توليدو الإنسان منتشر كبير الخلايا اللمفاوية B

توليدو الإنسان منتشر كبير الخلايا اللمفاوية B

خلية مقدمة

توليدو هو خط الخلايا اللمفاوية B المعزولة من الدم المحيطي من النساء البيض الكبار مع منتشر اللمفاوية خلية كبيرة ( غير هودجكين الخلايا باء ) في عام 1990 . المرضى الذين يعانون من سرطان الغدد الليمفاوية في الدماغ بعد جرعات كبيرة من ليو و زرع نخاع العظم . على الرغم من أن مورفولوجيا الخلايا تشبه سرطان الغدد الليمفاوية الأولية ، فإنها تفتقر إلى نموذجي إزفاء الكروموسومات . karyotypes لا تظهر العديد من الانحرافات الكروموسومية . الخلايا لا تعبر عن سطح أو السيتوبلازم المناعي . هذه الخلايا هي سلبية على فيروس ابشتاين بار .

خصائص الخلية

1 ) المصدر : الخلايا اللمفاوية B المعزولة من الدم المحيطي للمرأة البيضاء الكبار

2 ) التشكل : lymphoblastoid تعليق النمو

3 ) المحتوى : > عدد الخلايا 1x106

4 ) المواصفات : T25 زجاجة أو 1ml حزمة أنبوب التخزين المجمد

5 ) إستعمال : فقط لأنّ بحث إستعمال .

النقل والتخزين

الجليد الجاف النقل وإنعاش الخلايا الحية

( 1 ) 1 مل من الجليد الجاف التعبئة والتغليف والنقل ، بعد تلقي - 80 درجة الثلاجة بين عشية وضحاها بعد الحفظ في النيتروجين السائل أو الانتعاش المباشر ، إذا كان الثلج الجاف قد تم العثور على تطاير نظيفة ، غطاء زجاجة من الجليد ، تلف الخلايا الملوثة ، يرجى الاتصال بنا على الفور .

( 2 ) زجاجة T25 تعافى الخلايا الحية يتم شحنها في درجة حرارة الغرفة ، بعد تلقي العلاج وفقا الخلية المستقبلة .

العلاج بعد تلقي الخلايا

1 ) بعد تلقي الخلايا ، 75 ٪ من الكحول زجاجة تعقيم الجدار سوف توضع في زجاجة T25 37 ℃ حاضنة حوالي 2-3 ساعات ، إذا وجدت أن الثقافة زجاجة مكسورة ، تسرب السائل ، وتلوث الخلايا ، يرجى الاتصال بنا في الوقت المناسب بعد التقاط الصور .

2 ) يرجى التأكد من حالة الخلية تحت المجهر 4 أو 5 س ، وفي الوقت نفسه التقاط الصور من الخلايا التي تم تلقيها حديثا ( 10 × 20 × 2-3 ) على التوالي ، والحفاظ على صورة من ظهور ثقافة زجاجة ، كأساس للحصول على حالة الخلية بعد البيع .

3 ) خلية ملتصقة : الخلايا توضع في حاضنة الثقافة 37 ℃ لمدة 2-3 ساعات ، نمو الخلايا الملتصقة لوحظ تحت المجهر . إذا كانت كثافة نمو الخلايا أقل من 60 ٪ ، متوسطة الثقافة يمكن إزالتها ( إذا كانت الخلايا غير ملتصقة تحتاج إلى إعادة تدويرها بالطرد المركزي ، ثم علقت في الثقافة الأصلية زجاجة ) و 6-8 مل من جديد quan متوسطة الثقافة تضاف إلى الثقافة خلية مربع . إذا كان نمو الخلايا كثافة تصل إلى 70 ٪ - 80 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور العلاج . إذا كانت الخلايا التي فقدت بسبب الاهتزاز النقل تحتاج إلى إعادة تدويرها بواسطة الطرد المركزي .

4 ) ملاحظة : وسائل الإعلام المستخدمة في النقل لا يمكن أن تستخدم في زراعة الخلايا ، يرجى استبدال كامل مربع وسائل الإعلام الجديدة التي تم إعدادها وفقا تعليمات خلية ثقافة الشرط . بعد الحصول على الخلايا ، واقترح أن T25 قارورة 1 : 2 .

توليدو الإنسان منتشر كبير الخلايا اللمفاوية B

أولا - إعداد وسائل الإعلام وظروف التخزين المجمد

1 ) إعداد rpmi-1640 ( أوصت ICell-0002 ) متوسطة الثقافة ؛ مصل بقري جنيني عالي الجودة ، 10 ٪ ؛ ضعف المقاومة ، 1 ٪ .

