طقم إليسا الماوس انترلوكين 1 بيتا ، IL - 1 بيتا

1.نوع العينة وجمع :

سيرومسكل عينة من الدم التي تم جمعها في مصل الدم فصل أنبوب يوضع في درجة حرارة الغرفة .- 0.52ساعة أو4℃بين عشية وضحاها ، ثم1000سgطرد مركزي20 إزالة أو وضع طاف في-20℃أو-80℃ومع ذلك ، ينبغي تجنب تكرار التجميد والذوبان .
البلازماساستخدامEDTAأو الهيبارين كما anticoagulant جمع العينات .30في غضون دقائق2-8℃ 1000سgطرد مركزي15يمكن الكشف عنها عن طريق إزالة طاف أو وضعها في-20℃أو-80℃ومع ذلك ، ينبغي تجنب تكرار التجميد والذوبان .

خليط الأنسجةمع precoolingPBS (0.01M، pH = 7.4)شطف الأنسجة ، وإزالة بقايا الدم ( تقسيم خلايا الدم الحمراء في خليط يمكن أن تؤثر على نتائج القياس ) ، ثم وزن قطع الأنسجة مع حجم المقابلةPBSالصحافة العامة1 : 9نسبة الوزن إلى الحجم1 غرامعينات الأنسجة9 ملالPBSحجم معين يمكن تعديلها بشكل صحيح وفقا لمتطلبات التجربة و سجل جيد . أوصىPBSإضافة مثبطات الأنزيم البروتيني ) في الزجاج الخالط ، وطحن تماما على الجليد . من أجل مزيد من الانقسام من خلايا الأنسجة ، بالموجات فوق الصوتية يمكن أن تكون مكسورة أو الطين موحدة مرارا وتكرارا تجميد والذوبان . وأخيرا ، خليط السائل في5000سgطرد مركزي5-10دقيقةإزالة يمكن الكشف عنها ،أو وضع طاف-20أو-80ولكن ينبغي تجنب تكرار التجميد تحسنمنتدى

خلية ليزاتس امتصاص والتخلص من الثقافة المتوسطةبرنامج تلفزيوني ( 0.01 م ، الرقم الهيدروجيني 7-4 ) يغسل الخلايا مرة أخرى . كشط الخلايا مع الخلايا ، إضافة 2-5 مل من برنامج تلفزيوني ( 0.01 م ، الرقم الهيدروجيني 7-4 ) . تعليق الخلايا يمكن حذفها . تعليق خلية تم جمعها ، الطرد المركزي في 4 ℃ 1000 × ز لمدة 10 دقائق ، متوسطة تم التخلص منها ، ثم تم غسلها مع برنامج تلفزيوني precooled ثلاث مرات . إضافة كمية مناسبة من precooled برنامج تلفزيوني أو nondegenerative خلية ليزات ( إضافة مثبطات الأنزيم البروتيني قبل الاستخدام المؤقت ) إلى تعليق الخلايا ، وعادة ما تكون هناك حاجة إلى إعادة تعليق 150-250 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في خلية واحدة من 6-porous لوحة . وضع العينة في - 20 ℃ أو - 80 ℃ تجميد العينة ، ثم وضع العينة في درجة حرارة الغرفة إذابة الجليد مرارا وتكرارا 3 مرات ، حتى أن الخلايا يمكن أن تكون مقسمة بالكامل ، ولكن أيضا كسر بالموجات فوق الصوتية من أجل تحقيق الغرض من الانحلال الحراري . الطرد المركزي في 4 ℃ 10 ، 000 × ز لمدة 10 دقائق ، وإزالة الحطام ، طاف يمكن الكشف عنها .أو وضع طاف-20أو-80ولكن ينبغي تجنب تكرار التجميد تحسنمنتدى

خلية ثقافة طاف أو غيرها من العينات البيولوجية :من فضلك1000سgطرد مركزي20يمكن الكشف عنها عن طريق إزالة طاف أو وضعها في-20أو-80ومع ذلك ، ينبغي تجنب تكرار التجميد والذوبان .

2.حفظ العينة والاستقرار

عينة2-8℃في ظل الظروف التي يمكن تخزينها72h， في- 20℃أو-80℃يمكن تخزينهاستة أشهرفوقبعد جمع العينات ، وليس مرة واحدة في الكشف عن الانتهاء ، من فضلك اضغط على كمية من التعبئة والتغليف والتخزين المجمد ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان .

خطوات

1. الرقم المرجعي : عينة المقابلة micropore مرقمة في تسلسل ، كل لوحة يجب أن تكون سلبية مقارنةاثنين من الثقوب ، اثنين من الثقوب في السيطرة الإيجابية ، واحد في السيطرة على ثقب في السيطرة على ثقب في السيطرة على ثقب فارغة دون عينة أو انزيم كاشف القياسية ، وغيرها من الخطوات هي نفسها .ومنتدى

2. إضافة عينات : السلبية والإيجابية في السيطرة على السيطرة على السيطرة على الثقوب ، على التوالي .50μl。 ثم 40 ميكرولتر من عينة مخففة أضيفت إلى عينة اختبار حفرة ، ثم 10 ميكرولتر من عينة اختبار أضيفت . إضافة عينة إلى الجزء السفلي من لوحة ثقب ، لا تلمس جدار الحفرة قدر الإمكان ، يهز بلطف ويخلط جيدا .

