ظهارة المعدة البشرية متوسطة الثقافة

كيت Organoid البشرية المعدة Epithelial بالإضافة

ظهارة المعدة البشرية مجموعة متوسطةبالإضافة

و وصف المنتج

مجموعة من الأجهزة الظهارية في المعدة البشرية متوسطة الثقافةبالإضافة( أ )كيت Organoid البشرية المعدة Epithelial بالإضافةهو تعريف كيميائي خلية ثقافة المتوسط الذي يستخدم لإنشاء وصيانة الخلايا الجذعية البالغة المستمدة من الأجهزة الظهارية المعدة البشرية . . . . . . . تجديد الخلايا الظهارية في المعدة بسبب انتشار الخلايا الجذعية والخلايا السليفة . ظهارة المعدة البشرية أظهرت معظم الخصائص في هيكل الخلية نوع التكوين الذاتي تجديد . ولذلك ، فإنه يوفر الأمل في دراسة حالة مستقرة و أمراض المعدة البشرية ظهارة .

و معلومات المنتج

و غيرها من المواد والكواشف

و ظهارة المعدة البشرية متوسطة

و بعد تلقي الجهاز متوسطة ، متوسطة الثقافة4℃ الثلاجة تذويب ;

و بعد إذابة الجليد ، متوسطة الثقافة يجب أن تكون مختلطة تماما رأسا على عقب و رأسا على عقب ، ثم يتم تعبئتها بشكل منفصل في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية أو تنظيف طاولة العمل حسب الطلب اليومي .10 مل/أنابيب ;

و وسائل الإعلام بعد التعبئة والتغليف مختومة وتخزينها في-20℃عندما يستخدم نموذج المنفعة ، متوسطة الثقافة التي هي معبأة بشكل منفصل يؤخذ بها ووضعها في درجة حرارة الغرفة لتحقيق التوازن .

و إنشاء ثقافة فرعية من ظهارة المعدة البشرية

ملاحظة : البحث في المواد التي تنطوي على الأنسجة البشرية الرئيسية يجب أن تتبع جميع المؤسسات ذات الصلة واللوائح الحكومية . ويجب الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين قبل جمع مواد الأنسجة البشرية الرئيسية .

)أ( إنشاء الأجهزة الظهارية الأولية المعدة البشرية

و عينات الأنسجة الأولية يجب أن تكون في المختبر5 دقايقيوضع داخل الأنسجة الحية التي تحتوي على سائل ما قبل التبريد )2-8℃في أنبوب عينة ، عينة يجب أن تكون مشمولة في الأنسجة الحية الحفاظ على الحل ( إذا كانت العينة قد وضعت في عازلة أخرى أو متوسطة ، استبدال الحل كله مع ما قبل التبريد الأنسجة الحية الحفاظ على الحل ) . انخفاض درجة الحرارة )2~8℃نقل إلى المختبر .

و وضع مصفوفة الغراء قبل التجربة4℃الجليد مذاب ، متوسطة الثقافة مأخوذة و يوضع في درجة حرارة الغرفة . أنابيب الطرد المركزي ، أنابيب الاختبار ، أو البلاستيك الشفط التي تأتي في اتصال مع الخلايا تحتاج إلى أن تكون مزروعة في أجهزة مثل مكافحة الالتصاق محلول مغسول بعد الاستخدام .

و في تنظيف طاولة العمل ، تم نقل العينة إلى طبق بتري لتقييم ما إذا كان الحصول على الأنسجة تتكون من ظهارة . إذا كان هناك أي الدهون أو الأنسجة العضلية ، إزالة أكبر عدد ممكن من هذه nonepithelial المكونات باستخدام سكين أو ملقط تحت المجهر التشريحي . إذا كان هناك أي الدهون أو الأنسجة العضلية ، والمضي قدما على الفور .

و متوسطة أو متوسطة مع ضعف المقاومة .DPBSشطف الأنسجة مرتين .

و نقل الأنسجة باستخدام الملقط1.5 ملفي أنبوب الطرد المركزي ، كسر الجليد في0.5~2mm²حجم .

و قطع الأنسجة50أضعاف حجم الأنسجة ، ونقل إلى15 ملداخل أنبوب الطرد المركزي ، ضربة ثقيلة معلقة كتلة الأنسجة . في37℃و100 دورة في الدقيقةفي ظل حالة من درجة حرارة ثابتة هزاز ، أفقي تتأرجح الهضم15-30كل دقيقة10عندما الأنسجة كتلة من الواضح مشتتة ، تعليق هو عكر ، كمية مناسبة من الأنسجة تعليق الجهاز الهضمي تؤخذ لفحصها من قبل المجهر ، ثم المزيد من الخلايا الحية في تعليق يمكن أن تنهي عملية الهضم ، إذا كانت الأنسجة كتلة كبيرة أو لا يمكن هضمها بشكل صحيح تمديد عملية الهضم . يمكن استخدام مواصفات مختلفة أثناء الهضم ( بالترتيب من الكبيرة إلى الصغيرة مثل10 ملو5 ملو1 ملأنبوب ماص ضربات الأنسجة الهضم تعليق للمساعدة في الهضم الكامل . عندما تكون معظم أجزاء الأنسجة يمكن أن تمر1 ملعندما يتم امتصاص السائل ماصة ، عملية الهضم هو الانتهاء .

