-
البريد الإلكتروني
aoxuelg@vip.163.com
-
الهاتف
13601697841
-
العنوان
غرفة 1606 ، حركة المرور الحديثة بناء ، no.218 هنغفنغ الطريق ، حي جاباي ، شنغهاي
فئات المنتج
الفيزياء البصرية التطبيقية المحدودة شنغهاي مكتب الممثل
ارتفاع تدفق البروتين الاستقرار تحليل نظام DSF
قابلة للتفاوضتحديث12/29
- نموذج
- طبيعة المصنع
- المنتجين
- فئة المنتج
- مكان المنشأ
نظرة عامة
مسعر المسح التبايني ( DSF ) هو نوع من الكشف عن مضان على أساس عملية لمسخ الحرارية من البروتينات . دسف ( الذاتية fluorimetric الأسلوب ) يمكن قياس عينة كاملة microplate بسرعة دون أي علامة على عينة أو استخدام أي مسبار فلوريسنت ، ويوفر بيانات عالية الإنتاجية للمساعدة في فحص عينة مرشح وصياغة المكونات .
تفاصيل المنتج
مسعر المسح التبايني ( DSF ) هو نوع من الكشف عن مضان على أساس عملية لمسخ الحرارية من البروتينات .
استقرار البروتين
استقرار البروتين هو واحد من أهم الصفات النوعية الحيوية المخدرات ، التي تحدد فعالية وجدوى الإنتاج والسلامة الجرف الحياة من المخدرات . الاستقرار الهيكلي عالية البروتين يضمن أن البروتين يبقى نشطا و آمنة في الجرف الحياة .
دراسات الاستقرار تستخدم للتحقق من استقرار بنية النظام عالية ( هوس ) البروتينات في ظروف مختلفة ، مثل درجة الحرارة ، ودرجة الحموضة ، والمواد المساعدة ، وقت التخزين ، وما إلى ذلك لتحديد ظروف التخزين والنقل المناسبة . . . . . . . وفي الوقت نفسه ، والمنظمين مثل ادارة الاغذية والعقاقير ، ايما ، وما إلى ذلك تتطلب أيضا بيانات واسعة النطاق من الاستقرار قبل الموافقة على استخدام الأدوية البيولوجية . ولذلك ، فهم وضمان الاستقرار الهيكلي عالية المستوى من البروتين العلاجي المخدرات هو شرط أساسي لتطوير آمنة وفعالة من الأدوية الصيدلانية البيولوجية الشركات والباحثين بحاجة إلى تحليل وتقييم الاستقرار الهيكلي عالية المستوى من البروتين في العديد من مراحل البحث والتطوير والإنتاج .
طرق تحليل البروتين الاستقرار
تحليل البروتين الاستقرار وعادة ما يتم ذلك باستخدام الأساليب التالية :
طريقة الكيمياء الحيوية
ديتشرويسم دائرية ( سي دي )
مسعر المسح التبايني ( دسك )
الكمية PCR ( qpcr الخارجية مضان DSF )
تشتت الضوء الديناميكي ( DLS ) ثابت تشتت الضوء ( SLS ) طريقة
مسعر المسح التبايني ( دسك ) غالبا ما يعتبر الحل الأكثر أهمية في تحليل البروتين الاستقرار . ومع ذلك ، فإن الطلب على التحليل السريع من عينة كبيرة المخزنة في لوحة microporous ( مثل 96 أو 384 لوحة المسام ) يحد من تطبيق دسك في فحص المخدرات والتنمية في وقت مبكر . ولذلك ، DSF أصبحت شعبية وفعالة من حيث التكلفة الحل .
دسف ( الذاتية fluorimetric الأسلوب ) يمكن قياس عينة كاملة microplate بسرعة دون أي علامة على عينة أو استخدام أي مسبار فلوريسنت ، ويوفر بيانات عالية الإنتاجية للمساعدة في فحص عينة مرشح وصياغة المكونات .
طريقة DSF بسرعة فحص عدد كبير من العينات ، مما يحسن إلى حد كبير من كفاءة فحص المخدرات و تحليل تكوين المخدرات . العديد من الأدوية الحيوية ، DSF طريقة الفحص السريع الشامل ، باستخدام تقنية DSC متعامد للتحقق من نتائج الفحص المبكر DSF ، فحص المخدرات وتطوير برنامج فعال .
