ضعف اللوسفراز مراسل الجينات كشف عدة

مجموعة اختبار Firefly و Renillaضعف اللوسفراز مراسل الجينات كشف عدةمن أجل توفير وسيلة فعالة للكشف عن التعبير الجيني ، في DLR الفحص ، نشاط اليراع و رينيا لوسيفراز يمكن الكشف عنها في عينة واحدة . أولا ، تم الكشف عن نشاط اللوسفريز مع لوسيفرين باعتبارها الركيزة ، ثم تم إضافة مادة تمنع نشاط اللوسفريز ، وفي الوقت نفسه ، تم الكشف عن نشاط اللوسفريز مع coelenterazine . . . . . . . باستخدام نظام bioluminescence اللوسفريز و الركيزة ، والتعبير الجيني يمكن الكشف عنها بدقة وكفاءة . في العام ، نقل عنصر تنظيمي أو 5 ' المروج فرعي من الجينات الفائدة المستنسخة في المنبع من لوسيفراس ، أو 3 ' UTR المنطقة المستنسخة في المصب من لوسيفراس لبناء مراسل الجينات البلازميد ، ثم transfected الخلايا ، ثم الخلايا تعامل مع الأدوية المناسبة ، وما إلى ذلك ، يتم تقسيم الخلايا . البحر الكلى اللوسفراز هو أكثر تستخدم كمعلمة داخلية لقياس كفاءة تعداء للقضاء على الاختلافات في عدد الخلايا و تعداء الكفاءة .
فلوريسئين هو بروتين مع الوزن الجزيئي حوالي 61 دينار ، والتي يمكن أن تحفز إنتاج oxyluciferin فلوريسئين في وجود ATP ، والمغنيسيوم ، والأكسجين . البحر الكلى ليوسيفيريز هو البروتين مع الوزن الجزيئي حوالي 36 دينار كويتي ، والتي يمكن أن تحفز أكسدة كولينتراميد ( COelenteramide ) في وجود الأكسجين ، ويمكن أن تنتج إشارات ضوئية أثناء أكسدة كولينتراميد . . . . . . . الإشارات الضوئية من كاشف عدة يمكن قياسها من خلال لمعان كيميائي ، انزيم العلامات أو السائل فلاش تستر . كاشف عدة لديها مزايا سرعة الكشف ، حساسية عالية ، واسعة النطاق الكشف ، لا تدخل من نشاط الخلايا الذاتية ، الخ .
ميزات المنتج :
سريع : انقسام الخلايا في غضون 10-15 دقيقة .
مريحة : كاشف من السهل إعداد عينة الكشف عن خطوة بسيطة .
حساسية : قادرة على الكشف عن انخفاض 10 زوي-20مول ليوسيفيريز
مجموعة خطية من تركيز انزيم يمكن أن تصل إلى 8 أوامر من الحجم .
مكونات المنتج :

انقسام الخلايا
( 1 ) إزالة متوسطة الثقافة ، إضافة برنامج تلفزيوني برفق يغسل مرتين ( خلية ملتصقة يمكن القيام بهذه العملية مباشرة ، تعليق خلية الطرد المركزي لجمع الخلايا ) . إضافة 1 × lysis العازلة ( مخفف من 4 : 1 مع الماء المعقم ) ثم وضع لوحة الثقافة على microvibrator لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة .
ملاحظة : الانحلال الحراري المنتج يمكن تخزينها لمدة 6 ساعات في درجة حرارة الغرفة ، ويمكن تخزينها لمدة طويلة في 70 ℃ ( تكسير المنتج لا يمكن أن تتكرر التجميد تحسن ) .
( 2 ) 10000-15000 دورة في الدقيقة من الانحلال الحراري المنتج كان الطرد المركزي لمدة 3-5 دقائق بعد الطرد المركزي ، supernatants تم نقلها إلى الجيش الشعبي الجديد أنبوب بعد الكشف .
ملاحظة : بعد انقسام الخلايا يمكن الكشف عنها على الفور ، ويمكن أيضا أن تكون مجمدة ، إذا لزم الأمر . تجميد تخزين العينات يجب أن تذوب في درجة حرارة الغرفة قبل الكشف عنها .
2 - إعداد سائل العمل
( 1 ) استعادة جميع المكونات إلى درجة حرارة الغرفة .
( 2 ) 0.2 مغ / مل لوسیفراز السائل العامل تم إعداده من قبل حل كامل من العنصر باء ، العنصر جيم .
ملاحظة : لا يمكن إعادة تجميد ذوبان اليراع ليوسيفيريز حل العمل ، إذا كان جرعة واحدة من التجربة هو أقل من ذلك ، فمن المستحسن أن يتم تعبئتها في مواصفات صغيرة حسب جرعة واحدة .
( 3 ) ه كان مخفف في البحر الكلى ليوسيفيريز السائل العامل مع عنصر د ، و 1 ماي ه أضيفت إلى 49 ميكروغرام ل د .
ملاحظة : البحر الكلى لوسيفراز السائل العمل يحتاج إلى أن تكون مستعدة في الوقت الحاضر .
تشيميلومينيسسينسي قيمة الكشف
( 1 ) فتح أداة مع وظيفة الكشف عن تشيميلومينيسسينسي وفقا لتعليمات التشغيل من الصك ، على سبيل المثال ، متعددة الوظائف انزيم أداة وسم ، تعيين المعلمة ، تحديد الوقت هو 10 ثانية ، تحديد الفاصل الزمني هو 2 ثانية .
( 2 ) عند تحديد كل عينة ، تأخذ عينة من 20-100 ul ( إذا كان حجم العينة كافية ، يرجى إضافة 100 ul ؛ إذا كان حجم العينة غير كافية ، يمكن تخفيض الجرعة بشكل صحيح ، ولكن الكشف عن ثقب الجرعة يجب أن تبقى متسقة ) . 1 × lysis عازلة فارغة السيطرة .
( 3 ) RLU ( وحدة الضوء النسبي ) قيمة تم قياسها بإضافة 100 ش اليراع اللوسفريز اختبار الحل .
ملاحظة : لأن هذا التألق هو عابر التألق ، فمن المستحسن أن يتم الكشف عنها على الفور بعد إضافة اليراع ليوسيفيريز العامل السائل .
( 4 ) إضافة 100 ul البحر الكلى ليوسيفيريز حل العمل ، وتحديد قيمة RLU ( وحدة الضوء النسبي ) .
( 5 ) في حالة استخدام البحر الكلى ليوسيفيريز كمرجع داخلي ، RLU القيمة التي تم الحصول عليها عن طريق قياس البحر الكلى ليوسيفيريز مقسوما على RLU القيمة التي تم الحصول عليها عن طريق قياس البحر الكلى ليوسيفيريز . . . . . . . تفعيل درجة الهدف مراسل الجينات بين عينات مختلفة تم مقارنتها على أساس النسب . حساب مماثل يمكن القيام به إذا كان استخدام اليراع ليوسيفيريز كمرجع .

- 20 ℃ التخزين . المكونات جيم ينصح باستخدام 2 ملغ / مل من الماء المعقم ، ب ، د ، ج .
وفقا لمتطلبات التجربة الصغيرة الكثير من التعبئة والتغليف . جميع سوائل العمل ينبغي أن تستخدم في الوقت الحاضر لتجنب تكرار التجميد والذوبان .

لوسيفراز مراسل الجينات عدة اختبار ،ضعف اللوسفراز مراسل الجينات كشف عدة