شارع تحديد nci-h69 الخلايا الصغيرة سرطان الرئة

شارع تحديد nci-h69 الخلايا الصغيرة سرطان الرئة

خلية مقدمة

خط الخلية ، التي أنشئت في أنسجة الرئة من الذكور البيض 55 سنة من العمر ، هو aneuploid ، وسوف تشكل مستعمرة في أجار لينة ، والحفاظ على التشكل والتركيب الدقيق من سرطان الخلايا الصغيرة و APUD خصائص الخلية . الخلايا تتراكم وتنمو ، وبالتالي فإن عدد الخلايا غير دقيقة . cytokeratin تلطيخ إيجابية . n-myc الجينات تم تضخيمه و التعبير مرنا والبروتين تم الكشف عنها . التعبير عن c-myc مرنا وليس البروتين منخفضة .

التعبير عن c-myb v-fes , v-fms , c-raf 1 , ha-ras ki-ras , و n-ras مرنا تم الكشف عنها . خلايا سرطان الخلايا الصغيرة ( SCC ) يمكن أن تشكل عادة الأورام النسيجية في الفئران عارية . تشكيل مستعمرة في لينة أجار .

خصائص الخلية

1 ) المصدر : الرئة الذكور البيض 55 سنة

2 ) التشكل : تعليق نمو المجاميع متعددة الخلايا

3 ) المحتوى : > عدد الخلايا 1x106

4 ) المواصفات : T25 زجاجة أو 1ml حزمة أنبوب التخزين المجمد

5 ) إستعمال : فقط لأنّ بحث إستعمال .

النقل والتخزين

الجليد الجاف النقل وإنعاش الخلايا الحية

( 1 ) 1 مل من الجليد الجاف التعبئة والتغليف والنقل ، بعد تلقي - 80 درجة الثلاجة بين عشية وضحاها بعد الحفظ في النيتروجين السائل أو الانتعاش المباشر ، إذا كان الثلج الجاف قد تم العثور على تطاير نظيفة ، غطاء زجاجة من الجليد ، تلف الخلايا الملوثة ، يرجى الاتصال بنا على الفور .

( 2 ) زجاجة T25 تعافى الخلايا الحية يتم شحنها في درجة حرارة الغرفة ، بعد تلقي العلاج وفقا الخلية المستقبلة .

العلاج بعد تلقي الخلايا

1 ) بعد تلقي الخلايا ، 75 ٪ من الكحول زجاجة تعقيم الجدار سوف توضع في زجاجة T25 37 ℃ حاضنة حوالي 2-3 ساعات ، إذا وجدت أن الثقافة زجاجة مكسورة ، تسرب السائل ، وتلوث الخلايا ، يرجى الاتصال بنا في الوقت المناسب بعد التقاط الصور .

2 ) يرجى التأكد من حالة الخلية تحت المجهر 4 أو 5 س ، وفي الوقت نفسه التقاط الصور من الخلايا التي تم تلقيها حديثا ( 10 × 20 × 2-3 ) على التوالي ، والحفاظ على صورة من ظهور ثقافة زجاجة ، كأساس للحصول على حالة الخلية بعد البيع .

3 ) خلية ملتصقة : الخلايا توضع في حاضنة الثقافة 37 ℃ لمدة 2-3 ساعات ، نمو الخلايا الملتصقة لوحظ تحت المجهر . إذا كانت كثافة نمو الخلايا أقل من 60 ٪ ، متوسطة الثقافة يمكن إزالتها ( إذا كانت الخلايا غير ملتصقة تحتاج إلى إعادة تدويرها بالطرد المركزي ، ثم علقت في الثقافة الأصلية زجاجة ) و 6-8 مل من جديد quan متوسطة الثقافة تضاف إلى الثقافة خلية مربع . إذا كان نمو الخلايا كثافة تصل إلى 70 ٪ - 80 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور العلاج . إذا كانت الخلايا التي فقدت بسبب الاهتزاز النقل تحتاج إلى إعادة تدويرها بواسطة الطرد المركزي .

4 ) ملاحظة : وسائل الإعلام المستخدمة في النقل لا يمكن أن تستخدم في زراعة الخلايا ، يرجى استبدال كامل مربع وسائل الإعلام الجديدة التي تم إعدادها وفقا تعليمات خلية ثقافة الشرط . بعد الحصول على الخلايا ، واقترح أن T25 قارورة 1 : 2 .

