rnafixer النتروجين السائل مجانا عينة الحمض النووي الريبي تخزين السائل

خصائص السلع :

شروط الحفظ :

في درجة حرارة الغرفة ( 18-25 ℃ ) لمدة 1 سنة أو أكثر ، إذا كان هناك هطول الأمطار أو هطول الأمطار ، 37 ℃ حمام مائيبعد إعادة حل الحرارة ، ونوعية المنتج لن تتأثر .
منتوج عرض :
rnafixer هو سائل غير سام الأنسجة الحفاظ على السوائل التي يمكن أن تتسرب بسرعة إلى السيتوبلازم من خلايا الأنسجة الطازجة .الحمض النووي الريبي هو مستقر و محمية في الموقع في غير تجميد الدولة . نوعية وكمية من الحمض النووي الريبي المستخرج في المستقبل لا تتأثر مباشرة غمر rnafixer بعد إزالة الأنسجة شريحة . rnafixer يلغي الحاجة إلى معالجة عينات الحمض النووي الريبي على الفورأو يجب أن تكون غير مريحة للحفاظ على النيتروجين السائل . الحمض النووي الريبي في خلايا الأنسجة الطازجة يمكن أن يكون جيدافي 37 ℃ لمدة يوم واحد ، في 25 ℃ لمدة أسبوع ، في 4 ℃ لمدة شهر ، في - 20 ℃ أو - 80 ℃ لفترة طويلة .
عينات من الحمض النووي الريبي فيروسات مثل سي وفيروس نقص المناعة البشرية يمكن تخزينها في 37 ℃ لمدة شهر .تنطبق على الأنسجة الحيوانية ( القلب ، الكبد ، الكلى ، العضلات ، الخصية ، الدماغ ، الطحال ، الخ . )الذباب , البكتيريا , خلايا الدم البيضاء , بعض الأنسجة النباتية ، الخ .
ميزات المنتج :
1 . عملية سهلة : الأنسجة في الحجم المناسب ، مغمورة في rnafixer يمكن أن تجعل الحمض النووي الريبي لا تتحلل .
2 . لا تحتاج إلى النيتروجين السائل : الحفاظ على عينة من دون النيتروجين السائل ، الثلج الجاف أو - 80 ℃ الثلاجة ، وخاصة بالنسبة للعينات السريرية والميدانيةبسرعة وعلى نطاق واسع الاستحواذ .
3 . ملائمة لأنّ نقل : يعالج عينة يستطيع كنت حافظت في 25 درجة [ ك ] أسبوع , يجعل عينة بريد وشحن يصبح يتيح ورخيصة , مفيدالتعاون الأكاديمي والتبادل .
4 . متعددة تجميد والذوبان : rnafixer تعامل عينة يمكن أن تتكرر مرارا وتكرارا تجميد والذوبان ، والتي يمكن أن تحمل على أنواع مختلفة من العلاج على عينةدون التأثير على نوعية الحمض النووي الريبي المستخرج في نهاية المطاف .
5 . مقارنة قوية : rnafixer يمكن أن تقلل من الأخطاء في تجهيز العينات على نطاق واسع ، وزيادة قابلية المقارنة بين عدد من التجارب ، وخاصة على نطاق واسع تحليل التعبير الجيني الشخصي .
تعليمات الاستخدام :
rnafixer يستخدم فقط في الأنسجة الطازجة ، وتجميد الأنسجة المحظورة قبل أن ينقع في rnafixer . . . . . . . تحتاج فقط إلى تحويل بسرعة جديدةنمو الأنسجة الطازجة ، واسعة ، أي جانب من سمك أقل من 0.5 سم نقع في rnafixerلا تتجاوز 0.5 سم ، rnafixer يمكن أن تخترق بسرعة ، والأحجام على كلا الجانبين لا يهم ) . سوف مجموعة جديدةنسيج غارقة في 5 مرات حجم rnafixer وتخزينها في درجة حرارة مناسبة وفقا للتعليمات .
1 . rnafixer الأنسجة الحيوانية لا تدمر أو حل هيكل الأنسجة ، وبالتالي ، يمكن أن تكون مغمورة في rnafixer لتحقيق التناضح .نسيج متوازن يمكن إزالتها من rnafixer ، ثم تقطع إلى قطع أصغر ، ثم العودة إلى rnafixer . . . . . . .الاستمرار في استخدام في المرة القادمة . الأجهزة الصغيرة مثل الكبد والكلى والطحال من الفئران لا تحتاج إلى قطع ، ويمكن تخزينها في rnafixer تماما .
نوصي باستخدام rnastore عينات الأنسجة المختلفة :

