trzol هل ( عينة السائل استخراج الحمض النووي الريبي كاشف )

خصائص السلع :

ظروف التخزين :

trzol هل يمكن أن تبقى مستقرة لمدة 12 شهرا في درجة حرارة الغرفة . ومع ذلك ، من أجل تحقيق أفضل النتائج ، ونحن نوصي الحفاظ على البيئة في 2-8 درجة مئوية .

نصائح هامة :

المواد السامة التي تأتي في اتصال مع الجلد أو ابتلاع بطريق الخطأ يمكن أن يسبب حروق . مرة واحدة في اتصال مع الجلد ، يغسل فورا مع الكثير من المنظفات والمياه النظيفة . إذا كنت تشعر بعدم الارتياح ، راجع الطبيب والبحث عن العلاج المناسب مع المكونات الأخرى .

منتوج عرض :

trzol هل الكاشف هو الكاشف الذي يستخرج مجموع الحمض النووي الريبي مباشرة من الخلايا أو الأنسجة . فإنه يحافظ على سلامة الجيش الملكي النيبالي عندما يكسر ويحل الخلايا . بعد إضافة الكلوروفورم ، الطرد المركزي ، العينة مقسمة إلى عينة المياه طبقة ، طبقة وسطى و العضوية طبقة . الحمض النووي الريبي موجود في عينة المياه طبقة . الحمض النووي الريبي يمكن استردادها من خلال هطول الأمطار من الكحول الآيزوبروبيل بعد جمع عينات من المياه فوق طبقة . الأسلوب له تأثير جيد على عزل كمية صغيرة من الأنسجة والخلايا ، سواء كانت بشرية أو حيوانية أو نباتية أو بكتيرية . البساطة في عملية trzol هل كاشف يسمح نفس

عند التعامل مع عينات متعددة . يمكن الانتهاء من جميع العمليات في غضون ساعة واحدة . مجموع الحمض النووي الريبي المستخرج من trzol يمكن تجنب تلوث الحمض النووي والبروتين ، ويمكن استخدامها في تحليل لطخة الحمض النووي الريبي ، لطخة التهجين ، بولي ( أ ) + فحص الترجمة في المختبر ، وتحليل الحمض النووي الريبي حماية انزيم الاستنساخ الجزيئي . في حالة استخدام PCR ، عندما اثنين من الاشعال الموجودة في اكسون واحد ، فمن المستحسن أن مجموع الحمض النووي الريبي المستخرج من الحمض النووي الريبي هو تعامل مع التضخيم الصف الأول .

ملاحظة :

1 - عزل الحمض النووي الريبي من كمية صغيرة من الأنسجة ( 1-10mg ) أو الخلايا ( 10 2-104 ) : 800 ميكروغرام من trzol أضيفت إلى الأنسجة أو الخلايا . بعد العينة هو متصدع ، الكلوروفورم هو إضافة عملية الاستخراج في الخطوة 2 . قبل هطول الحمض النووي الريبي مع كحولالأيسوبروبيل ، 5-10 ميكروغرام glycogen أضيفت إلى عينة المياه الناقل . من أجل خفض اللزوجة ، الحمض النووي الجينوم هو قطع من قبل اثنين من مضخات الحقنة رقم 26 قبل إضافة الكلوروفورم . غليكوجين يبقى في طبقة المياه و يوتكتوئيد مع الحمض النووي الريبي . فإنه لا يمنع إنتاج أول سلسلة من ردود الفعل المنتسخة العكسية ولا بكر حتى تتركز في 4 ملغ / مل .

2 - يمكن الحفاظ على العينة في - 60 ℃ أو - 70 ℃ لمدة شهر على الأقل قبل إضافة الكلوروفورم . الحمض النووي الريبي هطول يذوب في 75 ٪ من الإيثانول يمكن تخزينها لمدة أسبوع على الأقل في 2-8 ℃ لمدة سنة واحدة على الأقل في - 5-20 ℃ . . . . . . .

3 . ارتداء القفازات و حماية العين عند استخراج الحمض النووي الريبي مع trzol هل . تجنب لمس الجلد والملابس . الانتهاء من العملية في خزانة الكيميائية . تجنب استنشاق الجهاز التنفسي . دون استثناء ، درجة حرارة الغرفة بين 15 و 30 ℃ . . . . . . .

الكواشف الذاتية :

الكلوروفورم ، كحولالأيسوبروبيل ، 75 ٪ إيثانول ( ريبونوكلياز المياه مجانا ) ، ريبونوكلياز المياه مجانا ( إضافة الماء في قارورة خالية من الحمض النووي الريبي ، إضافة DEPC إلى 0.1 في المائة ( ت / ت ) . يوضع بين عشية وضحاها وتعقيمها تحت الضغط العالي ) . 0.5 ٪ الحزب الديمقراطي الصربي الحل ( أعد مع ريبونوكلياز المياه مجانا ) ( اختياري ) .

