بالإضافة إلى ذلك ( التضخيم ) من القولون البشرية متوسطة الثقافة

مجموعة Organoid المستعمرة البشرية بالإضافة( أ )التوسعو

حقوق القولون الجهاز متوسطة الثقافة كيتبالإضافةتضخيم

و وصف المنتج

حقوق القولون الجهاز متوسطة الثقافة مجموعةبالإضافةالتضخيممجموعة Organoid المستعمرة البشرية بالإضافة (التوسع) بالإضافة[ هو وسيلة تستخدم لتضخيم حقوق القولون الجهاز ، الجهاز يتكون أساسا من القولون القولون الخلايا الجذعية الخلايا الاصلية . القولون مثل الجهاز يعيد خصائص ظهارة القولون في الجسم الحي في جوانب التجديد الذاتي والتمايز القدرة ، بنية الأنسجة ، نوع الخلية ، وظيفة ، وبالتالي فهي مثالية في المختبر نموذج حقوق القولون الدراسة .

و معلومات المنتج

و الكواشف والمواد الاستهلاكية الأخرى

و القولون الإنسان الجهاز متوسطة الثقافة ( التضخيم )

و بعد تلقي الجهاز متوسطة ، متوسطة الثقافة4ج الثلاجة تذويب .

و بعد إذابة الجليد ، متوسطة الثقافة يجب أن تكون مختلطة تماما رأسا على عقب و رأسا على عقب ، ثم يتم تعبئتها بشكل منفصل في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية أو تنظيف طاولة العمل حسب الطلب اليومي .10 مل/أنابيب .

و وسائل الإعلام بعد التعبئة والتغليف مختومة وتخزينها في-20℃عندما يستخدم نموذج المنفعة ، متوسطة الثقافة التي هي معبأة بشكل منفصل يؤخذ بها ووضعها في درجة حرارة الغرفة لتحقيق التوازن .

و إنشاء ثقافة فرعية حقوق القولون

ملاحظة : البحث في المواد التي تنطوي على الأنسجة البشرية الأولية يجب أن تلتزم جميع المؤسسات ذات الصلة واللوائح الحكومية . ويجب الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين قبل جمع مواد الأنسجة البشرية الرئيسية .

)أ( إنشاء جهاز الإنسان القولون الأولية

و عينات الأنسجة الأولية يجب أن تكون في المختبر5 دقايقيوضع داخل الأنسجة الحية التي تحتوي على سائل ما قبل التبريد )2-8℃في أنبوب عينة ، عينة يجب أن تكون مشمولة في الأنسجة الحية الحفاظ على الحل ( إذا كانت العينة قد وضعت في عازلة أخرى أو متوسطة ، استبدال الحل كله مع ما قبل التبريد الأنسجة الحية الحفاظ على الحل ) . انخفاض درجة الحرارة )2~8℃نقل إلى المختبر .

و وضع مصفوفة الغراء قبل التجربة4℃الجليد مذاب ، متوسطة الثقافة مأخوذة و يوضع في درجة حرارة الغرفة . أنابيب الطرد المركزي ، أنابيب الاختبار ، أو البلاستيك الشفط التي تأتي في اتصال مع الخلايا تحتاج إلى أن تكون مزروعة في أجهزة مثل مكافحة الالتصاق محلول مغسول بعد الاستخدام .

و في تنظيف طاولة العمل ، تم نقل العينة إلى طبق بتري لتقييم ما إذا كان الحصول على الأنسجة تتكون من ظهارة . إذا كان هناك أي الدهون أو الأنسجة العضلية ، إزالة أكبر عدد ممكن من هذه nonepithelial المكونات باستخدام سكين أو ملقط تحت المجهر التشريحي . إذا كان هناك أي الدهون أو الأنسجة العضلية ، والمضي قدما على الفور .

و نقل عينة من الأنسجة مع precooling تحتوي على مفاعلة مزدوجةDPBSفي طبق بتري ، تجويف الأمعاء تواجه التصاعدي ، يد واحدة تستخدم لعقد نهاية واحدة من أنسجة الأمعاء ، ومن ناحية أخرى يستخدم قطعة بلطف كشط المخاط أو بقايا البراز على سطح تجويف الأمعاء ، ثم أنسجة القولون هو وضعه في موقف جديد يحتوي على مضاد مزدوج لوحة .DPBSتنظيف الأطباق2-3مرة . كسر تنظيف الأمعاء إلى حوالي2 مم * 5 ممالحجم ، ثم انتقل إلى50 ملأنبوب الطرد المركزي ، صدمة شديدة30s(عمودي صعودا وهبوطا التذبذب20عد مرة واحدة في كل مرة1sثلاث مراتوهجر طاف3مرة .

