floo-8 صباحا ، خلية مسبار فلوريسنت permeant الكالسيوم

floo-8 صباحا ، خلية مسبار فلوريسنت permeant الكالسيوم

ملخص المنتج

Fluo-8（Fluo-2 Medium Affinity）， هو ألمع مسبار فلوريسنت CA2 + متحمس الطول الموجي للضوء المرئي في الوقت الحاضر ، كثافة مضان هو مرتين أقوى من floo-4 وأربع مرات أقوى من floo-3 . . . . . . . fluo-8 معتدلة CA2 + تقارب ، تقريبا قريبة من Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM）， استخدام ما يقرب من نفس floo-3 و floo-4 . . . . . . . إن fluo-8 ليس فقط الحفاظ على الخصائص الطيفية من fluo-3 و fluo-4 مريحة ، ولكن أيضا تحسين قدرة التحميل CA2 + استجابة الخلايا . على عكس fluo-3 ، fluo-4 يتطلب حضن في 37 درجة مئوية ، مما يجعلها أكثر ملاءمة HTS الفرز الفائق الإنتاجية التجارب . floo-8 يستخدم على نطاق واسع ، وهو متوافق مع العديد من خطوط الخلايا المستهدفة والعينات لا تتداخل مع يغاندس أو الأهداف نفسها .

floo-8 يمكن الكشف عن التغيرات في مستوى الكالسيوم داخل الخلايا بواسطة ليزر متحد البؤر المسح المجهر ، التدفق الخلوي floo-8 ، أنا هو مشتق من floo-8 أسيتيل استر الميثيل ، مع نفاذية غشاء الخلية ، تحتاج فقط إلى ثقافة بسيطة ، يمكن أن تدخل الخلية بسهولة . مرة واحدة في الخلية ، يتم قص من قبل lactonase لتشكيل floo-8 دون نفاذية الأغشية ، وبالتالي البقاء في الخلية من أجل ممارسة المقابلة وظيفة فسيولوجية .

هذا المنتج هو في شكل مسحوق مجفف بالتجميد 50ug حزمة صغيرة ، عندما تستخدم في الكشف عن مستوى الكالسيوم داخل الخلايا ، تركيز 1-5um الموصى بها .

floo-8 صباحا ، خلية مسبار فلوريسنت permeant الكالسيوم

الخصائص الأساسية

مرادف: فلو-8 ، AM

الصيغة الجزيئية:ج50H50N2O23

الوزن الجزيئي: 1046.9316

قابلية الذوبان: قابل للذوبان في DMSO ( 1-5 ملم )

سابق / إم: 490 / 514nm ( CA2 + ملزمة ) ؛

ظروف التخزينيوضع في - 20 ℃ لمدة سنة واحدة .

floo-8 صباحا ، خلية مسبار فلوريسنت permeant الكالسيوم

طريقة الاستخدام

إعداد الكواشف

1 ) إعداد pluronic f-127 أم الخمور : 100 ملغ من pluronic f-127 مسحوق ( المادة رقم : القط رقم fs0432 ) إضافة 500ul DMSO لإعداد 20 ٪ ( ث / ت ) أم الخمور . الحل يجب أن تكون ساخنة في 40-50 ℃ لمدة 20-30min . الحل يجب أن تبقى في درجة حرارة الغرفة دون التبريد . إذا تبلور هطول الأمطار ، يمكن إعادة تسخين حل ، لا تؤثر على استخدام .

2）HHBS BUFFER(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer,pH7.3) الفسيولوجية الأخرى العازلة

ب خطوات التشغيل

1 ) حل floo-8 مع اللامائية DMSO ، وأنا على استعداد في 1-5mm تخزين السائل ، أو إعداد floo-8 ، أنا تخزين السائل في درجة حرارة الغرفة إلى درجة حرارة الغرفة . ( على سبيل المثال ، إذا كانت الأم الخمور 4mm ، إضافة 11.9ul DMSO اللامائية في 50ugfloo-8 صباحا ) .

2 ) تمييع hhbs أو غيرها من السوائل العازلة الفسيولوجية floo-8 صباحا + DMSO الحل 1-10um ، إضافة 20 ٪ pluronic f-127 الحل في وقت مبكر ، وجعل التركيز النهائي 0.02 في المائة .

[ ملاحظة ( 1 ) ] : floo-8 ، أنا ينطبق على معظم الخلايا في تركيز التحميل الموصى به هو 4-5um ، واستخدام محددة التركيز يجب أن يكون الأمثل وفقا لمتطلبات التجربة . من أجل تجنب السمية الناجمة عن الإفراط في التحميل ، فمن المستحسن استخدام زوي انخفاض تركيز التحقيق على أساس النتائج التي تم الحصول عليها .

