فيروس الحمض النووي الجينوم / الحمض النووي الريبي كيت

خصائص السلع :

الـ PCRالخطوات الأساسية والاحتياطات ؟

مبدأ التجربة

الـ PCRفي المختبر الاصطناعي انتقائية التضخيمالحمض النوويطريقة مماثلة لتلك التي في الكائنات الحية .الحمض النووينسخة . في الكائنات الحيةالحمض النوويالنسخ المتماثل يتطلب قالب ، التمهيدي ،الحمض النوويبوليميريزالحمض النوويهيليكيزdNTPsفي المختبرالـ PCRردود الفعل تتطلب أيضا عناصر مماثلة ، بما في ذلك قوالب ، التمهيديPCR العازلةوتاكأنزيمdNTPsالاشعال هي مصممة بشكل مصطنع من أجل تحقيق التضخيم من موقع معين .PCR العازلةتوفير بيئة عازلة للاستجابة؛ ردود الفعل هي نفسها في الكائنات الحية ،الحمض النوويفتح سلسلة مزدوجة ، التمهيدي جنبا إلى جنب مع القالب ، ويمتد لتشكيل سلسلة جديدة . هذه العمليات تعتمد على الكائنات الحية .الحمض النوويفي المختبر عن طريق التحكم في درجة حرارة التفاعل . كما تستخدم عادة94℃تبديل طبيعة القالبالحمض النوويفي درجة حرارة التخمير ، التمهيدي المستعبدين إلى القالب .72℃جزء معين يمكن أن يتحقق من خلال تكرار العملية .الحمض النوويالتضخيم . لم يكن حتى الدورة الثالثة قد بدأت .الحمض النووينفس القسمالحمض النوويالجزيئات التي تنتج المزيد من الأهداف بشكل دائريالحمض النوويمضاعفة مؤشر القطاع .

في مرحلة لاحقة من التضخيم,بسبب تراكم المنتجات,في الأصل أضعافا مضاعفة ردود الفعل في منحنى مسطح,المنتج لم يعد من الواضح أن زيادة مع عدد من الدورات,وهذا ما يسمى تأثير منصة . منصة المرحلة(الهضبة)انخفاض تركيز المنتجات غير المحددة الناجمة عن عدم تطابق الأصلي يمكن أن تتوسع إلى مستوى أعلى . ولذلك ، ينبغي أن تنظم بشكل صحيح عدد من الدورات ، قبل نهاية المرحلة منصة رد فعل ، والحد من المنتجات غير المحددة . وصول منصة الفترة(الهضبة)عدد الدورات المطلوبة يعتمد على نسخة من القالب في العينة .

ثانياً - العناصر الرئيسية

1.قوالب يمكن أن تكون في أشكال مختلفة ، بما في ذلك أساسا الجينومالحمض النوويبلازميدالحمض النوويالجينوم الفيروسيالحمض النوويوالـ PCRالمنتجاتcDNAالانتظار ، ولكن لا يمكنالرناعن أنواع مختلفة من القوالب ، الفرق الرئيسي يكمن في وقت ما قبل التشويه والتحريف و كمية من القوالب . جينوم كبيرالحمض النوويقبل تبديل طبيعة الوقت10 دقايقبلازميد , كافيةDNA2minالجينوم الفيروسيالحمض النوويقبل التشويه والتحريفدقيقتينوالـ PCRقبل تعديل المنتجدقيقتينحسناً

انتبهcDNAسلسلة واحدةالحمض النووي، ولكن لا يزال يمكن القيام بهالـ PCRالقالب ، ولكن فقط في الجولة الأولى من دورة واحدة فقط التمهيدي ملزمة لتجميع سلسلة أخرى . من الجولة الثانية ، واثنين من الاشعال ملزمة مواقع محددة ، وبالتالي تحقيقالـ PCRاتصال . سلسلة واحدةالرناولكن لا يمكن أن تحمل علىالـ PCRالتضخيم ، لأن تحقيقالـ PCRرد فعلالحمض النوويبوليميريز ، يمكن فقط تحديدالحمض النوويسلسلة .