و الهضم : إضافة30 ملالDPBSإضافة إلى الحل300μL 0.5M EDTAإلىEDTAالتركيز النهائي5 ملممجموعة4℃شاكر80 دورة في الدقيقةالهضم20 ~ 30 دقيقةاعتمادا على حجم العينة20إذا كان هيكل كامل من عطلة يمكن ملاحظتها ، الخطوة التالية يمكن القيام به .

و التنظيف : بعد الانتهاء من عملية الهضم ، لا يزال قائما في انتظار هطول الامعاء ، والتخلص من طاف . . . . . . . إضافة precoolingDPBS، يهز بلطف ، تجاهل طاف بعد الوقوف ، كرر2إزالة الثانويةEDTAمنتدى

و تعليق : إضافة30 ملprecooling تحتوي على0.1٪ BSAالDPBSدوامةعشراتإزالة100 ميكرومتصفية الشاشة ، وجمع الأنسجة تعليق من خلال تصفية الشاشة ، وجمع مرارا وتكرارا2مرة .

و جمع300gقوة الطرد المركزي4℃طرد مركزي3 دقايقمنتدى

و supernatants تم امتصاصه و هطول علقت مرة أخرى في وسائل الإعلام الأساسية طلائي الأجهزة .

و 300gقوة الطرد المركزي4℃طرد مركزي3 دقايقsupernatants تم امتصاصه ، ثم كمية مناسبة من الخلايا التي تم الحصول عليها وفقا لمتطلبات الثقافة وترسب في مصفوفة الغراء )> 70%( ملاحظة : يجب أن تكون لينة ، لا تولد الكثير من فقاعات الهواء ، درجة الحرارة العادية يجب أن تكون مختلطة بالتساوي في15تخلط جيدا ووضعها على الجليد . ملاحظة : ينبغي الحفاظ على قاعدة الغراء على الجليد لمنع تجمد . المضي قدما في هذه العملية في أقرب وقت ممكن . تقريبًا50يجب تطعيم25 ميكرولترمصفوفة الغراء . لا تضعف مصفوفة الغراء> 70%حجم المصفوفةوالحجم الكلي ) ، لأن هذا قد يمنع تشكيل قطرات صلبة بشكل صحيح .

و نقطة مختلطة تعليق مصفوفة الغراء والخلايا في الجزء السفلي من لوحة المسام الثقافة مباشرة ، واستخدام بندقية رئيس شقة تعليق قليلا ، وإيلاء الاهتمام إلى تجنب تعليق الاتصال الجدار الجانبي من لوحة المسام . ( التوصية :96ثقب لوحة التطعيم3 ~ 10 ميكرولترثقب48ثقب لوحة التطعيم10 ~ 20 ميكرولترثقب24ثقب لوحة التطعيم20 ~ 30 ميكرولترثقب

و ملاحظة : بمجرد إعادة تعليق الجهاز في مصفوفة الغراء ، زرع لوحة في أقرب وقت ممكن لأن مصفوفة الغراء قد تجمد في أنبوب اختبار أو ماصة شفط .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COاحاضنة15-25دقيقة ، واسمحوا مصفوفة الغراء تجمد .

و بعد مصفوفة هلام هو متخثر ، درجة حرارة الغرفة التوازن مثل الجهاز متوسطة الثقافة تضاف ببطء على طول الجدار ، وبالتالي تجنب تدمير هيكل متخثر . ( التوصية :96فتحة لوحة إضافة100 ميكرولتر/ثقب48فتحة لوحة إضافة250 ميكرولتر/ثقب24فتحة لوحة إضافة500 ميكرولتر/ثقب ملاحظة : لا تضاف مباشرة إلى أعلى الركيزة المتوسطة قطرات هلام ، لأن هذا قد يدمر هيكل متخثر .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COادرجة حرارة ثابتة حاضنة .

و كل2-3استبدال وسائل الإعلام مرة واحدة في اليوم ، بعناية سحب وسائل الإعلام من خلال الثقوب ، إضافة جديدة ، درجة حرارة الغرفة متوازنة مثل الجهاز متوسطة .

و رصد حالة نمو الجهاز عن كثب .

