jc-1 غشاء الميتوكوندريا المحتملة كيت

ملخص المنتج

جي سي - 1غشاء الميتوكوندريا المحتملة كيت( أ )مجموعة اختبار إمكانات غشاء الميتوكوندريال JC-1هو نوع منجي سي - 1كاشف عدة للكشف عن التغيرات المحتملة في غشاء الميتوكوندريا من الخلايا والأنسجة أو تنقية بسرعة وحساسة . انخفاض غشاء الميتوكوندريا المحتملة هو علامة على موت الخلايا المبرمج في وقت مبكر . ولذلك ، فإن هذه المجموعة يمكن أن تستخدم للكشف عن الخلايا في وقت مبكر .

جي سي - 1غشاء الميتوكوندريا المحتملة ، غشاء الميتوكوندريا المحتملةدلتاψmمثالية مسبار الفلورسنت .جي سي - 1الأصباغ تتراكم في الميتوكوندريا بطريقة تعتمد على الجهد ، ويمكن استخدامها للكشف عن غشاء الميتوكوندريا المحتملة في الخلايا والأنسجة ، أو تنقية . داخل الميتوكوندريا العادية ،جي سي - 1تجمع في مصفوفة الميتوكوندريا لتشكيل البوليمرات التي تنبعث منها مضان أحمر قوي )Ex = 585 نانومتر، Em = 590 نانومتر) ; الميتوكوندريا غير صحية بسبب انخفاض أو فقدان غشاء المحتملة ،جي سي - 1يمكن أن توجد فقط في شكل موحود في السيتوبلازم التي تنتج مضان أخضر )Ex = 514 نانومتر، Em = 529 نانومتر. لاجي سي - 1ليس فقط يمكن أن تستخدم للكشف عن نوعية ، ولكن أيضا يمكن أن تعكس التغيرات في غشاء الميتوكوندريا المحتملة مباشرة بسبب تغير اللون . يمكن أن تستخدم أيضا في الكشف الكمي ، لأن درجة الاستقطاب الميتوكوندرياونسبة كثافة مضان أخضر .

تكوين المنتج

حفظالنقلس-20الحفاظ على درجة مئوية من الضوء الجاف ، على الأقل1سنة صالحة . النقلكيس الثلجالنقل

طريقة الاستخدام jc-1 غشاء الميتوكوندريا المحتملة كيت

1. JC-1إعداد حل الصباغة

ستة لوحة مثقبة ، هذه المجموعة يمكن الكشف عنها100عينة . مطلوب لكل حفرةجي سي - 1كمية من صبغ سائل العمل1 مل, أخرى ثقافة إناء جي سي - 1كمية من تلطيخ السائل العامل ، وهلم جرا . لكل خلية تعليق 50و100مليون خلية في حاجة 0.5 مل JC-1صباغة سائل العمل . تأخذ كمية مناسبة جي سي - 1（س) ، وفقا لكل50 ميكرولتر JC-1（سإضافة 8 ملتمييع المياه النقية جي سي - 1هزة عنيفة يذوب تماما ويخلط جيدا جي سي - 1ثم انضم 2 مل JC-1صباغة عازلة )سبعد خلط جي سي - 1صباغة سائل العمل .

[ ملاحظة ] :يجب أن جي سي - 1（سالمياه النقية جدا ( المقدمة من عدة ) يمكن أن تضاف بعد حل كامل و الاختلاط . جي سي - 1صباغة عازلة )س. لا لا يمكن أن يكون أول إعداد جي سي - 1صباغة عازلة )سإضافة جي سي - 1（سمثل جي سي - 1وسوف يكون من الصعب حل تماما ، وسوف تؤثر تأثيرا خطيرا على متابعة الكشف .

2. وضع ضوابط إيجابية

CCCP( أ )10 ممأوصت الصحافة 1س1000 في خلية ثقافة متوسطة ، تمييع 10 ميكرومالخلايا المعالجة 20 دقيقةثم يتم تحميلها بالطريقة التالية جي سي - 1غشاء الميتوكوندريا المحتملة . بالنسبة لمعظم الخلايا ، عادة 10μM CCCPمعالجة 20 دقيقةغشاء الميتوكوندريا المحتملةوانكوانفقدجي سي - 1بعد تلطيخ ، الأخضر مضان لوحظ . خطوط الطول من الخلايا الطبيعية جي سي - 1يجب أن تظهر مضان أحمر بعد تلطيخ . لخلايا معينةCCCPتركيز العمل والوقت

يجب أن تشير إلى الوثائق ذات الصلة .