خطوات التشغيل :

1 . عينة المعالجة . 0.75 مل trzol هل أضيفت إلى 0.25 مل من السوائل البيولوجية ( مصل الدم ، البلازما ، الخ ) في العينة ، ثم ضرب عينة السائل عدة مرات مع عينة بندقية للمساعدة في تقسيم الخلايا في العينة . على الأقل 0.75ml trzol هل أضيفت إلى كل 5 ~ 10 × 10 6 خلايا . عينات الدم التي تحتوي على نسبة عالية من الملوثات ، مثل الدم كله ، يمكن أن تضعف مع الماء المعقم في نسبة 1 : 1 ، ثم استخراج يمكن أن تبدأ . حجم النهائي نسبة trzol هل عينة السائل دائما 3 : 1 . ب - عينات الأنسجة مع الزجاج أو خليط قوي ، مع 0.75 مل من trzol هل لكل 50 ~ 100 ملغ من الأنسجة أو 0.25 مل من الأنسجة تعليق . إذا كان حجم العينة أقل من 0.25ml ، حجم العينة يجب تعديلها إلى 0.25ml بإضافة الماء المعقم لضمان حجم نسبة 3 : 1 . c.monolayer الخلايا المستزرعة مباشرة إضافة 0.3ml-0.4ml trzol هل حل الخلايا في الثقافة لوحة قطرها 3.5 سم ، ثم ضرب مع عينة بندقية للمساعدة في تقسيم الخلايا تماما . المبلغ المطلوب من trzol ليرة سورية ( 0.3-0.4 مل لكل 10 سم 2 ) يتحدد حسب مساحة لوحة الثقافة بدلا من عدد الخلايا . لا تحتاج إلى إضافة الماء إلى lysates لأن بقايا الثقافة المتوسطة تعلق على لوحة الثقافة تماما المخفف trzol هل . د - تعليق نمو الخلايا عن طريق الطرد المركزي يعجل الخلايا . في trzol هل الكاشف ، تم تقسيم الخلايا عن طريق ضربة ماصة مرارا وتكرارا . كل 5-10 × 10 6 الخلايا الحيوانية أو النباتية أو خلايا الخميرة أو كل 1 × 10 7 البكتيريا بالإضافة إلى 0.75 مل هل TRZOL . كما هو الحال مع الخطوة ب ، حجم العينة يمكن تعديلها مع الماء المعقم إلى 0.25ml . غسل الخلايا ينبغي تجنبها قبل إضافة trzol هل لأن ذلك يزيد من احتمال تدهور مرنا . كسر بعض الخمائر والبكتيريا قد تتطلب استخدام خلاط . 2 - في مرحلة الانفصال ، خليط من العينات احتضنت لمدة 5 دقائق في 15-30 درجة مئوية من أجل كسر نوکلئو پروتئین . . . . . . . كل 0.75ml ترزول ليرة سورية زائد 0.2ml الكلوروفورم . تغطية أنبوب العينة ، يهز أنبوب اختبار لمدة 15 ثانية و احتضان لمدة 2-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة . الطرد المركزي مع قوة الطرد المركزي لا تتجاوز 12 ، 000 × ز في 2 ~ 8 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة . بعد الطرد المركزي الخليط ينقسم إلى ثلاث طبقات : الطبقة السفلى - كلوروفورم طبقة ، طبقة وسطى ، الطبقة العليا من عينة المياه عديم اللون طبقة . الحمض النووي الريبي موجود في طبقة المياه دون استثناء . قدرة طبقة المياه حوالي 70 ٪ من trzol هل القدرة المضافة .

الحمض النووي الريبي هطول نقل عينة من المياه إلى طبقة نظيفة أنبوب اختبار ، إذا كنت ترغب في عزل الحمض النووي والبروتين ، الطبقة العضوية و الطبقة الوسطى يجب الحفاظ عليها . الحمض النووي الريبي هو عجل عن طريق خلط عينة المياه طبقة مع كحولالأيسوبروبيل . . . . . . . 0.5 مل كحولالأيسوبروبيل المقابلة لكل 0.75 مل trzol ليرة سورية . عينات مختلطة احتضنت في 15-30 ° C لمدة 10 دقائق ، ثم تم تجميد الطرد المركزي في 2-8 ° C لمدة 10 دقائق مع قوة الطرد المركزي لا تتجاوز 12 ، 000 × ز . الحمض النووي الريبي هطول عادة ما تكون غير مرئية قبل الطرد المركزي ، بعد الطرد المركزي سوف تشكل ورقة هلام هطول تعلق على جدار أنبوب أنبوب أسفل .