)ب( ثقافة فرعية من القولون البشري

و في انتظار أن يكون الجهاز مثقف في قطر600 ميكرومعندما يكون الجهاز هو أكبر من ذلك بكثير ( أو عندما يصبح اسوداد لم تعد تنمو ) ، مثل الأجهزة يمكن أن تنتقل عن طريق1أسابيع المواد الاستهلاكية التي تأتي في اتصال مع الخلايا التالية يجب أن تستخدم بعد غسلها بالماء :

و طريقة التحضير يشمل الخطوات التالية : امتصاص والتخلص من الثقافة المتوسطة القديمة ، إضافة إلى المساواة في حجم الجهاز الظهاري الثقافة الأساسية المتوسطة ، كشط بلطف ( أو ضربة ) مصفوفة الغراء و الجهاز مثل خليط مع خلية مكشطة أو ماصة شفط ، ونقل إلى1.5 ملفي أنبوب الطرد المركزي ( أقصى قدر من جمع كل أنبوب )2-3ثقب الجهاز ، وتجنب حجم كبير جدا ، وانخفاض كفاءة الجهاز الهضمي5-10الثانوية ، مثل أجهزة مصفوفة الغراء الانفصال ،300gطرد مركزي3دقيقة .

و إزالة طاف إضافة5الجهاز الهضمي السائل الذي هو أكبر من حجم المصفوفة الغراء و الجهاز مثل خليط .37℃الهضم في حاضنة3دقيقة . اخلطي الخليط جيدا10μLإذا كان السائل مختلطة هو هضمها بواسطة المجهر300 ميكرومكتلة من اليسار واليمين الأجهزة .

ملاحظة : الخطوات التالية من أجل إعادة تعليق هطول تحتاج إلى السيطرة على قوة ضربة و مرات .300 ميكروم左右。

و بعد الهضم ، إضافة5متوسطة الحجم الأساسي من الأجهزة الظهارية هو مهب بلطف إلى مزيج جيد لوقف رد فعل الجهاز الهضمي .250gطرد مركزي3دقيقة .

و supernatants ماصة ، وغسلها مع الظهارة المتوسطة الأساسية2إزالة بقايا السائل الهضمي . الثانوية التنظيف يمكن أن تجمع بين أجهزة مماثلة في نفس أنبوب الطرد المركزي .

و بعد التنظيف ، الطرد المركزي هطول الخلايا المستزرعة في المختبر ، مصفوفة الغراء المضافة في الخلية هطول )> 70%و على الجليد مزيج متجانس ( الاهتمام ، مزيج متجانس ضربة العمل يجب أن تكون لينة ، لا تولد الكثير من الفقاعات ، درجة الحرارة العادية مزيج متجانس يحتاج إلى السيطرة على15تخلط جيدا ووضعها على الجليد . ملاحظة : تخفيف نسبة مصفوفة الغراء70%من أجل ضمان الاستقرار الهيكلي الركيزة الغراء في عملية الثقافة .

و نقطة مختلطة تعليق مصفوفة الغراء والخلايا في الجزء السفلي من لوحة المسام الثقافة مباشرة ، واستخدام بندقية رئيس شقة تعليق قليلا ، وإيلاء الاهتمام إلى تجنب تعليق الاتصال الجدار الجانبي من لوحة المسام . ( التوصية :96ثقب لوحة التطعيم3 ~ 10 ميكرولترثقب48ثقب لوحة التطعيم10 ~ 20 ميكرولترثقب24ثقب لوحة التطعيم20 ~ 30 ميكرولترثقب تقريبًا50ثلاث مجموعات من الأجهزة التي تم تلقيحها في25 ميكرولترمصفوفة الغراء . ملاحظة : هذه الخطوة ينبغي أن تكتمل في أقرب وقت ممكن لمنع مصفوفة من ترسيخ في درجة حرارة الغرفة .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COاحاضنة15-25دقيقة ، واسمحوا مصفوفة الغراء تجمد .

و بعد مصفوفة هلام هو متخثر ، درجة حرارة الغرفة التوازن مثل الجهاز متوسطة الثقافة تضاف ببطء على طول الجدار ، وبالتالي تجنب تدمير هيكل متخثر . ( التوصية :96فتحة لوحة إضافة100 ميكرولتر/ثقب48فتحة لوحة إضافة250 ميكرولتر/ثقب24فتحة لوحة إضافة500 ميكرولتر/ثقب ملاحظة : لا تضاف مباشرة إلى أعلى الركيزة المتوسطة قطرات هلام ، لأن هذا قد يدمر هيكل متخثر .

و وضع لوحة الثقافة37℃و5٪ COادرجة حرارة ثابتة حاضنة .

و كل2-3استبدال وسائل الإعلام مرة واحدة في اليوم ، بعناية سحب وسائل الإعلام من خلال الثقوب ، إضافة جديدة ، درجة حرارة الغرفة متوازنة مثل الجهاز متوسطة .

و ترصد عن كثب حالة نمو الأجهزة حتى الأجهزة تحتاج إلى مزيد من التجارب .

V2.0طبعات

وقت التحديث :2025 / 6 / 12