطوات التجريبية

1 . إعداد العينة :

( 1 ) مسحات الخلايا أو الخلايا الملتصقة

برنامج تلفزيوني تنظيف مرة واحدة .

ملاحظة : إذا كنت تشعر بالقلق من أن الخلايا في مسحة لا عصا بقوة ، يمكنك تجفيف عينة لجعل الخلية عصا بقوة أكبر .

ب - التثبيت : إضافة كمية مناسبة من 4 ٪ polyformaldehyde ( برنامج تلفزيوني ) ، 4 ℃ لمدة 30 دقيقة . برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

نفاذية : إضافة كمية مناسبة من 0.4 في المائة tritonx-100 ( برنامج تلفزيوني ) ، نفاذية في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة . برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

د - الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

( 2 ) تعليق الخلايا أو تعليق الخلايا

جمع الخلايا ( 3-5 × 10 )⁶1000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

ب - التثبيت : إضافة كمية مناسبة من 4 ٪ polyformaldehyde ( برنامج تلفزيوني ) تعليق كامل الخلية ، 4 ℃ لمدة 30 دقيقة . 2000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

نفاذية : إضافة كمية مناسبة من 0.4 في المائة tritonx-100 ( برنامج تلفزيوني ) ، نفاذية في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة . 2000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

د - الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

قسم الأنسجة البارافين

أ - وضع شرائح البارافين على شريحة الرف ، خبز شرائح في 60 ℃ لمدة 60 دقيقة .

ب - dewaxing و الترطيب : شريحة من العينات التي وضعت في تسلسل الزيلين الأول ( 10 دقيقة ) الزيلين الثاني ( 10 دقيقة ) 100 ٪ إيثانول الأول ( 5 دقائق ) 100 ٪ إيثانول الثاني ( 5 دقائق ) 95 ٪ إيثانول ( 5 دقائق ) 90 ٪ إيثانول ( 5 دقائق ) 80 ٪ إيثانول ( 5 دقائق ) 70 ٪ إيثانول ( 5 دقائق ) ddh2o لمدة 5 دقائق ، شطف مرتين .

ملاحظة : زايلين السامة ، متقلبة ، يرجى القيام بذلك في خزانة .

ج - استخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل حول العينة ، واستخدام القلم ايمونوهيستوشيمي دائرة محيط العينة ، حتى أن المصب من خلال وسم .

ملاحظة : إذا كان محيط دائرة ايمونوهيستوشيمي السكتات الدماغية تم العثور على أن تكون مكسورة في التجارب اللاحقة ، يجب أن يكون في الوقت المناسب .

د - النفاذية : في نسبة 1 : 50 ، 2 مغ / مل من proteinase ك الحل المخفف مع برنامج تلفزيوني إلى التركيز النهائي من 40 ميكروغرام / مل ، 100 ميكروغرام / لتر قطرات على كل عينة ، بحيث تغطي جميع مناطق العينة ، احتضان في 37 ℃ لمدة 30 دقيقة .

ملاحظة : proteinase ك يمكن أن تخترق غشاء الخلية و الغشاء النووي ، مما يجعل من تلطيخ الكاشف في الخطوة التالية في نواة الخلية تماما للرد ، وتحسين كفاءة العلامات . فترة الحضانة طويلة جدا يمكن أن تزيد من خطر أن شريحة من الأنسجة سوف تسقط من الناقل شريحة في وقت لاحق في عملية الغسيل . من أجل الحصول على نتائج أفضل ، وتركيز proteinase ك الحضانة الوقت ودرجة الحرارة يجب أن يكون الأمثل وفقا لأنواع مختلفة من عينات الأنسجة .

هـ - نقع العينة في 1 × برنامج تلفزيوني شطف ثلاث مرات ، كل 5 دقائق ، واستخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل الزائدة ، وتجهيز العينة في مربع الرطب للحفاظ على الرطب .

ملاحظة : هذه الخطوة يجب أن يغسل proteinase ك نظيفة ، أو أنها سوف تتداخل بشكل خطير مع العلامات اللاحقة .

و الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

قسم الأنسجة المجمدة

ثابت : إزالة القسم المجمد و العودة إلى درجة حرارة الغرفة . شرائح كانت مغمورة في 4 ٪ polyformaldehyde ( برنامج تلفزيوني ) في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة . نقع العينة في 1 × برنامج تلفزيوني شطف ثلاث مرات لمدة 10 دقائق في كل مرة .