شطف الحمض النووي الريبي إزالة الطبقة العليا تعليق . الحمض النووي الريبي هو عجل مرة واحدة غسلها مع 75 ٪ من الإيثانول ( ريبونوكلياز المياه مجانا ) و 75 ٪ من الإيثانول تضاف على الأقل 1 مل لكل 0.75ml trzol هل . دوامة متذبذبة مختلطة عينات تم تجميد الطرد المركزي لمدة 5 دقائق مع قوة الطرد المركزي لا تتجاوز 7 ، 500 × ز في 2 ~ 8 درجة مئوية .

الحمض النووي الريبي هو حل مرة أخرى في درجة حرارة الغرفة لتجفيف الحمض النووي الريبي هطول ببساطة ، لا الطرد المركزي تجفيف الحمض النووي الريبي في فراغ أنبوب . والأهم من ذلك ، لا تدع الحمض النووي الريبي هطول يجف ، مما يقلل كثيرا من قابلية الذوبان . نسبة od260 od280 / < 1.6 . ريبونوكلياز المياه مجانا أو 0.5 في المائة من الحزب الديمقراطي الصربي الحل ( أعد ريبونوكلياز المياه مجانا ) يتم إزالتها من خلال ماصة عدة مرات من أجل حل الحمض النووي الريبي ( إذا كان الجيش الملكي النيبالي هو استخدامها في وقت لاحق في انزيم الهضم ، الحزب الديمقراطي الصربي هو تجنبها . الحمض النووي الريبي هو أيضا 100 ٪ Formamide ( إزالة الأيونات ) و تخزينها في - 70 درجة مئوية .

بكر الخطوات الأساسية والمسائل التي تحتاج الى اهتمام ؟

مبدأ التجربة

تفاعل البلمرة المتسلسل ( PCR ) هو أسلوب انتقائي تضخيم الحمض النووي في المختبر . تكرار الحمض النووي في الجسم الحي يتطلب قالب ، التمهيدي ، بوليميريز الحمض النووي ، الحمض النووي dntps هيليكيز ، في المختبر تفاعل البلمرة المتسلسل ( PCR ) يتطلب أيضا عناصر مماثلة ، بما في ذلك القالب ، التمهيدي ، بكر العازلة ، طق انزيم dNTPs。 الاشعال هي مصطنعة مصممة خصيصا تسلسل لتحقيق التضخيم من موقع معين . بكر العازلة يوفر بيئة عازلة للاستجابة . كما هو الحال في الكائنات الحية ، الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل يفتح التمهيدي يربط القالب ويمتد على شكل سلسلة جديدة . هذه العمليات تتم في الجسم الحي عن طريق الحمض النووي هيليكيز ، ولكن في المختبر عن طريق التحكم في درجة حرارة التفاعل . على سبيل المثال ، في 94 ℃ تبديل طبيعة قالب الحمض النووي يستخدم عادة لفتح حبلا مزدوجة ، التمهيدي المستعبدين إلى قالب في درجة حرارة التلدين ، وأخيرا ، تمديد الانتهاء في 72 ℃ ، وتكرار هذه العملية يمكن أن يحقق الكثير من التضخيم من جزء معين من الحمض النووي . جزيء الحمض النووي الذي هو نفسه كما ان الهدف من الحمض النووي هو جزء لا يتجزأ من إنتاج حتى بداية الدورة الثالثة .

في مرحلة لاحقة من التضخيم ، بسبب تراكم المنتجات ، ردود الفعل التي تظهر في الأصل توسيع أضعافا مضاعفة تتحول إلى منحنى مسطح ، والمنتجات لم تعد زيادة كبيرة مع عدد من الدورات ، وهذا ما يسمى منصة تأثير . منصة المرحلة يمكن أن يؤدي إلى زيادة كبيرة في تركيز منخفض من المنتجات غير المحددة الناجمة عن عدم تطابق . ولذلك ، ينبغي أن تنظم بشكل صحيح عدد من الدورات ، قبل نهاية المرحلة منصة رد فعل ، والحد من المنتجات غير المحددة . عدد الدورات المطلوبة للوصول إلى منصة يعتمد على نسخة من القالب في العينة .

ثانياً - العناصر الرئيسية

1 . قالب يمكن أن تكون في أشكال مختلفة ، بما في ذلك الحمض النووي الجينوم ، بلازميد الحمض النووي ، الحمض النووي الجينوم الفيروسية ، بكر المنتج ، كدنا ، وهلم جرا ، ولكن لا يمكن أن يكون الحمض النووي الريبي . عن أنواع مختلفة من القوالب ، الفرق الرئيسي يكمن في وقت ما قبل التشويه والتحريف و كمية من القوالب . في العام ، قبل تبديل طبيعة الوقت من الحمض النووي الجينوم كبيرة بما فيه الكفاية ، البلازميد dna2min قبل تبديل طبيعة الحمض النووي الجينوم الفيروسي 2 دقيقة ، قبل تبديل طبيعة المنتج PCR 2 دقيقة .