[ ملاحظة ( 2 ) ] : floo-8 ، أنا سائل العمل يجب أن تستخدم الآن لتجنب تكرار التجميد .

[ ملاحظة ( 3 ) ] : pluronic f-127 يمنع floo-8 ، أنا من بلمرة في الحل و يحفز على دخول الخلية بشكل أفضل . ومع ذلك ، يمكن أن تقلل من استقرار f-127 pluronic floo-8 صباحا ، لذلك فمن المستحسن أن نضيف فقط عند إعداد حل العمل ، وليس على المدى الطويل تخزين السائل .

( 3 ) [ اختياري ] إذا كانت الخلايا تحتوي على العضوية أنيون الناقل ، propenecid ( 1-2.5mm ) أو ( sulfopyrazone 0.1-0.25mm ) قد تحتاج إلى إضافة إلى خلية متوسطة للحد من تسرب deasterification التحقيق .

[ ملاحظة ( 1 ) ] : propylsulfonate سو أو sulfopyrone تخزين السائل هو قلوي إلى حد ما ، لذلك تحتاج إلى تعديل الرقم الهيدروجيني بعد إضافة متوسطة .

4 ) سوف تكون مستعدة floo-8 ، صباحا السائل العامل إضافة إلى الخلية ، إضافة كمية من الخلايا التي تغطيها . احتضان في 37 ℃ أو في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-60 دقيقة .

[ ملاحظة ( 1 ) ] : فيما يتعلق وقت الحضانة ، إذا كان أول سي لا يمكن التأكد من التجربة ، فمن المستحسن أن تفقس لمدة 30 دقيقة لمعرفة تأثير مضان . إذا كانت الخلايا تموت أكثر ، وتقصير الوقت بشكل صحيح . إذا كانت كثافة مضان ضعيفة جدا ، إطالة الوقت بشكل صحيح .

[ ملاحظة ( 2 ) ] : انخفاض درجة حرارة التحميل من التحقيق قد يقلل من حجم الخلية من التحقيق .

5 ) تمتص السائل العامل الصباغة واستبدالها مع hhbs أو غيرها من مخازن الفسيولوجية ( إذا لزم الأمر ، مع مخازن تحتوي على مثبطات النقل مثل 2.5mm حمض السلفونيك البروبيونيك ) لإزالة الزائدة التحقيق .

6 ) قياس الطول الموجي مع السابقين / م = 490 / 520 نانومتر باستخدام أدوات مناسبة مثل ليزر متحد البؤر ، التدفق الخلوي ، fluorescenceenzyme العلامات .

[ ملاحظة ( 1 ) ] : floo-8 ، أنا بعد دخول الخلية ، من خلال تدهور استريز على شكل floo-8 ، وليس في شكل المانحة ملزمة في السيتوبلازم . ولذلك ، فإن الخلايا الحية محملة صبغة لا يمكن أن تكون ثابتة ، ثم CA2 + مستوى الاختبار .

الاحتياطات

1 ) الأصباغ الفلورية هي موحدة في مسألة التبريد ، يرجى الحرص على تجنب الضوء قدر الإمكان ، من أجل إبطاء التبريد الفلورية .

2 ) acetoxymethyl استر ( أنا ) من السهل امتصاص الرطوبة ، بعد إزالة الثلاجة ، يرجى وضعها في بيئة جافة إلى درجة حرارة الغرفة بعد فتح . بسبب كمية صغيرة من كاشف ، يرجى طرد لفترة قصيرة قبل فتح لضمان أن مسحوق يقع في قاع الأنبوب .

3 ) floo-8 ، أنا في 4 درجة مئوية ، حمام الثلج ، وغيرها من درجات الحرارة المنخفضة سوف تجمد و العصا إلى أسفل أنبوب الطرد المركزي ، أو جدار الأنبوب أو أنبوب غطاء ، يمكن أن تكون درجة الحرارة في 20-25 درجة مئوية لفترة من الوقت حتى يذوب تماما بعد الاستخدام .

4 ) floo-8 ، أنا أول استخدام ، فمن المستحسن أن تخزين السائل هو الآن في الاستخدام الحالي ، وتعبئتها في جرعة واحدة ، بدقة ≤ - 20 ℃ ختم والتجفيف والتجميد ، لمنع الرطوبة . من أجل ضمان نتائج جيدة ، ينبغي أن تستخدم في وقت قصير .

5 ) من أجل سلامتك وصحتك ، يرجى ارتداء ملابس المختبر وارتداء القفازات القابل للتصرف للتشغيل .