DSF يستخدم على نطاق واسع في تحليل استقرار البروتين ، بما في ذلك ولكن لا تقتصر على الجوانب التالية :
اختبار الاستقرار الحراري للبروتين : معظم البروتينات لديها متطلبات صارمة على درجة الحرارة ، وتقييم الاستقرار الحراري للبروتين يساعد على التعبير العادي وظيفة البروتين . DSF ليس فقط يمكن أن تستخدم لقياس الاستقرار الحراري المعلمات من البروتين في تدفق عالية ، ولكن أيضا يمكن أن تستخدم لتقييم الطفرات pH、 العوامل التي يمكن أن تحسن الاستقرار الحراري تم فرزهم .
تدفق عالية فحص البروتين المثبتات و مثبطات : من خلال تدفق عالية فحص مجمع يجند المكتبة ، ونحن الحصول على مرشح مركب جنبا إلى جنب مع عينة البروتين ، وتقييم تأثير مركب على استقرار البروتين ، وبالتالي اختيار البروتين المثبتات ، مثبطات ، مساعد عامل الجزيئية المحرمين .
دراسات على آلية التفاعل البروتين ، مثل البروتين البروتين البروتين التفاعل ، تقارب التحليل الحركي ، والاستقرار الحراري المعلمات من البروتين يجند ، مساعد ، كوصي الجزيئية .
دراسة عن آلية تثبيط المركبات الجزيئية الصغيرة : DSF يمكن استخدامها للكشف عن تدفق عالية ، مصفوفة من المركبات ( المركبات مع بعض المعروف مثبطات ، ركائز ، والمنتجات ، أو العوامل المساعدة ، الخ . )
دراسة بنية البروتين : بلورة البروتين هو وسيلة هامة جدا لدراسة بنية البروتين .
مبادئ تقنية DSF :
مسعر المسح التبايني ( DSF ) هي اقتصادية وفعالة وسهلة الاستخدام تقنية البيوفيزيائية التي تحدد درجة حرارة التحول لمسخ البروتين ( TM أو الكيميائية لمسخ سم ) عن طريق الكشف عن التغيرات في انبعاث مضان الطيف عند درجة حرارة مرتفعة أو لمسخ وكيل موجود .
وقد وجد أن أقصى قدر من الأطياف الانبعاثات الذاتية مضان من الأحماض الأمينية العطرية ( AAA ) متحمس في مختلف microenvironments القطبية ( على سبيل المثال ، مسعور أو ماء ) . مضان الذاتية في البروتين يأتي أساسا من الأحماض الأمينية العطرية مثل تريبتوفان ( الحزب ) ، فينيلألانين ( PHE ) التيروزين ( صور ) ، حيث مضان الذاتية قوية .
على سبيل المثال ، في النواة المكروية من البروتين مسعور ، أقصى قدر من الانبعاثات الذاتية مضان الطول الموجي حوالي 330nm بينما في ماء القطبية المكروية ، أقصى قدر من الانبعاثات الذاتية مضان الطول الموجي حوالي 350 نانومتر . الحرارية أو الكيميائية لمسخ لمسخ البروتين عادة ما يؤدي إلى تغيير في قطبية المكروية حول تريبتوفان المخلفات ، مما يؤدي إلى تعريض تريبتوفان عادة جزءا لا يتجزأ من البروتين مسعور النواة تدريجيا إلى ماء البيئة ، مما يؤدي إلى التحول الأحمر ( الأحمر التحول ) من أقصى انبعاث مضان الذاتية الطول الموجي ، أي الانتقال إلى أكبر منطقة الطول الموجي .
هذه الطريقة لا تحتاج إلى مسبار فلوريسنت أو التسمية ، وبالتالي تجنب نتائج إيجابية كاذبة مثل خلفية مضان غير محددة الامتزاز ، الخ .
عندما البروتين هو decolved بسبب الحرارة أو الكيميائية لمسخ لمسخ مثل الجوانيدين هيدروكلوريد ، واليوريا ، وما إلى ذلك ، عملية نشر البروتين يمكن دراستها من خلال قياس مضان الذاتية مع تغير درجة الحرارة أو لمسخ . . . . . . . هذه البيانات يمكن استخدامها لتوليد منحنى ذوبان والحصول على درجة حرارة التحول الظاهر TM Tonset、 فان دير فالس enthalpies التغيير ( Δ ح ) ، طاقة غيبس الحرة ( Δ ز ) و التشويه والتحريف الكيميائية سم قيمة تستخدم لتقييم والتنبؤ استقرار البروتين .
إن supr-dsf التقليدية غالبا ما تستخدم 350 / 330 نسبة طريقة لتحليل البيانات ، ولكن supr-dsf يوفر العديد من الأساليب التحليلية ، بالإضافة إلى نسبة الأسلوب ، supr-dsf يوفر أيضا BCM ( barycentric يعني طريقة ) ، يمكن الحصول على أفضل نسبة الإشارة إلى الضوضاء من 350 / 330 نسبة الأسلوب ، هو أكثر ملاءمة لتحليل تركيز منخفض من البروتين .