علما بأن كدنا هو واحد الذين تقطعت بهم السبل الحمض النووي ، ولكن لا يزال يمكن أن تستخدم قالب الاسترداد ، ولكن فقط في الجولة الأولى من دورة الاشعال ملزمة لتجميع آخر حبلا . من الجولة الثانية ، واثنين من الاشعال ملزمة مواقع محددة ، وبالتالي تحقيق الربط مع التقليدية PCR . ومع ذلك ، لا يمكن تضخيم الحمض النووي الريبي حبلا واحدة فقط لأن الحمض النووي بوليميريز يمكن أن ندرك فقط حبلا الحمض النووي .

2 - كتلة من الحمض النووي في نظام 25ul 50100ng عن القالب كمية الحمض النووي الجينوم هو أيضا في كثير من الأحيان أكثر تركيزا بسبب هيكلها المعقد . خلاف ذلك ، تركيزات عالية جدا قد يؤدي إلى التضخيم غير محددة . البلازميد و بكر المنتجات لا تحتاج إلى تخفيف بسبب بنية بسيطة ، وانخفاض تركيز الاستخراج .

ما هي المشاكل التي ينبغي أن تولي اهتماما في بكر التجربة ؟

لا CT القيم

إذا كان لديك أي معلومات أخرى عن هذا الموضوع الرجاء إضافته مجانا .

1 ، عدد من الدورات غير كافية ( عادة لا تتجاوز 45 دورة ، ليس فقط في الخلفية ، ولكن أيضا غير الكمية ) ؛

2 ، بكر برنامج الإعداد خطأ ، خطوات الكشف عن إشارة مضان خطأ . في العام ، سان جرمان الطريقة المستخدمة في جمع 72 ℃ تمديد ، تاكمان القاعدة المستخدمة عادة في نهاية الصلب أو تمديد الوقت لجمع الإشارات ، بالإضافة إلى ذلك ، إذا كان جمع مضان مختارة .

3 . تدهور التمهيدي أو التحقيق . صفحة الكهربائي يمكن استخدامها للكشف عن ما إذا كان أو لم يكن التمهيدي والتحقيق في التدهور .

4 ، قالب حجم التدهور المحتمل أو عدم كفاية حجم العينة ( لا أكثر من 500 نانوغرام ، وفقا لتعليمات كيت يمكن أن يكون ) ، غير معروف من تركيز العينة من سلسلة تمييع عينة من أعلى تركيز . إذا كان قالب التدهور يحدث ، ينبغي النظر في إدخال الشوائب في إعداد العينة و تكرار التجميد تحسن الحالة .

5 - ما إذا كان أو لم يكن التمهيدي تحقيقات مناسبة ( وخاصة التمهيدي عبر نترون لضمان تضخيم الحمض النووي الجينوم . أعلى وأسفل التمهيدي TM قيمة أكثر من 4 ℃ يمكن أن تؤثر أيضا على التضخيم .

CT قيمة متأخرة

في الكمية النسبية ، CT القيمة عادة ما تسيطر على ما بين 1525 أفضل ، إذا كان في الكمية المطلقة ، وانخفاض عدد نسخ العينات ، CT القيمة سوف تزيد ، ولكن عموما لا ينبغي أن تتجاوز 40 دورة ، وإلا فإن الكمية غير دقيقة .

ولذلك ، من الضروري أن نحكم على ما إذا كان التصوير المقطعي قيمة غير طبيعية أو لا في وقت متأخر جدا ، وفقا لتصميم التجربة و الهدف .

1 . انخفاض كفاءة التضخيم . النسبة بين الاشعال او الاشعال و تحقيقات ليست مناسبة ، لذلك يجب أن يكون الأمثل . تصميم التمهيدي أو التحقيق غير معقول و يحتاج إلى إعادة تصميم .

2 . درجة حرارة التخمير يمكن أن تخفض بشكل صحيح إذا كان رد فعل البلمرة المتسلسل غير مناسب ، أو درجة حرارة التخمير / استطالة الأمثل بدلا من ثلاث خطوات . الصلب / تمديد الوقت قصير ( يمكن تمديدها لمدة 10 ثوان في الوقت الموصى به ) ؛

3 ، mgcl2 تركيز غير مناسب ، وزيادة تركيز أيون المغنيسيوم . تدهور مختلف مكونات تفاعل البلمرة المتسلسل ( PCR ) أو عدم كفاية كمية العينة .

4 ، بكر المنتج طويل جدا . تصميم المنتجات PCR أكثر من 500bp ;

5 ، هناك مثبطات في القالب . عالية النقاء قالب يستخدم PCR للكشف عن أو تمييع القالب .

منتجات الشركة للبيع :