الإنسان الخلايا الدبقية الصغيرة hmc3 ( شارع )

الإنسان الخلايا الدبقية الصغيرة hmc3 شارع ،حالة ثقافة

ثانيابعد تلقي العلاج

طرق علاج الخلايا الإنعاش :أفضل طريقة لنقل الخلايا هو ملء الثقافة المتوسطة و ختم زجاجة الفم بعد الثقافة في حالة جيدة . الحصول على الخلايا مع رش الكحول 75 ٪ في جميع أنحاءخلية زجاجةالعقيم بدقةبعد .وضع زجاجة خلية في حاضنة لمدة 2-4 ساعات لتحقيق الاستقرار في حالة الخليةبعد الوقوف ، نمو الخلايا لوحظ تحت المجهر ، و الصور المحفوظة في عدة مرات ( ويفضل أن يكون ذلك في 40x 100x , 200x ، على التوالي ) ، أول ثلاثة أيام من الصور هي أساس هام بعد البيع ، لا توفر الصور في حالة جيدة من التقصير .

طرق علاج الخلايا المجمدة :بعد الحصول على الخلايا ، ومراقبة ما إذا كان هناك أي فائض من الجليد الجاف في رغوة مربع ، إذا كان هناك أي ذوبان الجليد في حالة تخزين الأنابيب المجمدة سليمة ، إذا كان هناك أي ذوبان الجليد الجاف التبخر أو الكسر ، يرجى التقاط الصور في الوقت المناسب والاتصال بنا . إذا لم يتم الاتصال بنا في غضون ثلاثة أيام من استلام الخلية ، ثم التقصير هو جيد . إذا كان لديك أي أسئلة حول النشاط ، يرجى الاتصال بنا في الوقت المناسب .لا اتصال مع الولايات المتحدة دون إذن من أجل استعادة الأنبوب الثاني لا توجد مشاكل ما بعد البيع .

خطوات زراعة الخلايا

(أ)مرور الخليةإذاعندما لا أكثر من 80 ٪ من درجة انصهار ، المعبأة في زجاجات متوسطة الثقافة يتم جمعها في أنبوب الطرد المركزي ، 5 مل من الثقافة المتوسطة هو المتبقي في 37 ℃ و 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون .₂حاضنة الثقافة ؛ إذا كانت كثافة الخلية هو أكثر من 80 ٪ ، يمكن أن تكون ثقافة فرعية .

خلية ملتصقةالخطوات هي كما يلي :

1 ) إزالة الثقافة طاف ، وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني دون الكالسيوم والمغنيسيوم الأيونات 1-2 مرات .

2 ) إضافة 1 مل من السائل الهضمي ( 0.25 في المائة trypsin-0.53mm EDTA ) في الثقافة زجاجة ، ووضعها في حاضنة لمدة 1 دقيقة ، ثم لاحظ تحت المجهر الهضم الخلوي ، إذا كان معظم الخلايا تصبح مستديرة و تقشر ، بسرعة العودة إلى طاولة العمليات ، اضغط على عدة زجاجات الثقافة ، إضافة 6 مل تحتوي على 10 ٪ مصلالثقافة المتوسطةإنهاء الهضم ؛

3 ) ضربة بلطف الخلايا ، بعد السقوط ، امتص في أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5-8min ، تجاهل طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة ، ثم تهب بالتساوي .

4 ) 5-6 مل من كل زجاجة من وسائل الإعلام ، تعليق خلية مقسمة إلى نسبة 1 : 2 في 5-6 مل من وسائل الإعلام الجديدة التي تحتوي على 6 سم طبق الثقافة أو الثقافة T25 زجاجة .

( وهذا هو ، 1 زجاجة T25 تلقيح 2 زجاجات أو 2 6 سم طبق الثقافة )

تعليق خليةالخطوات هي كما يلي :

1 ، نصف طريقة تغيير السائل

نصف السائل تغيير العلاج ، يقف زجاجة الثقافة في حاضنة لمدة 1 ساعة أو نحو ذلك ، بلطف تمتص حوالي 3 مل من وسائل الإعلام ، ومن ثم إعادة شحن 3 مل من وسائل الإعلام ، إذا كانت وسائل الإعلام تغيير اللون ببطء ، يمكن أن تضاف مباشرة إلى حوالي 500ul FBS ، مرور الوقت يمكن أن تكون مباشرة إعادة شحن 5 مل من وسائل الإعلام الثقافة تنقسم إلى اثنين من زجاجات الثقافة والثقافة ، عموما مثل مرور حوالي 3 مرات يمكن طرد مرة واحدة ، إزالة الخلايا الميتة .