ملاحظة : إعادة تعليق خلية هطول الأمطار مع أوصت وان متوسطة الثقافة الكاملة وتوزيعها على T25 الثقافة زجاجة . من المهم تجنب الإفراط في قاعدة متوسطة في عملية استعادة الخلايا . من المستحسن أن الثقافة حاوية تحتوي على الوان متوسطة النمو الكامل يجب أن يوضع في حاضنة لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل إضافة محتويات قارورة ، بحيث يمكن أن تصل إلى قيمة الرقم الهيدروجيني العادي ( 7.0 إلى 7-6 ) .

2 ) الثقافة شرط : بخار المرحلة : الهواء ، 95 ٪ ؛ ثاني أكسيد الكربون درجة الحرارة : 37 درجة مئوية ، حاضنة الرطوبة 70 ٪ - 80 ٪ .

3 ) التخزين المجمد السائل : 90 ٪ مصل الدم ، 10 ٪ دمسو ، وتستخدم الآن على استعداد .

ثانيا - معالجة الخلايا :

1 ) إنعاش الخلايا المجمدة :

تجميد أنبوب يحتوي على 1 مل من تعليق الخلية بسرعة يهز و يذوب في 37 ℃ حمام مائي ، ثم تضاف إلى أنبوب الطرد المركزي يحتوي على 4-6 مل من الانتهاء من quan متوسطة . في 1000 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي لمدة 3-5 دقائق ، طاف هو التخلص من تعليق خلية في كوان متوسطة . تعليق الخلية ثم أضيفت إلى الثقافة زجاجة ( أو طبق ) تحتوي على 6-8ml quan متوسطة الثقافة لمدة ليلة في 37 ℃ . . . . . . . نمو الخلايا و كثافة الخلية لوحظ تحت المجهر في اليوم التالي .

2 ) مرور الخلية : إذا كانت كثافة الخلية تصل إلى 80 ٪ - 90 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور الثقافة .

الطرق التالية يمكن أن تستخدم في نشر خلايا ملتصقة

1 - إزالة طاف ، وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني بدون أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم 1-2 مرات .

2 - إضافة 0.25 في المائة ( ث / ت ) التربسين مي - 0.53 ملم EDTA في قارورة ( T25 1-2 مل ، T75 2-3 مل ) و يهضم في 37 ℃ حتى طبقة الخلية مشتتة ( عادة في غضون 5-15 دقيقة ) للوصول إلى قيمة الرقم الهيدروجيني الطبيعي ( 7.0-7.6 ) في المتوسط . من الصعب عزل الخلايا يمكن وضعها في 37 درجة مئوية لتسهيل تشتت . إذا كان معظم الخلايا مستدير و تقشر ، تأخذ مرة أخرى إلى طاولة العمليات بسرعة ، اضغط على عدة زجاجات الثقافة وإضافة 3-4ml متوسطة تحتوي على 10 ٪ سلاح لوقف الهضم .

3 - ضخ بلطف ، الطرد المركزي في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 3-5 دقائق ، تجاهل طاف ، إضافة 1-2 مل متوسطة الثقافة ثم تهب بالتساوي . تعليق خلية تم تقسيمها إلى 2 : 1 زجاجة جديدة T25 ، 6-8ml وان الثقافة المتوسطة التي تم تكوينها وفقا لمتطلبات تعليمات للحفاظ على نمو الخلايا وحيويتها .

cryopreserved الخلايا : بعد تلقي الخلايا ، فمن المستحسن أن cryopreserved دفعة من بذور الخلايا في أول 3 أجيال من الثقافة لاستخدامها في التجارب اللاحقة .

أدناه زجاجة T25 على سبيل المثال؛

1 . عندما يتم تجميد الخلايا ، خلايا الجهاز الهضمي يتم جمعها في أنبوب الطرد المركزي وفقا لعملية مرور الخلايا ، خلايا الدم عد لوحة يمكن استخدامها لتحديد كثافة الخلايا المجمدة . أوصت بالتبريد كثافة الخلايا العادية 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 الخلايا الحية / مل .

2 . 1000rpm الطرد المركزي 3-5min ، وإزالة طاف . الخلايا التي تم إعادة تعليق في 1 مل من cryopreserved الحل مع 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 الخلايا الحية / مل في cryopreserved أنبوب ، ثم الخلايا التي تم توزيعها في cryopreserved أنبوب مع اسم جيد ، جبر ، تاريخ ، الخ .

3 - تجميد الخلايا المخزنة في برنامج التبريد مربع ، الثلاجة - 80 درجة بين عشية وضحاها ، ثم نقلها إلى النيتروجين السائل الحاويات للتخزين . وفي الوقت نفسه ، فإن الموقف من تجميد تخزين الأنابيب في النيتروجين السائل حاوية يتم تسجيلها من أجل متابعة التفتيش والاستخدام .