القصبة الهوائية البشرية الجهاز متوسطة الثقافة

المجرى الهوائي البشري Organoid Kit Plus

القصبة الهوائية البشرية الجهاز متوسطة الثقافة كيتبالإضافة

و وصف المنتج

حقوق القصبة الهوائية جهاز الثقافة كيت )المجرى الهوائي البشري Organoid Kit Plusهو تعريف كيميائيا خلية متوسطة تستخدم لإنشاء وصيانة أجهزة القصبة الهوائية البشرية المستمدة من الخلايا الجذعية البشرية القصبة الهوائية . التجديد الذاتي ظهارة مجرى الهواء كان يقودها انتشار الخلايا الجذعية القاعدية . القصبة الهوائية البشرية الجهاز يحتوي على الخلايا القاعدية ، مهدبة الخلايا ، خلايا إفرازية و عدد قليل من خلايا الغدد الصم العصبية ، لذلك الجهاز يظهر جميع الخصائص مع مجرى الهواء ظهارة في بنية النظام ، نوع الخلية وتكوينها الذاتي تجديد حركية .

و معلومات المنتج

و غيرها من المواد والكواشف

و استخدام وسائل الإعلام في القصبة الهوائية البشرية

و بعد الحصول على الجهاز مثل متوسطة ، متوسطة الثقافة4℃ذوبان الجليد في الثلاجة .

و بعد إذابة الجليد ، متوسطة الثقافة يجب أن تكون مختلطة تماما رأسا على عقب و رأسا على عقب ، ثم يتم تعبئتها بشكل منفصل في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية أو تنظيف طاولة العمل حسب الطلب اليومي .10 مل/أنابيب ;

و وسائل الإعلام بعد التعبئة والتغليف مختومة وتخزينها في-20℃عندما يستخدم نموذج المنفعة ، متوسطة الثقافة التي هي معبأة بشكل منفصل يؤخذ بها ووضعها في درجة حرارة الغرفة لتحقيق التوازن .

و إنشاء ثقافة فرعية حقوق القصبة الهوائية

ملاحظة : البحث في المواد التي تنطوي على الأنسجة البشرية الأولية يجب أن تلتزم جميع المؤسسات ذات الصلة واللوائح الحكومية . ويجب الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين قبل جمع مواد الأنسجة البشرية الرئيسية .

)أ( إنشاء جهاز القصبة الهوائية البشرية الأولية

و عينات الأنسجة الأولية يجب أن تكون في المختبر5 دقايقيوضع داخل الأنسجة الحية التي تحتوي على سائل ما قبل التبريد )2-8℃في أنبوب عينة ، عينة يجب أن تكون مشمولة في الأنسجة الحية الحفاظ على الحل ( إذا كانت العينة قد وضعت في عازلة أخرى أو متوسطة ، استبدال الحل كله مع ما قبل التبريد الأنسجة الحية الحفاظ على الحل ) . انخفاض درجة الحرارة )2~8℃نقل إلى المختبر .

و وضع مصفوفة الغراء قبل التجربة4℃الجليد مذاب ، متوسطة الثقافة مأخوذة و يوضع في درجة حرارة الغرفة . أنابيب الطرد المركزي ، أنابيب الاختبار ، أو البلاستيك الشفط التي تأتي في اتصال مع الخلايا تحتاج إلى أن تكون مزروعة في أجهزة مثل مكافحة الالتصاق محلول مغسول بعد الاستخدام .

و في تنظيف طاولة العمل ، تم نقل العينة إلى طبق بتري لتقييم ما إذا كان الحصول على الأنسجة تتكون من ظهارة . إذا كان هناك أي الدهون أو الأنسجة العضلية ، إزالة أكبر عدد ممكن من هذه nonepithelial المكونات باستخدام سكين أو ملقط تحت المجهر التشريحي . إذا كان هناك أي الدهون أو الأنسجة العضلية ، والمضي قدما على الفور .

و متوسطة أو متوسطة مع ضعف المقاومة .DPBSشطف الأنسجة مرتين .

و نقل الأنسجة باستخدام الملقط1.5 ملفي أنبوب الطرد المركزي ، كسر الجليد في0.5~2mm²حجم .

