nluc لوسیفراز إليسا كيت

nluc ليوسيفيريز هو جزيء صغير انزيم ( 19.1kda ) المعدلة وراثيا ، وهو مراسل الجينات البروتين bioluminescence . . . . . . . هو حوالي 150 مرة أكثر إشراقا من اليراعات أو البحر الكلى لوسيفراز ، باستخدام نوع جديد من نظائرها يمكن أن تنتج كثافة عالية ، توهج توهج إشارة مضيئة . تألق رد فعل لا تعتمد على بطولة و في نفس الوقت يحصل على أعلى حساسية الكشف عن طريق قمع الخلفية تألق إشارة .
nluc reporter gene assay كيت يوفر بسيطة ، واحدة إضافة كاشف مع حساسية عالية ، ويمكن أن تنتج إشارة قوية في وجود nluc ليوسيفيريز . . . . . . .
مكونات المنتج :

1 . المواد الخاصة :
PBS； متعدد القنوات . أبيض معتم / أسود خلية ثقافة لوحة ; تشيميلومينيسسينسي أو انزيم العلامات .
2 . إعداد قبل الاختبار :
( 1 ) nluc الكشف عن الركيزة ( 50 × و nluc الكشف عن الركيزة العازلة وضعت في درجة حرارة الغرفة .
( 2 ) كمية مناسبة من nluc الكشف عن الركيزة ( 50 * ) مختلطة مع العازلة من nluc الكشف عن الركيزة في نسبة 1 : 50 حسب الاستخدام الفعلي . على سبيل المثال ، إذا كان 10 مل من الحل المطلوب ، 0.2 مل اختبار الركيزة المطلوبة .
ملاحظة : من المستحسن أن تستخدم في الوقت الحاضر ، لا يزال رد فعل السائل الذي يحتوي على نوع جديد من الركيزة هو الموصى به بعد التجربة .
3 . طريقة التشغيل :
( 1 ) خلية ثقافة لوحة مأخوذة من خلية ثقافة مربع ، وضعت لمدة 5-15 دقيقة ، وعاد إلى درجة حرارة الغرفة .
ملاحظة : استخدام أبيض أو أسود شفاف خلية ثقافة المجلس للحد من التدخل بين المسام إشارة .
( 2 ) إضافة محلول اختبار
رد فعل السائل الذي يحتوي على ركيزة متوازنة إلى درجة حرارة الغرفة هو إضافة إلى كل خلية المسام من خلال قنوات متعددة بندقية ، حجم العينة هو نفسه كما ان من خلية ثقافة المتوسط و مختلطة بالتساوي . على سبيل المثال ، 96 لوحة المسام عادة إضافة 80-100 ميكرولتر متوسطة الثقافة ، في المقابل ، إضافة 80 ميكرولتر - 100 ميكرولتر اختبار الحل . 384 - لوحة المسام عادة إضافة 20-30 ميكرولتر من الثقافة المتوسطة ، و 20-30 ميكرولتر من الكشف عن الحل .
( 3 ) كشف الانارة
بعد الاختلاط ، nluc ليوسيفيريز مراسل الجينات تم الكشف عن النشاط في لمعان كيميائي أو انزيم المقاييس .
ملاحظة : للحصول على أفضل النتائج ، يرجى إكمال الاختبار في غضون ساعة واحدة بعد إضافة كاشف .
4 . تحليل البيانات :
( 1 ) التصميم التجريبي : وفقا لمختلف الأغراض التجريبية ، كل لوحة الثقافة ينبغي أن تكون مجموعة مراقبة ، مجموعة تجريبية فارغة السيطرة على المجموعة . من أجل ضمان دقة التجربة ، من الناحية النظرية ، كل مجموعة تجريبية ( بما في ذلك السيطرة على المجموعة ) ينبغي أن تطرح قياس مضان من اليراعات فارغة في السيطرة على المجموعة .
فارغة السيطرة على المجموعة :
خلفية و : غير transfected الخلايا + رد فعل السائل .
ملاحظة : عينة من مجموعة مراقبة فارغة يجب أن يكون نفس الكمية من العينة التجريبية ، بما في ذلك نفس الثقافة المتوسطة / مصل مزيج من عينة تجريبية ، بالإضافة إلى نفس وان الكاشف .
المجموعة التجريبية : transfected الخلايا تعامل مع مجمع التجريبية ( أي المجموعة التجريبية و ) .
③ السيطرة على المجموعة : transfected الخلايا لم تعامل مع نتائج موحدة ( أي السيطرة على المجموعة و ) .
( 2 ) النتائج المحسوبة :
المجموعة التجريبية = المجموعة التجريبية و الخلفية و .
السيطرة على المجموعة = السيطرة على المجموعة و الخلفية و .
التعبير متعددة = المجموعة التجريبية / السيطرة على المجموعة .

- 20 ℃ لمدة سنة واحدة . nluc الكشف عن الركيزة ( 50 × ) اقترح أن تكون معبأة في 80 ℃ . . . . . . .

1 ، رد فعل الأنزيمية حساسة لدرجة الحرارة ، يجب أن توازن جميع الكواشف في درجة حرارة الغرفة ( 20-25 ℃ ) قبل إضافة عينات الاختبار .
2 ، عند الكشف عن الحاجة إلى استخدام الأبيض أو الأسود 96 حفرة لوحة . إذا كان استخدام 96 حفرة شفافة لوحة مشتركة ، يمكن أن تنتج التدخل المتبادل بين المتاخمة الثقوب .
3 ، أدوات الاختبار : يمكن الكشف عن تشيميلومينيسسينسي الصكوك هي مناسبة ، ولكن بسبب إعدادات مختلفة وحساسية من أدوات مختلفة ، وقياس قيمة الإشارات الضوئية سوف تكون مختلفة .
4 ، أنبوب واحد fluorimetric الصك ، كل عينة مختلطة مع الكواشف بعد تحديد الوقت ينبغي أن تظل متسقة .
5 ، من أجل سلامتك ، قبل التجربة ، يرجى القيام بعمل جيد من الحماية الفعالة .