في الوقت الحقيقي الاسترداد ، في الوقت الحقيقي الاسترداد

1 - لمحة عامة عن الخدمات

في الوقت الحقيقي الاسترداد ، في الوقت الحقيقي الاستردادفي الوقت الحقيقي الاسترداد ( qpcr ) هو الأسلوب الذي يضيف مجموعة الفلورسنت في نظام رد الفعل PCR التضخيم ، ورصد كامل عملية الاسترداد في الوقت الحقيقي من خلال تراكم إشارة الفلورسنت ، وأخيرا تحليل كمي غير معروف من خلال قالب منحنى القياسية . كما " المعيار الذهبي " تقنية في علم الأحياء الجزيئي ، qpcr أصبحت أداة تحليل التعبير الجيني ، الممرض الكشف عن التباين الوراثي بسبب حساسية وخصوصية ودقة .

ونحن نعتمد على بكر منصة الاختبار ، وتوفيراستخراج الحمض النووي ، عكس النسخ و qpcr التضخيم في تحليل البياناتالخدمات التقنية وقفة واحدة . إذا كنت بحاجة إلى الكشف عن مستوى التعبير مرنا ، ميرنا ، lncrna ، أو إجراء تحليل التباين في عدد نسخ الحمض النووي ( المسيحي ) ، ونحن يمكن أن توفر لك مع معيار جودة البيانات .

2 - المبادئ والأساليب التقنية

نحن نقدم اثنين من استراتيجيات الكشف الرئيسية التي تلبي الاحتياجات التجريبية المختلفة :

• سيبر الأخضر أنا صبغ طريقة :

• مبدأسيبر الأخضر أنا صبغ يمكن أن تربط على وجه التحديد الخندق من الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل ، وتعزيز إشارة مضان بعد ملزمة . مع زيادة من المنتجات PCR ، مضان إشارة متزامن تعزيز .

• تطبيقالفرق في التعبير الجيني ، على نطاق واسع اختبار العينة ، والتكلفة الحساسة البنود . نحن نستخدم تحليل منحنى الانصهار لضمان وحدة تضخيم المنتج .

• تاكمان يدقق في طريقة :

• مبدأتحقيقات محددة ( 5 ' نهاية المسمى fluorescence-reporting المجموعة ، 3 ' نهاية المسمى مروي المجموعة ) تهدف إلى تسلسل الأهداف المستخدمة . في عملية التضخيم ، والتحلل الأنزيمي من طق الانزيمات قطع مضان المجموعات تنبعث مضان .

• تطبيقخصوصية عالية ، متعددة PCR ، الحزب الوطني الاسكتلندي التنميط الجيني ، تتبع عينة الكشف .

3 - محتوى الخدمة والعملية برمتها

نحن نتبع بدقة إجراءات التشغيل الموحدة ( سوب ) لضمان دقة التحكم في كل خطوة :

المرحلة الأولى : التصميم التجريبي الأمثل

• التمهيدي / التحقيق مصمم من طرف :عبر نترون الاشعال صممت على الجينات المستهدفة لتجنب تدخل الحمض النووي الجينوم التلوث . فحص الجينات ( الجينات الداخلية gapdh ACTB , 18 الرنا الريباسي ، الخ . )

• قبل التحقق التجريبي :بكر و الاغاروز الكهربائي الهلامي كانت تستخدم للتحقق من خصوصية التمهيدي وتحسين درجة حرارة التخمير .

المرحلة الثانية : تجهيز العينات

• استخراج الحمض النوويعالية الجودة مجموع الحمض النووي الريبي أو الحمض النووي المستخرج من مختلف أنواع العينات ( الخلايا والأنسجة والدم exosomes ، وما إلى ذلك ) .

• النسخ العكسي ( كدنا التوليف ) :استخدام أولي ( DT ) أو كلمة التمهيدي مرنا . من أجل ضمان كفاءة النسخ العكسي متجانسة ، حلقة الجذعية التمهيدي أو الذيل إضافة طريقة تستخدم في ميرنا .