و قطع الأنسجة50أضعاف حجم الأنسجة ، ونقل إلى15 ملداخل أنبوب الطرد المركزي ، ضربة ثقيلة معلقة كتلة الأنسجة . في37℃و100 دورة في الدقيقةفي ظل حالة من درجة حرارة ثابتة هزاز ، أفقي تتأرجح الهضم15-30كل دقيقة10عندما الأنسجة كتلة من الواضح مشتتة ، تعليق هو عكر ، كمية مناسبة من الأنسجة تعليق الجهاز الهضمي تؤخذ لفحصها من قبل المجهر ، ثم المزيد من الخلايا الحية في تعليق يمكن أن تنهي عملية الهضم ، إذا كانت الأنسجة كتلة كبيرة أو لا يمكن هضمها بشكل صحيح تمديد عملية الهضم . يمكن استخدام مواصفات مختلفة أثناء الهضم ( بالترتيب من الكبيرة إلى الصغيرة مثل10 ملو5 ملو1 ملأنبوب ماص ضربات الأنسجة الهضم تعليق للمساعدة في الهضم الكامل . عندما تكون معظم أجزاء الأنسجة يمكن أن تمر1 ملعندما يتم امتصاص السائل ماصة ، عملية الهضم هو الانتهاء .

و ويلFBSإضافة خليط من الأنسجة الهضم2%، واستخدام100 ميكرومخلية تصفية .

و جمع الترشيح4℃تحت250gطرد مركزي3دقيقة . في حالة مرئية الأحمر هطول الأمطار ، تمتص طاف ، إضافة2 ملكريات الدم الحمراء lysates إعادة تعليق هطول الأمطار في درجة حرارة الغرفة1دقيقة4℃تحت250gطرد مركزي3دقيقة .

و supernatants تم امتصاصه و هطول علقت مرة أخرى في المتوسطة الأساسية طلائي الأجهزة .4℃تحت250gطرد مركزي3كرر هذه الخطوة مرة أخرى لمدة دقيقة لإزالةFBSقبل الطرد المركزي ، تعليق مناسب يمكن استخدامها للكشف عن نشاط الخلايا .

و supernatants يتم امتصاصه ، ثم كمية مناسبة من الخلايا يمكن أن تترسب في مصفوفة الغراء وفقا لمتطلبات الثقافة )> 70%( ملاحظة : يجب أن تكون لينة ، لا تولد الكثير من فقاعات الهواء ، درجة الحرارة العادية يجب أن تكون مختلطة بالتساوي في15تخلط جيدا ووضعها على الجليد . ملاحظة : ينبغي الحفاظ على قاعدة الغراء على الجليد لمنع تجمد . المضي قدما في هذه العملية في أقرب وقت ممكن . تقريبًا10 , 000يجب تطعيم الخلايا في25 ميكرولترمصفوفة الغراء . لا تضعف مصفوفة الغراء> 70%حجم المصفوفةوالحجم الكلي ) ، لأن هذا قد يمنع تشكيل قطرات صلبة بشكل صحيح .

و نقطة مختلطة تعليق مصفوفة الغراء والخلايا في الجزء السفلي من لوحة المسام الثقافة مباشرة ، واستخدام بندقية رئيس شقة تعليق قليلا ، وإيلاء الاهتمام إلى تجنب تعليق الاتصال الجدار الجانبي من لوحة المسام . ( التوصية :96ثقب لوحة التطعيم3 ~ 10 ميكرولترثقب48ثقب لوحة التطعيم10 ~ 20 ميكرولترثقب24ثقب لوحة التطعيم20 ~ 30 ميكرولترثقب

ملاحظة : بمجرد إعادة تعليق الجهاز في مصفوفة الغراء ، زرع لوحة في أقرب وقت ممكن لأن مصفوفة الغراء قد تجمد في أنبوب اختبار أو ماصة شفط .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COاحاضنة15-25دقيقة ، واسمحوا مصفوفة الغراء تجمد .

و بعد مصفوفة هلام هو متخثر ، درجة حرارة الغرفة التوازن مثل الجهاز متوسطة الثقافة تضاف ببطء على طول الجدار ، وبالتالي تجنب تدمير هيكل متخثر . ( التوصية :96فتحة لوحة إضافة100 ميكرولتر/ثقب48فتحة لوحة إضافة250 ميكرولتر/ثقب24فتحة لوحة إضافة500 ميكرولتر/ثقب ملاحظة : لا تضاف مباشرة إلى أعلى الركيزة المتوسطة قطرات هلام ، لأن هذا قد يدمر هيكل متخثر .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COادرجة حرارة ثابتة حاضنة .

و كل2-3استبدال وسائل الإعلام مرة واحدة في اليوم ، بعناية سحب وسائل الإعلام من خلال الثقوب ، إضافة جديدة ، درجة حرارة الغرفة متوازنة مثل الجهاز متوسطة .

و من الناحية المثالية ، ينبغي أن تكون أجهزة مجرى الهواء البشرية7-14في غضون أيام .