2 . العديد من الأنسجة النباتية يمكن أن تكون مغمورة في rnafixer مباشرة ، وبعض النباتات الطبيعية مثل حاجز الاختراق شمعيطبقة واقية ، تحتاج إلى تدمير طبقة الشمع أولا ، من أجل تسهيل rnafixer الاختراق .
3 - الخلايا المستزرعة في مهب أسفل ، الطرد المركزي جمع الخلايا ، التخلي عن طاف ، وغسلها مع برنامج تلفزيوني عازلة في حمام الثلج .إزالة بقايا الثقافة المتوسطة . تعليق الخلايا في كمية صغيرة من برنامج تلفزيوني عازلة . إضافة خمسة إلى عشرة أضعاف حجم rnafixer ، مختلطةجميع .
4 - الحفاظ على الكريات البيض في الدم كله ، الكريات البيض يجب أن تكون معزولة من خلايا الدم الحمراء والمصل .كريات الدم البيضاء يمكن أن تكون فعالة في الحفاظ على rnafixer بعد تعامل مع الخلايا المستزرعة . لا تأخذ كل الدم والبلازماأو الحمض النووي الريبي في مصل الدم يتم تخزينها في rnafixer لأنها تحتوي على مستويات عالية من البروتين .من السهل تشكيل غير قابلة للذوبان هطول .
5 - البكتيريا
البكتيريا لا يمكن أن تنمو في rnafixer ، ولكن rnafixer لا تدمر البكتيريا .الجيش الملكي النيبالي الكامل لا يزال يمكن أن تنتج في ثلاثة أشهر .
تخزين العينة في rnafixer :
1 . إيداع في - 80 درجة مئويةعينات يتم تخزينها لفترة طويلة . وضع عينة من الحمض النووي الريبي fixer في 4 ℃ بين عشية وضحاها ، ثم إزالة عينةإزالة السوائل من rnafixer نظيفة ووضعها في - 80 ℃ . . . . . . . الخلايا المستزرعة ، لا إزالةRNAfixer， تجميد مباشرة في - 80 ℃ لا تكسير الخلايا . العينة يمكن أن تذوب في درجة حرارة الغرفة عند استخدامها .ويمكن أيضا أن تكون مجمدة مرة أخرى دون التأثير على سلامة الحمض النووي الريبي والإنتاجية .
2 - التخزين في - 20 درجة مئويةعينة من rnafixer وضعت في 4 ℃ بين عشية وضحاها ، ثم نقلها إلى - 20 ℃ . . . . . . . العينة لن تكون مجمدة في - 20 ℃ . . . . . . .تجميد ، ولكن قد تشكل بعض البلورات التي لا تؤثر على مستقبل استخراج الحمض النووي الريبي . يمكن استخدام العينة في الغرفةويمكن أيضا أن تكون مجمدة مرة أخرى دون التأثير على سلامة وإنتاجية الحمض النووي الريبي .
3 . تخزينها في 4 درجة مئويةعينات يمكن تخزينها في 4 ℃ لمدة شهر .
4 - التخزين في 25 درجة مئويةالحمض النووي الريبي المخزنة في 25 ℃ عينة ظلت سليمة في غضون أسبوع واحد ، في حين أن الحمض النووي الريبي من العينات التي تم تخزينها لمدة أسبوعين كان قليلا المتدهورة .بالكاد يمكن أن تستخدم في تحليل Northern ، ولكن نوعية كافية للحصول على الحماية النووية assistor-rt-pcr . . . . . . .
5 - تخزينها في 37 درجة مئويةالحمض النووي الريبي المخزنة في 37 ℃ عينة ظلت سليمة في غضون 24 ساعة ، و تدهور جزئي في 3 أيام .rnafixer يحفظ عينة من الحمض النووي الريبي استخراج :أخذ العينات من rnafixer ، rnafixer يمكن سكب مباشرة في حوض السباحة ، ثم شطف مع ماء الصنبور .معاملة خاصة .
1 - التنظيم
إزالة العينة من rnafixer مع ملقط نظيف ، وإزالة بقايا rnafixer مع ورقة ماصة .مثل الأنسجة الطازجة ، الحمض النووي الريبي يمكن استخراجها عن طريق طحن مع النيتروجين السائل ثم تعامل مع خليط من الإجراءات القياسية .
2 - الخلايا
هناك نوعان من الخيارات للحصول على الخلايا المخزنة في rnafixer . . . . . . . واحد هو استخراج الحمض النووي الريبي بعد إزالة rnafixer ، والآخر هوواحد هو استخراج مباشرة من خليط من الخلايا و rnafixer .
1 ) استخراج الحمض النووي الريبي بعد إزالة rnafixerالخلايا المخزنة في rnafixer تصبح أقل عرضة وقادرة على الصمود أمام ارتفاع سرعة الطرد المركزي دون تكسير .الحل . لدينا خبرة في جمع الخلايا بنجاح في الطرد المركزي 5000G ، وذلك لأن قوة كل خلية ليست هي نفسها ، ويمكنقبل إجراء اختبار مع الخلايا غير مهم للتأكد من أن الطرد المركزي لا يدمر الخلايا في استخدام السرعة . اختيار آخربدلا من ذلك ، إضافة برنامج تلفزيوني في نفس الحجم قبل الطرد المركزي إلى تمييع rnafixer وخليط من الخلايا للحد من كثافة الحل ،حل الخلية يمكن أن يعجل .
2 ) لا إزالة rnafixer ، واستخراج الحمض النووي الريبي مباشرة
ويمكن أيضا أن تضاف مباشرة 10 مرات حجم خطوة واحدة استخراج الكواشف ( مثل tripure ، trireagent ) في الخلايا وخليط من rnafixer ثم اتبع الخطوات العادية .