3. تعليق خلية

1）取10و60 مليون خلية 0.5 ملفي خلية ثقافة المتوسط ، يمكن أن تحتوي على مصل الدم و الفينول الأحمر .

2إضافة0.5 مل JC-1صباغة سائل العمل ، عكس عدة مرات مزيج متجانس . خلية ثقافة مربع 37الحضانة في درجة مئوية20 دقيقةمنتدى

3خلال فترة الحضانة 1 مل JC-1صباغة عازلة )سإضافة 4 ملنسبة الماء المقطر جي سي - 1صباغة عازلة )س) , ويوضع في حمام الجليد .

4و37درجة مئوية بعد الحضانة ،600 × g4الطرد المركزي3و4 دقايقترسيب الخلايا . تجاهل طاف ، وإيلاء الاهتمام إلى عدم امتصاص الخلايا قدر الإمكان .

5مع جي سي - 1صباغة عازلة )سغسل 2 الوقت : انضم 1 مل JC-1صباغة عازلة )س) تعليق الخلايا الثقيلة ،600 × g4الطرد المركزي3و4 دقايقالخلايا المترسبة ، تجاهل طاف . . . . . . . إضافة مرة أخرى 1 مل JC-1صباغة عازلة )س) تعليق الخلايا الثقيلة ،600 × g4الطرد المركزي3و4 دقايقالخلايا المترسبة ، تجاهل طاف . . . . . . .

6) استخدام كمية مناسبة جي سي - 1صباغة عازلة )سبعد تعليق ، لاحظ مع مضان المجهر أو ليزر متحد البؤر المسح المجهر ، أو مع مضان الطيفي . أو قياس التدفق الخلوي .

4. خلايا ملتصقة

[ ملاحظة ]الخلايا الملتصقة ، إذا كنت ترغب في استخدام مضان الطيفي أو قياس التدفق الخلوي ، يمكنك جمع الخلايا ، تعليق ، ثم الرجوع إلى تعليق خلية طريقة الاختبار .

1على ثقب واحد من ستة لوحة المسام ، امتصاص الثقافة المتوسطة ، وفقا لتجربة محددة إذا لزم الأمر PBSأو غيرها من الحلول المناسبة لغسل الخلايا مرة واحدة ، إضافة 1 ملخلية ثقافة المتوسط . ثقافة الخلية المتوسطة يمكن أن تحتوي على مصل الفينول الأحمر .

2إضافة 1 مل JC-1صباغة سائل العمل ، تماما مختلطة . خلية ثقافة مربع 37الحضانة في درجة مئوية20 دقيقةمنتدى

3خلال فترة الحضانة 1 مل JC-1صباغة عازلة )سإضافة 4 ملنسبة الماء المقطر جي سي - 1صباغة عازلة )س) , ويوضع في حمام الجليد .

4و37بعد الحضانة في درجة مئوية ، supernatants امتصجي سي - 1صباغة عازلة )سغسل 2 مرة .

5إضافة 2 ملثقافة الخلية المتوسطة التي يمكن أن تحتوي على مصل الفينول الأحمر .

6ملاحظة تحت المجهر مضان أو ليزر متحد البؤر المسح المجهر .

5. تنقية الميتوكوندريا

1) سوف تكون جاهزة جي سي - 1إعادة استخدام صباغة سائل العمل جي سي - 1صباغة عازلة )سمخفف 5 مرات .

2و0.9mL 5ضعف جي سي - 1إضافة إلى صباغة سائل العمل 0.1 ملمجموع البروتين 10و100 ميكروغرامتنقية الميتوكوندريا .

3الكشف عن مضان الطيفي أو fluorescence-enzyme-labeller : مباشرة بعد الاختلاط مع fluorescence-spectrophotometer الوقت المسح الضوئي )الوقت مسحالطول الموجي الإثارة485 نانومترالطول الموجي الانبعاثات 590 نانومترلا يمكن تعيين الطول الموجي الإثارة إلى 485 نانومترعندما475و520 نانومترمجموعة مثيرة الطول الموجي . وبالإضافة إلى ذلك ، يمكنك الرجوع إلى الخطوات التالية 6 الكشف عن مضان تتم على أساس الطول الموجي الإعداد .