شارع تحديد nci-h69 الخلايا الصغيرة سرطان الرئة

أولا - إعداد وسائل الإعلام وظروف التخزين المجمد

1 ) إعداد rpmi-1640 ( أوصت ICell-0002 ) متوسطة الثقافة ؛ مصل بقري جنيني عالي الجودة ، 10 ٪ ؛ ضعف المقاومة ، 1 ٪ .

2 ) الثقافة شرط : بخار المرحلة : الهواء ، 95 ٪ ؛ ثاني أكسيد الكربون درجة الحرارة : 37 درجة مئوية ، حاضنة الرطوبة 70 ٪ - 80 ٪ .

3 ) التخزين المجمد السائل : 90 ٪ مصل الدم ، 10 ٪ دمسو ، وتستخدم الآن على استعداد .

ثانيا - معالجة الخلايا :

1 ) إنعاش الخلايا المجمدة :

تجميد أنبوب يحتوي على 1 مل من تعليق الخلية بسرعة يهز و يذوب في 37 ℃ حمام مائي ، ثم تضاف إلى أنبوب الطرد المركزي يحتوي على 4-6 مل من الانتهاء من quan متوسطة . في 1000 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي لمدة 3-5 دقائق ، طاف هو التخلص من تعليق خلية في كوان متوسطة . تعليق الخلية ثم أضيفت إلى الثقافة زجاجة ( أو طبق ) تحتوي على 6-8ml quan متوسطة الثقافة لمدة ليلة في 37 ℃ . . . . . . . نمو الخلايا و كثافة الخلية لوحظ تحت المجهر في اليوم التالي .

2 ) مرور الخلية : إذا كانت كثافة الخلية تصل إلى 80 ٪ - 90 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور الثقافة .

تعليق الخلايا ، مرور يمكن الرجوع إلى الطرق التالية

الخلايا التي تنمو في تعليق الدولة يمكن الحفاظ على نمو الخلايا عن طريق إضافة وان كامل متوسطة الثقافة في الثقافة زجاجة ، في ظل الظروف العادية ، والحفاظ على كثافة الخلية في 1 × 105 ~ 1 × 106 / مل ( خلايا مختلفة تتطلب كثافة مختلفة ، يمكن الحفاظ على النمو الطبيعي للخلايا . إذا لزم الأمر ، تعليق خلية يمكن جمعها في أنبوب الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، إزالة طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة ، ثم تعليق خلية يمكن تقسيمها إلى زجاجة جديدة T25 حسب نسبة 1 : 2 ، إضافة 6-8ml وان كامل الثقافة المتوسطة وفقا لمتطلبات المواصفات للحفاظ على نمو الخلايا ، ثم مرور وفقا للظروف الفعلية من 1 : 2 إلى 1 : 5 نسبة .

cryopreserved الخلايا : بعد تلقي الخلايا ، فمن المستحسن أن cryopreserved دفعة من بذور الخلايا في أول 3 أجيال من الثقافة لاستخدامها في التجارب اللاحقة .

أدناه زجاجة T25 على سبيل المثال؛

1 . عندما يتم تجميد الخلايا ، خلايا الجهاز الهضمي يتم جمعها في أنبوب الطرد المركزي وفقا لعملية مرور الخلايا ، خلايا الدم عد لوحة يمكن استخدامها لتحديد كثافة الخلايا المجمدة . أوصت بالتبريد كثافة الخلايا العادية 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 الخلايا الحية / مل .

2 . 1000rpm الطرد المركزي 3-5min ، وإزالة طاف . الخلايا التي تم إعادة تعليق في 1 مل من cryopreserved الحل مع 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 الخلايا الحية / مل في cryopreserved أنبوب ، ثم الخلايا التي تم توزيعها في cryopreserved أنبوب مع اسم جيد ، جبر ، تاريخ ، الخ .

3 - تجميد الخلايا المخزنة في برنامج التبريد مربع ، الثلاجة - 80 درجة بين عشية وضحاها ، ثم نقلها إلى النيتروجين السائل الحاويات للتخزين . وفي الوقت نفسه ، فإن الموقف من تجميد تخزين الأنابيب في النيتروجين السائل حاوية يتم تسجيلها من أجل متابعة التفتيش والاستخدام .