الـ PCRالخطوات الأساسية والاحتياطات ؟

مبدأ التجربة

الـ PCRفي المختبر الاصطناعي انتقائية التضخيمالحمض النوويطريقة مماثلة لتلك التي في الكائنات الحية .الحمض النووينسخة . في الكائنات الحيةالحمض النوويالنسخ المتماثل يتطلب قالب ، التمهيدي ،الحمض النوويبوليميريزالحمض النوويهيليكيزdNTPsفي المختبرالـ PCRردود الفعل تتطلب أيضا عناصر مماثلة ، بما في ذلك قوالب ، التمهيديPCR العازلةوتاكأنزيمdNTPsالاشعال هي مصممة بشكل مصطنع من أجل تحقيق التضخيم من موقع معين .PCR العازلةتوفير بيئة عازلة للاستجابة؛ ردود الفعل هي نفسها في الكائنات الحية ،الحمض النوويفتح سلسلة مزدوجة ، التمهيدي جنبا إلى جنب مع القالب ، ويمتد لتشكيل سلسلة جديدة . هذه العمليات تعتمد على الكائنات الحية .الحمض النوويفي المختبر عن طريق التحكم في درجة حرارة التفاعل . كما تستخدم عادة94℃تبديل طبيعة القالبالحمض النوويفي درجة حرارة التخمير ، التمهيدي المستعبدين إلى القالب .72℃جزء معين يمكن أن يتحقق من خلال تكرار العملية .الحمض النوويالتضخيم . لم يكن حتى الدورة الثالثة قد بدأت .الحمض النووينفس القسمالحمض النوويالجزيئات التي تنتج المزيد من الأهداف بشكل دائريالحمض النوويمضاعفة مؤشر القطاع .

في مرحلة لاحقة من التضخيم,بسبب تراكم المنتجات,في الأصل أضعافا مضاعفة ردود الفعل في منحنى مسطح,المنتج لم يعد من الواضح أن زيادة مع عدد من الدورات,وهذا ما يسمى تأثير منصة . منصة المرحلة(الهضبة)انخفاض تركيز المنتجات غير المحددة الناجمة عن عدم تطابق الأصلي يمكن أن تتوسع إلى مستوى أعلى . ولذلك ، ينبغي أن تنظم بشكل صحيح عدد من الدورات ، قبل نهاية المرحلة منصة رد فعل ، والحد من المنتجات غير المحددة . وصول منصة الفترة(الهضبة)عدد الدورات المطلوبة يعتمد على نسخة من القالب في العينة .

ثانياً - العناصر الرئيسية

1.قوالب يمكن أن تكون في أشكال مختلفة ، بما في ذلك أساسا الجينومالحمض النوويبلازميدالحمض النوويالجينوم الفيروسيالحمض النوويوالـ PCRالمنتجاتcDNAالانتظار ، ولكن لا يمكنالرناعن أنواع مختلفة من القوالب ، الفرق الرئيسي يكمن في وقت ما قبل التشويه والتحريف و كمية من القوالب . جينوم كبيرالحمض النوويقبل تبديل طبيعة الوقت10 دقايقبلازميد , كافيةDNA2minالجينوم الفيروسيالحمض النوويقبل التشويه والتحريفدقيقتينوالـ PCRقبل تعديل المنتجدقيقتينحسناً

انتبهcDNAسلسلة واحدةالحمض النووي، ولكن لا يزال يمكن القيام بهالـ PCRالقالب ، ولكن فقط في الجولة الأولى من دورة واحدة فقط التمهيدي ملزمة لتجميع سلسلة أخرى . من الجولة الثانية ، واثنين من الاشعال ملزمة مواقع محددة ، وبالتالي تحقيقالـ PCRاتصال . سلسلة واحدةالرناولكن لا يمكن أن تحمل علىالـ PCRالتضخيم ، لأن تحقيقالـ PCRرد فعلالحمض النوويبوليميريز ، يمكن فقط تحديدالحمض النوويسلسلة .