ملاحظة : إذا كان القلق من الفورمالديهايد التنظيف ليست نظيفة ، تأثير الصباغة النهائية . بعد الفورمالديهايد التثبيت ، إضافة كمية مناسبة من 2 مغ / مل من حمض الجليكوليك لمدة 10 دقائق ، تحييد بقايا سائل التثبيت ، ثم برنامج تلفزيوني التنظيف .

ب - استخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل حول العينة ، واستخدام القلم ايمونوهيستوشيمي دائرة محيط العينة ، حتى أن المصب من خلال وسم .

ملاحظة : إذا كان محيط دائرة ايمونوهيستوشيمي السكتات الدماغية تم العثور على أن تكون مكسورة في التجارب اللاحقة ، يجب أن يكون في الوقت المناسب .

ج : النفاذية في نسبة 1 : 50 ، 2 مغ / مل من proteinase ك الحل المخفف مع برنامج تلفزيوني إلى التركيز النهائي من 40 ميكروغرام / مل ، 100 ميكروغرام / لتر في كل عينة ، بحيث تغطي جميع مناطق العينة ، 37 ℃ الحضانة لمدة 20 دقيقة .

ملاحظة : بروتيناز ك يمكن أن تخترق غشاء الخلية و الغشاء النووي ، مما يجعل الخطوة التالية تلطيخ كاشففي نواة الخلية ، وتحسين كفاءة وضع العلامات . فترة الحضانة طويلة جدا يمكن أن تزيد من خطر أن شريحة من الأنسجة سوف تسقط من الناقل شريحة في وقت لاحق في عملية الغسيل . من أجل الحصول على نتائج أفضل ، وتركيز proteinase ك الحضانة الوقت ودرجة الحرارة يجب أن يكون الأمثل وفقا لأنواع مختلفة من عينات الأنسجة . إذا كان تركيز الأمثل proteinase ك و الحضانة الوقت لا يمكن تحسين تأثير الصباغة ، عينة يمكن أن تكون مغمورة في 1 ٪ تريتون x-100 ( برنامج تلفزيوني ) في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق . ثم شرائح كانت مغمورة في 1 × برنامج تلفزيوني شطف ثلاث مرات لمدة 5 دقائق في كل مرة .

د - غمر العينة في 1 × برنامج تلفزيوني شطف ثلاث مرات ، 5 دقائق في كل مرة ، واستخدام ورقة فلتر لامتصاص السوائل الزائدة ، وتجهيز العينة في مربع الرطب للحفاظ على الرطب .

ملاحظة : هذه الخطوة يجب أن يغسل proteinasek نظيفة ، أو أنها سوف تتداخل بشكل خطير مع العلامات اللاحقة من ردود الفعل .

هـ - الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

( 5 ) العلاج الإيجابي ( فقط إيجابية السيطرة على هذه الخطوة ، وغيرها من العينات مباشرة من خلال نفق رد فعل )

أ - 10 × دناز أنا عازلة مخففة في 1 : 10 مع ddh2o في 1 × دناز أنا عازلة .

ب - إضافة 100 ميكروغرام / لتر 1 × دناز أنا عازلة على العينة التي تم تجهيزها ، تغطي جميع مناطق العينة ، درجة حرارة الغرفة التوازن لمدة 5 دقائق .

دناز أنا ( 2 ش / μ ل ) إلى التركيز النهائي 20 ش / مل مع 1 × دناز أنا العازلة في 1 : 100 .

د - التخلص من العازلة ، إضافة 100 μ ل تركيز 20 ش / مل dnasei الحل ، احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة .

هـ - التخلص من دناز أنا سائل العمل ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات .

و الخطوة 2 - نفق رد الفعل .

نفق رد فعل

( 1 ) إعداد نفق رد فعل السائل

( 2 ) الخلايا الملتصقة ، مسحات الخلايا أو الأنسجة

أ - 50 μ ل نفق رد فعل السائل أضيفت إلى كل عينة ، حتى أن رد فعل السائل يغطي العينة بالتساوي . أفضل وقت الحضانة في 37 ℃ تجنب الضوء ( خلية تلطيخ الوقت الموصى به 15-30 دقيقة ، نسيج تلطيخ الوقت الموصى به 1 ساعة ) .