و ويلFBSإضافة خليط من الأنسجة الهضم2%، واستخدام100 ميكرومخلية تصفية .

و جمع الترشيح4℃تحت250gطرد مركزي3دقيقة . في حالة مرئية الأحمر هطول الأمطار ، تمتص طاف ، إضافة2 ملكريات الدم الحمراء lysates إعادة تعليق هطول الأمطار في درجة حرارة الغرفة1دقيقة4℃تحت250gطرد مركزي3دقيقة .

و supernatants تم امتصاصه و هطول علقت مرة أخرى في المتوسطة الأساسية طلائي الأجهزة .4℃تحت250gطرد مركزي3كرر هذه الخطوة مرة أخرى لمدة دقيقة لإزالةFBSقبل الطرد المركزي ، تعليق مناسب يمكن استخدامها للكشف عن نشاط الخلايا .

و supernatants يتم امتصاصه ، ثم كمية مناسبة من الخلايا يمكن أن تترسب في مصفوفة الغراء وفقا لمتطلبات الثقافة )> 70%( ملاحظة : يجب أن تكون لينة ، لا تولد الكثير من فقاعات الهواء ، درجة الحرارة العادية يجب أن تكون مختلطة بالتساوي في15تخلط جيدا ووضعها على الجليد . ملاحظة : ينبغي الحفاظ على قاعدة الغراء على الجليد لمنع تجمد . المضي قدما في هذه العملية في أقرب وقت ممكن . تقريبًا10 , 000يجب تطعيم الخلايا في25 ميكرولترمصفوفة الغراء . لا تضعف مصفوفة الغراء> 70%حجم المصفوفةوالحجم الكلي ) ، لأن هذا قد يمنع تشكيل قطرات صلبة بشكل صحيح .

و نقطة مختلطة تعليق مصفوفة الغراء والخلايا في الجزء السفلي من لوحة المسام الثقافة مباشرة ، واستخدام بندقية رئيس شقة تعليق قليلا ، وإيلاء الاهتمام إلى تجنب تعليق الاتصال الجدار الجانبي من لوحة المسام . ( التوصية :96ثقب لوحة التطعيم3 ~ 10 ميكرولترثقب48ثقب لوحة التطعيم10 ~ 20 ميكرولترثقب24ثقب لوحة التطعيم20 ~ 30 ميكرولترثقب

ملاحظة : بمجرد إعادة تعليق الجهاز في مصفوفة الغراء ، زرع لوحة في أقرب وقت ممكن لأن مصفوفة الغراء قد تجمد في أنبوب اختبار أو ماصة شفط .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COاحاضنة15-25دقيقة ، واسمحوا مصفوفة الغراء تجمد .

و بعد مصفوفة هلام هو متخثر ، درجة حرارة الغرفة التوازن مثل الجهاز متوسطة الثقافة تضاف ببطء على طول الجدار ، وبالتالي تجنب تدمير هيكل متخثر . ( التوصية :96فتحة لوحة إضافة100 ميكرولتر/ثقب48فتحة لوحة إضافة250 ميكرولتر/ثقب24فتحة لوحة إضافة500 ميكرولتر/ثقب ملاحظة : لا تضاف مباشرة إلى أعلى الركيزة المتوسطة قطرات هلام ، لأن هذا قد يدمر هيكل متخثر .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COادرجة حرارة ثابتة حاضنة .

و كل2-3استبدال وسائل الإعلام مرة واحدة في اليوم ، بعناية سحب وسائل الإعلام من خلال الثقوب ، إضافة جديدة ، درجة حرارة الغرفة متوازنة مثل الجهاز متوسطة .

و من الناحية المثالية ، الغدة الثديية البشرية ينبغي أن يكون الجهاز7-14في غضون أيام .