الخصائص الرئيسية لنظام DSF تحليل الاستقرار البروتين عالية الإنتاجية :
استخدام معيار 384 لوحة microporous ، لا تحتاج إلى المواد الاستهلاكية الخاصة والشعيرات الدموية
الفرز الفائق الإنتاجية ، عملية التسخين ( 60-80 دقيقة ) يمكن أن تكتمل
اختبار واحد 384 microplate باستخدام مضان الذاتية دون صبغ أو تسمية ، متوافق مع الأشعة فوق البنفسجية الصمام الإثارة
فقط 10-30 μ ل عينة ، عينة تركيز 0.05-250mg / ml
المعالم الرئيسية : تونست ، TM ، ΔΗ ، Δ ز ، سم و تقارب تم الحصول عليها .
توفير بيانات دقيقة الجودة والتكرار
تطبيق نظام supr-dsf :
supr-dsf النظام يستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات مثل البحوث الأساسية في علوم الحياة و البحث والتطوير من الأدوية :
فحص المسخ المتسارع
فحص وتحسين صياغة وإعداد
فحص حالة بلورة البروتين
تقييم الاتساق بين دفعات
تقييم التشابه البيولوجي
تسارع الإجهاد والانحلال القسري
ملزمة بفعل التغيرات المورفولوجية
تقييم ما بعد الترجمة
تحليل درجة حرارة ثابتة والاستقرار الكيميائية
المواصفات الفنية لنظام DSF لتحليل استقرار البروتين عالية الإنتاجية :
تطبيق نموذجيفحص المسخ المتسارع
إن supr-dsf استخدمت لمقارنة وفحص 16 عينات ، بما في ذلك نوع البرية البروتين ( WT ) و 15 نقطة واحدة متحولة . في غضون 1.5 ساعة ، عالية الجودة ذوبان منحنيات 48 عينات ( ثلاث مرات في كل مجموعة ) تم إنشاؤها بواسطة جهاز DSF ( 384 الثقوب في نفس الوقت ) . درجة حرارة انصهار TM قيمة يمكن الحصول عليها عن طريق تركيب البيانات مع النموذج ، والاستقرار يمكن فرز وفرز .
كما هو مبين في الشكل 1 ، والانصهار منحنيات ثلاثة المسوخ ( 9 و 13 و 14 ) تحولت إلى اليسار بالمقارنة مع وزن ( الأزرق ) ، مما يدل على انخفاض البروتين الاستقرار . استقرار بقية 12 المسوخ قد تحسنت . الاستقرار من المسوخ 1 و 8 و 12 زيادة كبيرة .
ويبين الشكل 2 ذوبان المنحنيات في عدة عينات نموذجية ، مما يدل على أن بعض البروتينات قد واحدة من التحولات الحرارية ( WT البروتينات مع المسوخ 7 و 8 ) ، في حين أن غيرها من البروتينات ( المسوخ 1 و 14 ) تظهر بوضوح اثنين من التحولات الحرارية ، أي اثنين من انعطافات في ذوبان المنحنيات . البيانات التي تم الحصول عليها من supr-dsf يمكن أن تساعد الباحثين على فرز المرشحين المحتملين لمزيد من الدراسة .
القوات المسلحة البوروندية المنطقة بدقة تحليل الأجسام المضادة وحيدة النسيلة
الفرق في مسح البيانات مضان من nistmab ( نيست الأجسام المضادة وحيدة النسيلة القياسية ) تم الحصول عليها باستخدام supr-dsf ومقارنة النتائج مع تلك التي تم الحصول عليها بواسطة مسعر المسح التبايني ( دسك ) . إن supr-dsf يمكن تحليل جميع المجالات الثلاثة nistmab : الفصل 2 ( 69 درجة مئوية ) ، الفصل 3 ( 83 درجة مئوية ) ، القوات المسلحة البوروندية المنطقة ( 94 درجة مئوية ) . أعلى درجة حرارة المسح من supr-dsf 105 درجة مئوية ، والتي يمكن قياس درجة حرارة انصهار القوات المسلحة البوروندية مستقرة بشكل غير طبيعي في المنطقة ، في حين أن غيرها من منصات DSF مسح درجة الحرارة القصوى فقط 95 درجة مئوية .