2.عن حجم القالب ، عموما25ulنظامالحمض النووينوعية50100ngالجينوم .الحمض النوويبسبب بنية معقدة ، استخراج التركيز غالبا ما تكون كبيرة .الـ PCRولذلك ، استخراجالحمض النوويالتدرج تمييع . خلاف ذلك ، تركيزات عالية جدا قد يؤدي إلى التضخيم غير محددة . بلازميدالـ PCRالمنتج لا تحتاج إلى تخفيف بسبب بنية بسيطة ، وانخفاض تركيز الاستخراج .

منتجات الشركة للبيع :

الـ PCRما هي المشاكل التي ينبغي أن تولي اهتماما في التجربةماذا ؟

لا شيءCTالقيمة

نتائج الاختبار لا تواجهسي تيحالة القيمة,تحقق لمعرفة ما إذا كان هناك أي من الأسئلة التاليةس

1عدد الدورات غير كافية(عموما لا تتجاوز45دورة,ليس فقط زيادة قيمة الخلفية,الكمية غير مسموح) ;

2والـ PCRإعدادات البرنامج خطأ,هناك خطأ في الكشف عن مضان إشارة . عاديSGاعتماد القانون72℃تمديد الوقت جمع,تاكمانعادة ما يتم جمع الإشارات في نهاية أو تمديد الصلب,وبالإضافة إلى ذلك ، إذا كان جمع مضان مختارةن

3التمهيدي أو التحقيق . يمكن تمريرصفحةالكهربائي للكشف عن تدهور التمهيدي والتحقيقن

4القالب قد تتحلل أو عدم كفاية التحميل(لا أكثر500ng،وفقا لتعليمات كيتوعينات من تركيز غير معروف ينبغي أن تبدأ مع أقصى تركيز سلسلة تمييع عينات .نإذا كان قالب تدهور يحدث,إدخال الشوائب وتكرار التجميد تحسن ينبغي النظر فيها .,واقترح أن يكون قالب عينة صغيرة من التعبئة الاحتياطي,تجنب تكرار التجميد تحسنن

5إذا كان التحقيق التمهيدي هو مناسب(وخاصة التمهيدي عبر نترون,لضمان تضخيم الجينومالحمض النووي؛المنبع والمصب التمهيديتي امقيمة تتجاوز4℃أعلاه سوف تؤثر أيضا على التضخيمومنتدى

CTقيمة في وقت متأخر جدا

في الكمية النسبية، Ctالتحكم في القيمة1525أفضل بين,إذا كان في الكمية المطلقة,عينة مع انخفاض عدد النسخ، Ctالقيمة سوف تزيد,ولكن عموما لا ينبغي أن تتجاوز40دورة,وإلا فإن الكمية غير دقيقة .

وهكذا,حكمسي تيإذا كانت قيمة غير طبيعية في وقت متأخر جدا,يجب أن تتم وفقا لتصميم التجربة و الهدف .

1انخفاض كفاءة التضخيم . النسبة بين الاشعال او الاشعال و تحقيقات غير مناسبة,تحتاج إلى تحسيننالتمهيدي أو يدقق في تصميم غير معقول,تحتاج إلى إعادة تصميمن

2والـ PCRالإجراء غير مناسب,رد فعل على ثلاث خطوات,الصلب الأمثلوتمديد درجة الحرارة,يمكن أن تقلل من درجة حرارة التخمير بشكل صحيحنصلبوتمديد وقت قصير(يمكن تمديدها في الوقت الموصى به10s);

3وMgCl2تركيز غير مناسب,زيادة تركيز أيون المغنيسيوم .الـ PCRتدهور مختلف مكونات التفاعل أو عدم كفاية كمية العينةن

4والـ PCRالمنتج طويل جدا .الـ PCRتصميم المنتج يتجاوز500bp؛

5المانع موجود في القالب . عالية النقاء قالبالـ PCRاختبار أو تمييع القالب .