خدمة إعداد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة

الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ( ماب ) هي الأجسام المضادة التي تنتجها محددة مستضد ، المعروف أيضا باسم تقنية هجين ، التي تأسست في عام 1975 من قبل ج . كوهلر و ميلشتاين . المبدأ الرئيسي هو استخدام الأجسام المضادة التي تنتجها الخلايا باء و الخلايا السرطانية في التهجين والانصهار في خلايا الورم الهجين ، وإنتاج الأجسام المضادة .

الخطوات الرئيسية لإعداد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة باستخدام تقنية هجين تستهدف الجسم وتشمل :

( 1 ) إعداد المستضدات ،

( 2 ) تحصين الحيوانات ،

( 3 ) إعداد خلايا الطحال المناعية والخلايا المايلوما ،

( 4 ) اندماج الخلايا؛

( 5 ) ثقافة انتقائية للخلايا ورم هجين ،

( 6 ) فحص خلايا الورم الهجين؛

( 7 ) استنساخ خلايا ورم هجين .

( 8 ) فحص الأجسام المضادة وحيدة النسيلة؛

( 9 ) إنشاء خطوط خلايا هجين إفراز الأجسام المضادة وحيدة النسيلة :

( 10 ) إعداد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة بكميات كبيرة .

عملية إعداد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة :

1 ، تحصين الحيوان هو تحصين الفئران مع مستضد الهدف ، مما يجعل الفئران تنتج توعية الخلايا اللمفاوية B العملية . الإناث البال / ج الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين 6-8 أسابيع كانت تدار من قبل نظام المناعة . مستضد يدخل الجهاز المناعي من خلال الدورة الدموية المحيطية أو الليمفاوية ، ويحفز على استنساخ الخلايا اللمفاوية B المقابلة ، مما يجعل من تنشيط وتكاثر وتمايز في توعية الخلايا اللمفاوية B .

2 - خلية الانصهار كان يؤديها مقلة العين إزالة الدم ، والطحال تم إزالتها من خلال عملية معقمة ، والطحال كان مقذوف وطحن في طبق مسطح لإعداد تعليق خلية طحالية . إعداد خلايا المايلوما المتعددة و الماوس خلايا الطحال كانت مختلطة في نسبة معينة ، بولي ( جلايكول الإثيلين ) أضيفت إلى الخليط . في إطار العمل من البولي ايثيلين جلايكول ، أنواع مختلفة من الخلايا الليمفاوية يمكن أن تندمج مع خلايا المايلوما لتشكيل خلايا الورم الهجين .

3 ، الهدف من الثقافة هو اختيار انتقائي هجين خلية الانصهار ، عموما استخدام قبعة انتقائية متوسطة الثقافة . في قبعة متوسطة ، خلايا المايلوما غير منصهرة توفي بسبب نقص هيبوكسانتين جوانين phosphoribosyltransferase وعدم القدرة على تخليق الحمض النووي عن طريق العلاج . على الرغم من أن الخلايا اللمفاوية غير منصهرة قد هيبوكسانتين جوانين phosphoribosyltransferase ، فإنها لا يمكن أن البقاء على قيد الحياة لفترة طويلة و يموت تدريجيا في المختبر . فقط تنصهر خلايا الورم الهجين يمكن أن البقاء على قيد الحياة و تتكاثر في قبعة متوسطة لأن هيبوكسانتين جوانين phosphoribosyltransferase تم الحصول عليها من خلايا الطحال و المايلوما الخلية يمكن أن تتكاثر إلى أجل غير مسمى .

4 ، وفحص استنساخ ورم هجين إيجابية في قبعة متوسطة الثقافة تنمو خلايا ورم هجين ، سوى عدد قليل من إفراز الأجسام المضادة وحيدة النسيلة محددة سلفا من الخلايا ، لذلك يجب أن يكون الفحص والاستنساخ . عادة ما تكون محدودة تمييع استخدمت طريقة استنساخ ثقافة هجين الخلايا . باستخدام طريقة مناعية محددة وحساسة وسريعة ، إيجابية هجين الخلايا التي يمكن أن تنتج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة تم فرزهم و تضخيم .

بعد تحديد نوع فرعي ، خصوصية ، تقارب من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة يفرز من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ، وتحديد الحواتم والجزيئات من مستضد ، بالتبريد تتم في الوقت المناسب .

وإعداد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ( mcabs ) في الجسم الحي في الجسم الحي

الثقافة الخارجية الأسلوب .

balb / ج الفئران التي تم الحصول عليها عن طريق الحقن إينترابيريتونيل 0 . 5 مل السائل البارافين أو Dephytane كانت سابقة التجهيز . 1-2 أسابيع في وقت لاحق ، تم تلقيح الخلايا ورم هجين داخل الصفاق . هجين الخلايا تتكاثر في تجويف البطن من الفئران و إنتاج و إفراز الأجسام المضادة وحيدة النسيلة . انتفاخ البطن لوحظ في الفئران حوالي 1-2 أسابيع . كمية كبيرة من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة يمكن الحصول عليها عن طريق استخراج استسقاء من حقنة .

( 2 ) خلايا ورم هجين كانت تزرع في قارورة الثقافة في المختبر . في عملية الثقافة ، هجين خلية تنتج تفرز الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ، وجمع الثقافة طاف ، الطرد المركزي إزالة الخلايا و شظايا ، وبالتالي الحصول على المطلوب الأجسام المضادة وحيدة النسيلة . ولكن هذه الطريقة تنتج كمية محدودة من الأجسام المضادة . في السنوات الأخيرة ، العديد من أنواع جديدة من الثقافة والتكنولوجيا والأجهزة التي تظهر باستمرار ، مما أدى إلى زيادة كبيرة في إنتاج الأجسام المضادة . هجين خلية الانصهار ، يجب فحص قبل استخدامها . هجين الخلايا تنقسم إلى قسمين : أولا ، هجين الخلايا تم فرزهم . اثنين من طرق الفحص المختلفة والمبادئ التي يمكن أن تنتج الأجسام المضادة المحددة تم فرزهم من الابتدائي هجين الخلايا .

بعض الخدمات التجريبية