إن supr-dsf تطبيع البيانات مقارنة مع دسك النتائج . كما هو مبين في الشكل 5 ( ب ) ، ثلاث قمم مباراة بعضها البعض ، مما يدل على اتساق جيد بين اثنين من التقنيات ، واستخدام supr-dsf يمكن بسهولة الحصول على معلومات عالية الجودة من البروتين الاستقرار .
حالة نموذجية من التطبيق : الإسراع في اختيار المواد المساعدة وصياغة تراستوزوماب
صياغة biotherapeutic المخدرات مثل الأجسام المضادة هي أساس ضمان فعالية وجدوى وسلامة الإنتاج ، كما يحدد ظروف التخزين والنقل . شركات الأدوية في حاجة ماسة إلى تدفق عالية طريقة سريعة وموثوق بها اختيار عدد كبير من الظروف لتحديد أفضل صيغة .
باستخدام supr-dsf ، فحص الباحثون وتحليل استقرار الأجسام المضادة العلاجية تراستوزوماب تحت 96 ظروف مختلفة ، واختبارها في 1.5 ساعة . نتائج الاختبار في اتفاق جيد مع تلك التي تم الحصول عليها بواسطة مسعر المسح التبايني ( دسك ) . إذا كان مختبر متكامل معدات التشغيل الآلي ، يمكن الانتهاء من فحص الآلاف من العينات كل يوم .
من خلال تركيب البيانات باستخدام طريقة المربعات الصغرى ، تونست ، TM ، فان دير فالس enthalpies الاختلاف ( ح ) يمكن تحديدها . الشكل 3 ( أ ، ب ) يظهر منحنى ذوبان وتركيب الرسم البياني من المواد المساعدة التي تدمر / تعزيز الاستقرار ، على التوالي . الشكل 4 ( أ ) يسرد جميع السواغات ( مقارنة مع عينة التحكم ) التي يمكن أن تحسن استقرار الأجسام المضادة .
إن supr-dsf بشكل صحيح يحدد استقرار الهستامين و trehalose السواغات المستخدمة في تراستوزوماب ، كما هو مبين في الشكل 4 ( ب ) ، supr-dsf البيانات ممتازة الموثوقية والاتساق ، مع توفير تدفق عالية بشكل مدهش . . . . . . .
المعلمات ملزمة تم الحصول عليها من خلال تدفق عالية مضان المسح التبايني
ملزمة التحليل هو مجال رئيسي في البحث والتطوير في مجال المخدرات . خصائص التفاعل و دينار كويتي القيم ( ثوابت تفكك التوازن ، تقارب بين الجزيئات ) هي الحاسمة في اختيار المرشحين .
من خلال تحليل التفاعل الجزيئي supr-dsf ، لا تتأثر بعوامل مثل تأثير السطح ، كتلة نقل أو الانكسار من العازلة ، وما إلى ذلك ، يمكن أن توفر تدفق عالية ، لا تحتاج إلى علامة قياس أكثر ملزمة التركيز .
من خلال الكشف عن استقرار البروتين يجند المجمعات ، خصوصية ملزمة يمكن تحديدها . دينار كويتي يمكن حسابها عن طريق تغيير الأطياف الانبعاثات مضان و العلاقة الوظيفية ليجند التركيز . حتى بالنسبة ضعيفة جدا ملزمة الجزيئات ، والتغيرات في الاستقرار الناجم عن ملزمة يمكن الكشف عنها من قبل supr-dsf . . . . . . .
باستخدام معيار 384 microplate ، والاستقرار من عدة آلاف من العينات التي يمكن فرزها في يوم واحد ، مما يؤكد حالة ملزمة .
إن supr-dsf كان يستخدم لدراسة التفاعل بين الإنسان ( يجند tfmsa الكربونيك أنا ) و ذوبان منحنى anhydrase الكربونية مع تركيز tfmsa كما هو مبين في الشكل 6 .
الشكل 7 يبين العلاقة بين TM قيمة حقوق anhydrase الكربونية أنا و tfmsa التركيز .
وقد ثبت أن supr-dsf يمكن استخدامها بوصفها أداة الفحص المسبق أو التحقق من يغاندس ملزمة ، ولها حساسية عالية .
بديهية وموجزة البرمجيات
supr-dsf البرمجيات يوفر بديهية وموجزة ، ذكي ، وكفاءة عالية التصميم التجريبي وتحليل البيانات وظيفة ، والتي لا يمكن إلا أن تسمح للمبتدئين تبدأ بسرعة ، ولكن أيضا يمكن أن توفر للمستخدمين ذوي الخبرة من ذوي الخبرة مع مجموعة متنوعة من خيارات متقدمة .
حول ProteinStable