4ملاحظة مع مضان المجهر أو ليزر متحد البؤر المسح المجهر 6منتدى

6. مضان الملاحظة والتحليل

كشف جي سي - 1ضوء الإثارة يمكن تعيين إلى 490 نانومترالتي ينبعث منها ضوء مجموعة 530 نانومتركشف جي سي - 1عندما البوليمر ، ضوء الإثارة يمكن تعيين إلى 525 نانومترالتي ينبعث منها ضوء مجموعة 590 نانومترمنتدى

[ ملاحظة1وفي هذه الورقة ، الإثارة و انبعاث الضوء لا تحتاج إلى تعيين إلى أقصى قدر من الإثارة و انبعاث الضوء الطول الموجي . مثل استخدام مجهر فلوري لمراقبة جي سي - 1البوليمر يمكن استخدامها في كثير من الأحيان للكشف عن iodopropidine أو سي3معيار ممر الموجة مرشح . كشف جي سي - 1مونومر يمكن استخدامها في كثير من الأحيان للكشف عن FITCأو GFPمعيار ممر الموجة مرشح . مضان أخضر يدل على انخفاض غشاء الميتوكوندريا المحتملة ، وربما في مرحلة مبكرة من موت الخلايا المبرمج . مضان أحمر يدل على أن غشاء الميتوكوندريا المحتملة هي طبيعية نسبيا ، حالة الخلية هي أيضا طبيعية نسبيا .

الاحتياطات

1وجي سي - 1（سفي4تحت درجة حرارة منخفضة نسبيا ، مثل درجة حرارة الغرفة ، حمام الثلج ، وما إلى ذلك ، يمكن أن تجمد و تمسك في الجزء السفلي من أنبوب الطرد المركزي ، أنبوب الجدار أو أنبوب الغطاء .20و25حمام دافئ لمدة دقيقة حتى يذوب تماما .

2تحميل كامل جي سي - 1بعد استخدام جي سي - 1صباغة عازلة )سعند غسل جي سي - 1صباغة عازلة )سحفظ 4تأثير الغسيل هو أفضل .

3وجي سي - 1بعد التحقيق تم تحميلها وغسلها ، حاول 30 دقيقةبعد الانتهاء من الاختبار . الحفاظ على حمام الثلج قبل الاختبار .

4من فضلك لاجي سي - 1صباغة عازلة )ستكوين جميعجي سي - 1صباغة عازلة )سو，كاشف عدة تحتاج إلى استخدامها مباشرة في عملية الاستخدام .جي سي - 1صباغة عازلة )س. لا

5إذا وجدت جي سي - 1صباغة عازلة )سيجب أن تكون جميع المذاب قبل استخدامها . 37التدفئة في درجة مئوية لتعزيز حل .

6وCCCPمثبطات سلسلة نقل الإلكترون الميتوكوندريا السامة ، يرجى الانتباه إلى الحماية .

7من أجل سلامتك وصحتك ، يرجى ارتداء ملابس المختبر و القفازات القابل للتصرف .

منتجات ذات صلة

جزء من jc-1jc-1 الاقتباسjc-1 غشاء الميتوكوندريا المحتملة كيت

( 1 ) [IF=9.7]مساهمة التهاب الحديد والوظائف المزدوجة لـ GPX4 في تقدم التهاب المفاصل العظميEBioMedicine نشر:يناير 27, 2022 وزارة الدفاع: https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.103847

البيانات الخام من هذا الرسم البياني مأخوذة من الأدب ( 1 ) .

( 2 ) [IF=11.4]وينظم VDR وظيفة الميتوكوندريات كآلية وقائية ضد إصابة الخلايا الأنابيبية الكلوية في الفئران السكرية. -بيولوجيا ريدوكس -المجلد 70، أبريل 2024، 103062.V

البيانات الخام من هذا الرسم البياني مأخوذة من الأدب ( 2 ) .

( 3 )[IF=11.1]يستهدف LONP1 HMGCS2 لحماية وظيفة الميتوكوندريات وتخفيف مرض الكلى المزمن.إمبو مول ميد(2023)15: e16581https://doi.org/10.15252/emmm.202216581

إن lonp1 hmgcs2 , و الميتوكوندريا في mptc ( أعلى ، 20um ) و الكلى البشرية ( أقل ، 200um ) تم تحليلها من قبل immunofluorescence colocalization . . . . . . .

البيانات الخام من هذا الرسم البياني مأخوذة من الأدب ( 3 ) .