2.عن حجم القالب ، عموما25ulنظامالحمض النووينوعية50100ngالجينوم .الحمض النوويبسبب بنية معقدة ، استخراج التركيز غالبا ما تكون كبيرة .الـ PCRولذلك ، استخراجالحمض النوويالتدرج تمييع . خلاف ذلك ، تركيزات عالية جدا قد يؤدي إلى التضخيم غير محددة . بلازميدالـ PCRالمنتج لا تحتاج إلى تخفيف بسبب بنية بسيطة ، وانخفاض تركيز الاستخراج .

الـ PCRما هي المشاكل التي ينبغي أن تولي اهتماما في التجربةماذا ؟

لا شيءCTالقيمة

نتائج الاختبار لا تواجهسي تيحالة القيمة,تحقق لمعرفة ما إذا كان هناك أي من الأسئلة التاليةس

1عدد الدورات غير كافية(عموما لا تتجاوز45دورة,ليس فقط زيادة قيمة الخلفية,الكمية غير مسموح) ;

2والـ PCRإعدادات البرنامج خطأ,هناك خطأ في الكشف عن مضان إشارة . عاديSGاعتماد القانون72℃تمديد الوقت جمع,تاكمانعادة ما يتم جمع الإشارات في نهاية أو تمديد الصلب,وبالإضافة إلى ذلك ، إذا كان جمع مضان مختارةن

3التمهيدي أو التحقيق . يمكن تمريرصفحةالكهربائي للكشف عن تدهور التمهيدي والتحقيقن

4القالب قد تتحلل أو عدم كفاية التحميل(لا أكثر500ng،وفقا لتعليمات كيتوعينات من تركيز غير معروف ينبغي أن تبدأ مع أقصى تركيز سلسلة تمييع عينات .نإذا كان قالب تدهور يحدث,إدخال الشوائب وتكرار التجميد تحسن ينبغي النظر فيها .,واقترح أن يكون قالب عينة صغيرة من التعبئة الاحتياطي,تجنب تكرار التجميد تحسنن

5إذا كان التحقيق التمهيدي هو مناسب(وخاصة التمهيدي عبر نترون,لضمان تضخيم الجينومالحمض النووي؛المنبع والمصب التمهيديتي امقيمة تتجاوز4℃أعلاه سوف تؤثر أيضا على التضخيمومنتدى

CTقيمة في وقت متأخر جدا

في الكمية النسبية، Ctالتحكم في القيمة1525أفضل بين,إذا كان في الكمية المطلقة,عينة مع انخفاض عدد النسخ، Ctالقيمة سوف تزيد,ولكن عموما لا ينبغي أن تتجاوز40دورة,وإلا فإن الكمية غير دقيقة .

وهكذا,حكمسي تيإذا كانت قيمة غير طبيعية في وقت متأخر جدا,يجب أن تتم وفقا لتصميم التجربة و الهدف .

1انخفاض كفاءة التضخيم . النسبة بين الاشعال او الاشعال و تحقيقات غير مناسبة,تحتاج إلى تحسيننالتمهيدي أو يدقق في تصميم غير معقول,تحتاج إلى إعادة تصميمن

2والـ PCRالإجراء غير مناسب,رد فعل على ثلاث خطوات,الصلب الأمثلوتمديد درجة الحرارة,يمكن أن تقلل من درجة حرارة التخمير بشكل صحيحنصلبوتمديد وقت قصير(يمكن تمديدها في الوقت الموصى به10s);

3وMgCl2تركيز غير مناسب,زيادة تركيز أيون المغنيسيوم .الـ PCRتدهور مختلف مكونات التفاعل أو عدم كفاية كمية العينةن

4والـ PCRالمنتج طويل جدا .الـ PCRتصميم المنتج يتجاوز500bp؛

5المانع موجود في القالب . عالية النقاء قالبالـ PCRاختبار أو تمييع القالب .

منتجات الشركة للبيع :