ملاحظة : 50 ميكرولتر تونل رد فعل السائل هو مناسبة لأنّ مسحة ، شريحة ، أو 96 حفرة لوحة ( حجم تونل رد فعل السائل يمكن تعديلها بشكل صحيح من قبل مختلف لوحات المسام لتغطية الخلايا ) . إذا كانت العينة لفحصها هو مسحة ، شريحة ، أو في 24 حفرة لوحة ، لوحة 12 حفرة أو 6 حفرة لوحة ، فيلم تبخير يمكن استخدامها ، أو محاولة استخدام الختم الذاتي حقيبة أو غيرها من المواد المناسبة إلى قطع تلقائيا إلى جولة من البلاستيك ورقة أصغر قليلا من حفرة ، بعد إسقاط تونل رد فعل السائل مغطى على العينة ، تونل رد فعل السائل يمكن منعه من التبخر ، و تونل رد فعل السائل يمكن أن تغطي العينة بالتساوي .

التخلص من نفق رد فعل السائل ، برنامج تلفزيوني تنظيف 2 مرات ، ثم استخدام 0.1 في المائة . تريتون X-100 ( برنامج تلفزيوني ، بما في ذلك 5mg / mlbsa ) تنظيف 3 مرات في كل مرة لمدة 5 دقائق ، حتى أن مواقف مردود العلامات يمكن إزالتها بشكل أنظف .

ج ( اختياري ) كل عينة من 5 ميكروغرام / مل من dapi تركيز مناسب ، درجة حرارة الغرفة لتجنب الضوءاحتضان5min。 بعد الانتهاء من الصباغة ، dapi الحل هو التخلص من برنامج تلفزيوني هو تنظيفها مرتين في كل مرة لمدة 5 دقائق .

د ( اختياري ) شرائح : 20 ميكرولتر المضادة للتبريد مضان أقراص ( المضادة للتبريد مضان ) في كل عينة .التبريد ختم أقراص قد لا تكون مناسبة لبعض الأصباغ ، قبل الاختبار التجريبي المقترح مباراةتغطية الشريحة ، اضغط برفق على تغطية الشريحة مع نهاية حادة من الملقط ، وإزالة فقاعات الهواء لجعل الختمكاملمنتدى

هـ - استخدام ورق الترشيح لامتصاص السوائل الزائدة ، إضافة 100 برنامج تلفزيوني يبقى عينة رطبة ،على الفور تحت المجهر الفلورسنت .

( 3 ) تعليق خلية أو تعليق خلية

أ 50 μ ltunel رد فعل السائل أضيفت إلى كل عينة أنبوب تعليق الخلايا بلطف .15-30min。 تعليق الخلايا بلطف كل 10 دقائق مع مايكرو ماصة .

ب 2000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، تخلى عن نفق رد فعل السائل ، واستخدام 0.1 في المائة تريتون X-100برنامج تلفزيوني يحتوي على 5 ملغ / مل جيش صرب البوسنة ) تنظيف 2 مرات ، كل 5 دقائق ، مثل السباحةرد الفعل علامة يمكن إزالتها نظيفة نسبيا .

( ج ) كل عينة أنبوب يضاف دابي مع تركيز 100 ميكرولتر 5 ميكروغرام / مل و حضنت لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة .

د - إضافة 400 ميكرولتر برنامج تلفزيوني تعليق الخلايا ، على الفور الكشف عنها بواسطة التدفق الخلوي أو مسحها فيلاحظ تحت المجهر مضان .

الاحتياطات

1 . قبل استخدام المنتج فورا الطرد المركزي إلى أسفل الأنبوب ، ثم إجراء التجارب اللاحقة .

2 . تلطيخ الوقت يمكن تخفيضها بشكل صحيح عندما يكون لون الخلفية الثقيلة أو غير محددة .

3 - زيادة سلبية وإيجابية السيطرة على المجموعة المقترحة في التجربة .

4 . ارتداء قناع ، والقفازات عند استخدام العنصر ، إذا لمس الجلد ، شطف فورا مع الكثير من الماء .

5 . الأصباغ الفلورية لديها مشاكل التبريد ، يرجى الانتباه إلى تجنب الضوء قدر الإمكان ، من أجل إبطاء التبريد الفلورية .

6 - هذا المنتج يقتصر على البحث العلمي ، لا تستخدم في التشخيص السريري أو العلاج ، لا تستخدم في الغذاء أو المخدرات ، لا يمكن تخزينها في المنازل العادية .

7 - من أجل سلامتك وصحتك ، يرجى ارتداء ملابس المختبر و القفازات القابل للتصرف .