الطرد المركزي السائل طريقة الصرف

إذا لزم الأمر ، تعليق خلية يمكن جمعها في أنبوب الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، إزالة طاف ، إضافة 1-2 مل من الثقافة المتوسطة ، ثم تعليق خلية يمكن تقسيمها إلى 2 : 1 زجاجة جديدة T25 ، إضافة 6-8 مل من الثقافة الجديدة المتوسطة وفقا لمتطلبات المواصفات للحفاظ على نمو الخلايا ، وفقا للظروف الفعلية ، بعد مرور نسبة 1 : 2 ~ 1 : 5 .

ب،تجميد الخلايا

1 . عندما تنمو الخلايا إلى 80 ٪ من مساحة الثقافة زجاجة ، زجاجة الثقافة T25 هو التخلي عن استخدام برنامج تلفزيوني لتنظيف الخلايا مرة واحدة .

2 ، إضافة 0.25 ٪ عصير الهضم حوالي 1 مل في الثقافة زجاجة ، لاحظ تحت المجهر المقلوب ، بعد تراجع الخلايا إلى جولة ، إضافة 5 مل من الثقافة المتوسطة لوقف الهضم ، ثم بلطف ضربة قبالة الخلايا ، ثم نقل إلى تعليق 15 مل أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق .

3 - التخلي عن طاف ، إضافة إلى 1 مل من الخلايا المترسبة ياغي المصل خالية من السوائل المجمدة ( المادة رقم : c7001 ) بعد الاختلاط ، إضافة إلى تجميد أنبوب .

4 ، سيتم تخزين الخلايا المجمدة مباشرة في - 80 ℃ الثلاجة يمكن أن يكون ، إذا كان في وقت لاحق من الخلايا إلى خزان النيتروجين السائل ، ثممطلوب ثلاجة - 80 درجة مئويةوسطتخزين أكثر من 24 ساعةثم نقل إلى خزان النيتروجين السائل .

جيم،إنعاش الخلايا

1 ، إزالة الخلايا من النيتروجين السائل أنبوب التخزين المجمدقناع ) ، وضعه بسرعة الحل في 37 ℃ حمام الماء حتى لا تبلور ، ثم مسح الجدار الخارجي مع 75 ٪ من الكحول .

ونقل الخلايا في أنبوب المجمدة تحتوي على في 15 مل أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق .

والتخلي عن supernatants والأمطار تعليق مع 5 مل متوسطة ، تلقيحT25 قارورة الثقافةفي 37 ℃ ، 5 ٪ شركة₂الخلايا المستزرعة في حاضنة .

4 ، في اليوم التالي ، واستخدام وسائل الإعلام الجديدة لمواصلة الثقافة .

ملاحظة :بعض الخلايا لا تلتزم بقوة الجدار ، في عملية النقل من السهل أن يحدث فقدان الخلايا ، وهذا هو ظاهرة طبيعية . إذا كان هناك المزيد من الانفصال ، جميع وسائل الإعلام الثقافة يمكن جمعها في أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق .جمع طافالثقافة الانتقالية( في وقت لاحق مقارنة الثقافة )إضافة 1-2ml هطول الأمطار ، ضربة خفيفة ، تعليق ، هضم 1-2 دقيقة ، إضافة 5 مل متوسطة لإنهاء رد الفعل . ثم الطرد المركزي ، تخلى طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة تعليق الثقيلة . ثم ، في 1 : 2 زجاجة ( T25 ) ، متوسطة جديدة تضاف إلى 5-8ml / زجاجة .37 ℃ ، 5٪ CO₂خلية ثقافة مربع .

نرحب الزبائن الجدد والقدامى للتشاور والنظام :الإنسان الخلايا الدبقية الصغيرة hmc3 ( شارع )