)ب( ثقافة فرعية حقوق القصبة الهوائية

و في انتظار أن يكون الجهاز مثقف في قطر100 ~ 500 ميكرومعندما يكون الجهاز هو أكبر من ذلك بكثير ( أو عندما يصبح اسوداد لم تعد تنمو ) ، مثل الأجهزة يمكن أن تنتقل عن طريق1-2أسابيع المواد الاستهلاكية التي تأتي في اتصال مع الخلايا التالية يجب أن تستخدم بعد غسلها بالماء :

و طريقة التحضير يشمل الخطوات التالية : امتصاص والتخلص من الثقافة المتوسطة القديمة ، إضافة إلى المساواة في حجم الجهاز الظهاري الثقافة الأساسية المتوسطة ، كشط بلطف ( أو ضربة ) مصفوفة الغراء و الجهاز مثل خليط مع خلية مكشطة أو ماصة شفط ، ونقل إلى1.5 ملفي أنبوب الطرد المركزي ( أقصى قدر من جمع كل أنبوب )2-3ثقب الجهاز ، وتجنب حجم كبير جدا ، وانخفاض كفاءة الجهاز الهضمي5-10الثانوية ، مثل أجهزة مصفوفة الغراء الانفصال ،300gطرد مركزي3دقيقة .

و إزالة طاف إضافة5الجهاز الهضمي السائل الذي هو أكبر من حجم المصفوفة الغراء و الجهاز مثل خليط .37℃الهضم في حاضنة5-10دقيقة . اخلطي الخليط جيدا10μLإذا كان السائل مختلطة يهضم إلى كتل صغيرة من الخلايا ، الهضم غير كافية يمكن أن تطيل فترة الهضم بشكل صحيح . إذا كان عدد الخلايا المطلوبة ، فإنه يحتاج إلى هضم في خلية واحدة ، مما يطيل من وقت الهضم10-20بعد عشر دقائق ، تم إنهاء عملية الهضم الخلفية تلطيخ التريبان الأزرق عد الخلايا . رصد عملية الهضم عن كثب يمكن أن تقلل من وقت الحضانة في الجهاز مثل تفكك السوائل .

و بعد الهضم ، إضافة5متوسطة الحجم الأساسي من الأجهزة الظهارية هو مهب مختلطة بشكل موحد لوقف رد فعل الجهاز الهضمي .250gطرد مركزي3دقيقة .

و supernatants ماصة ، وغسلها مع الظهارة المتوسطة الأساسية2إزالة بقايا السائل الهضمي . تنظيف الثانوية يمكن أن تجمع بين أجهزة مماثلة في نفس أنبوب الطرد المركزي

و بعد التنظيف ، الطرد المركزي هطول الخلايا المستزرعة في المختبر ، مصفوفة الغراء المضافة في الخلية هطول )> 70%و على الجليد مزيج متجانس ( الاهتمام ، مزيج متجانس ضربة العمل يجب أن تكون لينة ، لا تولد الكثير من الفقاعات ، درجة الحرارة العادية مزيج متجانس يحتاج إلى السيطرة على15تخلط جيدا ووضعها على الجليد . ملاحظة : تخفيف نسبة مصفوفة الغراء70%من أجل ضمان الاستقرار الهيكلي الركيزة الغراء في عملية الثقافة .

و نقطة مختلطة تعليق مصفوفة الغراء والخلايا في الجزء السفلي من لوحة المسام الثقافة مباشرة ، واستخدام بندقية رئيس شقة تعليق قليلا ، وإيلاء الاهتمام إلى تجنب تعليق الاتصال الجدار الجانبي من لوحة المسام . ( التوصية :96ثقب لوحة التطعيم3 ~ 10 ميكرولترثقب48ثقب لوحة التطعيم10 ~ 20 ميكرولترثقب24ثقب لوحة التطعيم20 ~ 30 ميكرولترثقب ملاحظة : هذه الخطوة ينبغي أن تكتمل في أقرب وقت ممكن لمنع مصفوفة من ترسيخ في درجة حرارة الغرفة .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COاحاضنة15-25دقيقة ، واسمحوا مصفوفة الغراء تجمد .

و بعد مصفوفة هلام هو متخثر ، درجة حرارة الغرفة التوازن مثل الجهاز متوسطة الثقافة تضاف ببطء على طول الجدار ، وبالتالي تجنب تدمير هيكل متخثر . ( التوصية :96فتحة لوحة إضافة100 ميكرولتر/ثقب48فتحة لوحة إضافة250 ميكرولتر/ثقب24فتحة لوحة إضافة500 ميكرولتر/ثقب ملاحظة : لا تضاف مباشرة إلى أعلى الركيزة المتوسطة قطرات هلام ، لأن هذا قد يدمر هيكل متخثر .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COادرجة حرارة ثابتة حاضنة .

و كل2-3استبدال وسائل الإعلام مرة واحدة في اليوم ، بعناية سحب وسائل الإعلام من خلال الثقوب ، إضافة جديدة ، درجة حرارة الغرفة متوازنة مثل الجهاز متوسطة .

و ترصد عن كثب حالة نمو الجهاز حتى الجهاز يحتاج إلى مزيد من التجارب .

V2.1طبعات

وقت التحديث :2025 / 5 / 27