)ب( ثقافة فرعية من ظهارة المعدة البشرية

و في انتظار أن يكون الجهاز مثقف في قطر100 ~ 500 ميكرومعندما يكون الجهاز هو أكبر من ذلك بكثير ( أو عندما يصبح اسوداد لم تعد تنمو ) ، مثل الأجهزة يمكن أن تنتقل عن طريق1-2أسابيع المواد الاستهلاكية التي تأتي في اتصال مع الخلايا التالية يجب أن تستخدم بعد غسلها بالماء :

و طريقة التحضير يشمل الخطوات التالية : امتصاص والتخلص من الثقافة المتوسطة القديمة ، إضافة إلى المساواة في حجم الجهاز الظهاري الثقافة الأساسية المتوسطة ، كشط بلطف ( أو ضربة ) مصفوفة الغراء و الجهاز مثل خليط مع خلية مكشطة أو ماصة شفط ، ونقل إلى1.5 ملفي أنبوب الطرد المركزي ( أقصى قدر من جمع كل أنبوب )2-3ثقب الجهاز ، وتجنب حجم كبير جدا ، وانخفاض كفاءة الجهاز الهضمي5-10الثانوية ، مثل أجهزة مصفوفة الغراء الانفصال ،300gطرد مركزي3دقيقة .

و إزالة طاف إضافة5الجهاز الهضمي السائل الذي هو أكبر من حجم المصفوفة الغراء و الجهاز مثل خليط .37℃الهضم في حاضنة5-10دقيقة . اخلطي الخليط جيدا10μLإذا كان السائل مختلطة يهضم إلى كتل صغيرة من الخلايا ، الهضم غير كافية يمكن أن تطيل فترة الهضم بشكل صحيح . إذا كان عدد الخلايا المطلوبة ، فإنه يحتاج إلى هضم في خلية واحدة ، مما يطيل من وقت الهضم10-20بعد عشر دقائق ، تم إنهاء عملية الهضم الخلفية تلطيخ التريبان الأزرق عد الخلايا . رصد عملية الهضم عن كثب يمكن أن تقلل من وقت الحضانة في الجهاز مثل تفكك السوائل .

و بعد الهضم ، إضافة5متوسطة الحجم الأساسي من الأجهزة الظهارية هو مهب مختلطة بشكل موحد لوقف رد فعل الجهاز الهضمي .250gطرد مركزي3دقيقة .

و supernatants ماصة ، وغسلها مع الظهارة المتوسطة الأساسية2إزالة بقايا السائل الهضمي . الثانوية التنظيف يمكن أن تجمع بين أجهزة مماثلة في نفس أنبوب الطرد المركزي .

و بعد التنظيف ، الطرد المركزي هطول الخلايا المستزرعة في المختبر ، مصفوفة الغراء المضافة في الخلية هطول )> 70%و على الجليد مزيج متجانس ( الاهتمام ، مزيج متجانس ضربة العمل يجب أن تكون لينة ، لا تولد الكثير من الفقاعات ، درجة الحرارة العادية مزيج متجانس يحتاج إلى السيطرة على15تخلط جيدا ووضعها على الجليد . ملاحظة : تخفيف نسبة مصفوفة الغراء70%من أجل ضمان الاستقرار الهيكلي الركيزة الغراء في عملية الثقافة .

و نقطة مختلطة تعليق مصفوفة الغراء والخلايا في الجزء السفلي من لوحة المسام الثقافة مباشرة ، واستخدام بندقية رئيس شقة تعليق قليلا ، وإيلاء الاهتمام إلى تجنب تعليق الاتصال الجدار الجانبي من لوحة المسام . ( التوصية :96ثقب لوحة التطعيم3 ~ 10 ميكرولترثقب48ثقب لوحة التطعيم10 ~ 20 ميكرولترثقب24ثقب لوحة التطعيم20 ~ 30 ميكرولترثقب ملاحظة : هذه الخطوة ينبغي أن تكتمل في أقرب وقت ممكن لمنع مصفوفة من ترسيخ في درجة حرارة الغرفة .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COاحاضنة15-25دقيقة ، واسمحوا مصفوفة الغراء تجمد .

و بعد مصفوفة هلام هو متخثر ، درجة حرارة الغرفة التوازن مثل الجهاز متوسطة الثقافة تضاف ببطء على طول الجدار ، وبالتالي تجنب تدمير هيكل متخثر . ( التوصية :96فتحة لوحة إضافة100 ميكرولتر/ثقب48فتحة لوحة إضافة250 ميكرولتر/ثقب24فتحة لوحة إضافة500 ميكرولتر/ثقب ملاحظة : لا تضاف مباشرة إلى أعلى الركيزة المتوسطة قطرات هلام ، لأن هذا قد يدمر هيكل متخثر .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COادرجة حرارة ثابتة حاضنة .

و كل2-3استبدال وسائل الإعلام مرة واحدة في اليوم ، بعناية سحب وسائل الإعلام من خلال الثقوب ، إضافة جديدة ، درجة حرارة الغرفة متوازنة مثل الجهاز متوسطة .

و ترصد عن كثب حالة نمو الجهاز حتى الجهاز يحتاج إلى مزيد من التجارب .

V2.1طبعات

وقت التحديث :2025 / 06 / 20