ترنسفكأيشن الصف الخطي polyethyleneimine ( mw25000 ) .

ترنسفكأيشن الصف الخطي polyethyleneimine )MW25000polyethyleneimine هو عابر تعداء كاشف المنتج على أساس polyethyleneimine . . . . . . . polyethyleneimine ( PE ) هو نوع من البوليمرات العضوية مع ارتفاع شحنة موجبة ، والتي يمكن بسهولة الجمع بين جزيئات الحمض النووي مع شحنة سالبة على شكل مجمعات مع شحنة موجبة . المجمع هو جنبا إلى جنب مع أنيون على سطح الخلية و يدخل الخلية عن طريق التقام . إن transfected كاشف منخفضة السمية ، ويمكن استخدامها في العديد من خطوط الخلايا .AAVالخ الإنتاج .

1. كاشف التكوين

المواد المطلوبة :

منزوع الأيونات الماء أو أعلاه12 مول / لترحمض الهيدروكلوريك )HClو10 مول / لترسNaOHلمرة واحدة0.1-0.2مم PESفراغ فلتر العقيم العقيمHDPEأو مادة البولي بروبيلين تخزين زجاجة .

تكوين سائل التخزين :

( 1 ) ويل1 غرامترنسفكأيشن الصف polyethyleneimine الخطي25 , 000حل في900 ملمنزوع الأيونات الماء مع التحريك60-80( ج ) الجانب قطرة زائد12 Mحمض الهيدروكلوريكالـ pHص2.0التحريك3أكثر من ساعة حتى يذوب ;

( 2 ) استخدام10 Mتعديلالـ pHإلى6-9-7-1ن

( 3 ) نقل الحل إلى اسطوانة ( أو كأس )إضافة الماءحجم ثابت1 Lن

( 4 ) يمكن التخلص منها0.2 µmفراغ فلتر الترشيح والتعقيم1 ملغ / ملتخزين سائل ;

( 5 ) تخزين السائل يمكن تعبئتها بشكل منفصل وفقا لمتطلبات .-20درجة مئوية يمكن الحفاظ عليها1سنة تخزين السائل لا يمكن تجميدها بعد ذوبان .

2. عملية تعداء

تلقيح الخلايا : من أجل تحسين كفاءة ترنسفكأيشن ، فمن المستحسن أن تلقيح الخلايا قبل يوم ترنسفكأيشنفي70-80%مناسبن

استعدادالحمض النووي- الكواشف تعداءمركب

( 1 ) ويلالحمض النوويترنسفكأيشن كاشف مخفف أولا العودة إلى درجة حرارة الغرفة .

( 2 ) تمييع مع مناسبة خالية من البروتين متوسطةالحمض النووين

( 3 ) في نسبة معينةكل1 ميكروغرام من الحمض النوويمطلوب1-5 ميكرولترترنسفكأيشن الكواشف ، واقترح أن تلمس نسبةثم تضعف تعداء كاشف انخفض إلىالحمض النوويحل أنبوب اختبار( لا عكس إضافة النظام )جانببخفةدوامة ، خلط كاملدرجة حرارة الغرفة10-25دقيقةاحتضانمنتدى

تعداء الخلايا

( 1 ) عندما transfected في المصل خالية من الشرط ، خلية ثقافة المتوسط هو إزالتها واستبدالها المصل خالية من الثقافة المتوسطة .

( 2 ) إضافة كمية مناسبة من الخلاياالحمض النووي- الكواشف تعداءمركب, يمزج بلطفتعداء6-8ساعة في وقت لاحق ، استبدال الطازجة سخن متوسطةن

( 3 ) في37℃و5٪ CO₂حاضنةوسطالثقافة بعد ترنسفكأيشن24ساعةنقل الجينات يمكن الكشف عنها ( مناسبة وقت الكشف يمكن تحديدها من قبل أنفسنا ) .

شروط النقل والتخزين

حالة النقل : درجة حرارة الغرفة النقل

الحفاظ على الشرط : مسحوق في درجة حرارة الغرفة أو4الحفاظ على صحة2سنة .

الاحتياطات

1. بالنسبة لمعظم الخلايا ، كل1 ميكروغرام من الحمض النووياستخدام3 ميكرولترترنسفكأيشن كاشف يمكن الحصول على أعلى كفاءة ترنسفكأيشن . . . . . . .1 ميكروغرام من الحمض النووياستخدام1.5 ~ 4 ميكرولترتعداء الكواشف الأمثل .

2. من أجل سلامتك وصحتك ، يرجى ارتداء ملابس المختبر و القفازات القابل للتصرف .

3. هذا المنتج يستخدم فقط لأغراض البحث العلمي .