3. درجة الحرارة : بعد إغلاق لوحة مع لوحة الختم37درجة حرارة الغرفة0دقيقةمنتدى

4. الاستغناء عن السائل : سوف30 مرة تركيز محلول الغسيل المخفف مع الماء المقطر لمدة 30 مرة .

5. غسل : إزالة بعناية ختم الفيلم ، والتخلص من السائل ،رمي الجافة، كل حفرة مليئة سائل الغسيل ، لا يزال قائمابعد 30 ثانية من التخلص منها ، كرر ذلك 5 مرات ، بات الجافة .

6. إضافة انزيم : إضافة انزيم الكواشف القياسية في كل حفرة50مl， باستثناء ثقب فارغمنتدى

7. درجة الحرارة : بعد إغلاق لوحة مع لوحة الختم37درجة حرارة الغرفة0دقيقةمنتدى

8. غسل : إزالة بعناية ختم الفيلم ، والتخلص من السائل ،رمي الجافة، كل حفرة مليئة سائل الغسيل ، لا يزال قائمابعد 30 ثانية من التخلص منها ، كرر ذلك 5 مرات ، بات الجافة .

9. اللون : لون المطور تضاف إلى كل حفرةA50مl، ثم إضافة لون المطورB50مl، يهز برفق ويخلط جيدا ،37ج - تجنب الضوء واللون 10-20دقيقة .

10.إنهاء : إضافة إلى إنهاء كل حفرةسائل .50 ميكرولترإنهاء الرد( عند هذه النقطة الأزرق يقف بدوره الأصفر )منتدى

11.التصميم : صفر مع ثقب فارغ ،450نانومترقياس الطول الموجيامتصاص الضوءدرجة )ODالقيمة (يجب أن يكون التصميم بعد إضافة سائل الإنهاء .15في غضون دقائق .

ملاحظة

1. إعداد كاشف : كاشف عدة مأخوذة من البيئة المبردة يجب أن تكون متوازنة في درجة حرارة الغرفة15-30 دقيقة قبل الاستخدام . إعداد انزيم العلامات اللازمة لتجربة واحدة ، والبعض الآخر يمكن إزالتها من لوحة microporous ، مختومة ، وتخزينها وفقا للتعليمات لاستخدامها في المرة القادمة .

2. إضافة عينة : استخدام المتاح معقم شفط لتجنب التلوث . عند إضافة عينة ، يجب الحرص على عدم وجود فقاعات الهواء ، إضافة عينة في الجزء السفلي من لوحة enzymic التسمية ، لا تلمس ثقب الجدار قدر الإمكان ، يهز بلطف ويخلط جيدا . كما هو الحال مع إضافة الكواشف المتفاعلة ، الفاصل الزمني بين العينة الأولى والأخيرة في حفرة صغيرة قدر الإمكان .في غضون 10 دقائق ) ، إذا كانت كبيرة جدا ، وسوف يؤدي إلى مختلف " قبل التدفئة " الوقت ، مما يؤثر بشكل كبير على دقة القياس والتكرار . من أجل التحقق من دقة قياس القيمة ، فمن المستحسن أن يتم إجراء تجارب متعددة الثقوب .

3. درجة الحرارة : من أجل منع تبخر العينة ، يرجى وضع علامة لوحة مع غطاء أو فيلم المغلفة في مربع الرطب لتجنب تبخر السائل ، بعد غسل لوحة ، ينبغي أن تكون الخطوة التالية في أقرب وقت ممكن ، في أي وقت ، ينبغي تجنب علامة لوحة في حالة جفاف ، وفي الوقت نفسه ، ينبغي التقيد الصارم بالنظر إلى درجة الحرارة والوقت .

4. غسلتركيز سائل الغسيلممكنسوف يكون هناكتبلوريمكن أن تكون ساخنة في حمام مائي للمساعدة في حللا تؤثر على نتيجة الغسيل . غسل كامل مهم جدا في كل عملية الغسيل ، غسل السائل * يجب أن تكون جافة . غسل السائل المتبقي في رد فعل حفرة في عملية الغسيل يجب أن تكون جافة على امتصاص الماء ورقة ، ورقة امتصاص الماء لا ينبغي أن توضع مباشرة في رد فعل حفرة لامتصاص الماء ، وفي الوقت نفسه ، السائل المتبقي في الجزء السفلي من لوحة بصمات الأصابع يجب أن تمحى برفق لتجنب التأثير على القراءة النهائية من انزيم العلامات . إذا كنت تستخدم غسالة أوتوماتيكية ، يرجى استخدامها في التجارب الرسمية بعد الاستخدام الماهر .

5. السيطرة على وقت رد الفعل : بعد إضافة الركيزة ، يرجى مراقبة الوقت تغير اللون من رد فعل حفرة ، إذا كان اللون هو أكثر قتامة ، يرجى إضافة إنهاء السائل في وقت مبكر لوقف رد الفعل ، وتجنب رد فعل قوي جدا و تؤثر على كثافة الضوء قراءات enzyme-labeller . . . . . . .

6. الركيزة : الحفاظ على الركيزة من الضوء ، وتجنب التعرض المباشر للضوء الساطع أثناء التخزين و الحضانة .