المرحلة الثالثة : اختبار على الكمبيوتر

• بناء النظام :عالية الدقة نظام رد فعل qpcr تم تكوينه ، على الأقل ثلاثة تكرار التقنية تم تكوينها للقضاء على عينة من الأخطاء .

• تشغيل البرنامج :في الوقت الحقيقي جمع إشارة مضان ، وتوليد تضخيم منحنى .

المرحلة الرابعة : تحليل البيانات

• الكمية النسبيةاعتماد2ـΔΔسي تيطرق التعبير الجيني الفرق بين المجموعة التجريبية والمجموعة الضابطة حسبت .

  
  

• الكميةبناء البلازميد القياسية ، رسم المنحنى القياسي ، وحساب عدد نسخ دقيقة من الجينات المستهدفة في العينة .

  
  

4 - قوتنا الأساسية

1. منصة الأجهزة :تعميم الكمية PCR الصك ، الفرق بين الثقوب الصغيرة ، بيانات عالية الاستقرار .

2. نظام صارم لمراقبة الجودة :اتبع الدولية MIQE（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments） دليل . كفاءة التضخيم ( 90 ٪ - 110 ٪ ) و العلاقة الخطية ( ص ≥ 0.99 ) رصدها بدقة ، و إيجابية كاذبة / سلبية كاذبة يمكن تجنبها .

3. معالجة العينات المعقدة :لدينا الكثير من الخبرة في التعامل مع ffpe شريحة ، الأنسجة الدقيقة ، exosome و الدم كله عينة .

4. تسليم البيانات المتخصصة :ليس فقط الأصلي CT القيم المقدمة ، ولكن أيضا توسيع منحنى الرسم البياني الرسم البياني الرسم البياني الانصهار النسبي / الحرارة الرسم البياني الرسم البياني الرسم البياني العمود التعبير الكمية المقدمة .

5 - تطبيق السيناريوهات

• تحليل مستويات التعبير الجيني :التعبير التفاضلية التحقق من الحمض النووي الريبي ، lncrna و circrrna تحت ظروف مختلفة أو نموذج المرض ( qpcr التحقق بعد rna-seq ) .

• الكشف عن ميرنا :تنظيم التعبير microRNA .

• الاختلاف في عدد نسخ الحمض النووي ( المسيحي ) :التضخيم أو حذف الجينات السرطانية ، وتحديد عدد النسخ المعدلة وراثيا .

• الحزب الوطني الاسكتلندي نوع التحقق :تحديد الأشكال نوكليوتيد واحدة المكاني .

• الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض :الحمل الفيروسي والبكتيريا التحليل النوعي والكمي .

• تشيب-qPCR:بعد immunoprecipitation لونين ، الحمض النووي شظايا تم تخصيبها والتحقق منها .

6 - متطلبات تسليم العينات ومعايير التسليم

• إرسال عينة اقتراحات :

• خلية ترسيب الخلايا

• 1 * 10 ^ 6， تجميد سريع بعد تنظيف برنامج تلفزيوني .

• تنظيمالأنسجة الحيوانية > 50 ملغ ، الأنسجة النباتية > 100 ملغ ، النيتروجين السائل تجميد سريع أو rnalater الحفظ

• الدمالدم كله يتطلب العلاج المضاد للتخثر أو مباشرة توفير فصل جيد المصل / البلازما .

• الحمض النووي الريبي / الحمض النووي:تركيز > 50 نانوغرام / ميكرولتر ، مجموع > 1 ميكروغرام ، الثلج الجاف النقل .

• تسليم محتوى :تقرير كامل عن التجربة ( بما في ذلك الخطوات التجريبية ، كاشف المعلومات ) ، ملف البيانات الخام ( EDS / XLS ) ، وتحليل البيانات نتيجة الرسم البياني ( إكسل إحصائيات و صور عالية الدقة ) .