DH5 أ λ بير الخلايا المستقبلة *

DH5 أ λ بير الخلايا المستقبلة *

λ بير كيميكالي خلية منافسة
رقم المنتج : g6018-10 ( 10 100ul ) ، g6018-100 ( 100 100ul )
المواصفات / مقدمة : g6018-10 ( 10 فروع 100ul ) ، g6018-100 ( 100 فروع 100ul )

وراثى

F-φ80 لاك ZدلتاM15دلتا(lacZYA- -arg F) لامبير U169 endA1

recAl hsdR17(rk-, mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

وصف موجز

إن clbio dh5a pir السلالة نشأت من dh5a و lampir عرض في الجينوم من الإشريكية القولونية dh5a ، وهذا هو ، dh5a pir . هذه السلالة يمكن أن تعبر عن بير البروتين ، بحيث تحتوي على البلازميد r6kg أوري replicon يمكن تكرارها عادة . حذف endonuclease ( اندا ) من dh5a في بير سلالة يمكن أن تزيد من إنتاجية ونوعية بلازميد الحمض النووي . recombinase عيب ( ريكا ) يمكن أن تقلل من احتمال إعادة التركيب مثلي ، وضمان الاستقرار في الحمض النووي الإدراج . وجود laczom15 يسمح dh5a لاستخدامها في فحص البقع الزرقاء والبيضاء . ومع ذلك ، فإن معدل النمو من سلالة dh5a في بير كان بطيئا نسبيا ، وينبغي أن تطيل فترة النمو في لوحة الثقافة أو السائل يهز البكتيريا . إن clbio dh5a λ بير الخلايا المستشعرة كانت ملفقة من قبل عملية خاصة ، و puc19 البلازميد المستخدمة للكشف عن كفاءة التحويل > 1x109 كفو / ميكروغرام من الحمض النووي .

تعليمات التشغيل :

1 . dh5a λ بير الخلايا المستشعرة من - 80 درجة مئوية ، تضاف بسرعة إلى الجليد بعد 5 دقائق من البكتيريا تذوب ، إضافة الحمض النووي المستهدف ( بلازميد أو ربط المنتج ) و ضرب الجيش الشعبي أنبوب أسفل مزيج موحد ، والجليد لمدة 25 دقيقة .

حمام الماء الساخن هو متحمس لمدة 45 ثانية و سرعان ما يعود إلى الجليد . عندما تهتز ، كفاءة التحويل سوف تنخفض .

3 . إضافة 700 μ 1 العقيم رطل متوسطة دون المضادات الحيوية في أنبوب الطرد المركزي ، ثم يخلط جيدا ، 37 درجة مئوية و 200 دورة في الدقيقة لمدة 70 دقيقة .

4 - 5000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 1 دقيقة لجمع البكتيريا ، وترك حوالي 100 ميكرولتر من طاف ضربة خفيفة الوزن كتلة من البكتيريا و تطبيقها على المقابلة رطل متوسطة الثقافة تحتوي على المضادات الحيوية .

5 - وضع لوحة رأسا على عقب في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 18 ساعة على الأقل .

الاحتياطاتس

1 - الخلايا المستقبلةاقتراحتذوب ببطء في الجليد . إضافة الحمض النووي المستهدف في الجليد في غضون 8 دقائق ، لا تضع في الجليد لفترة طويلة جدا ، تخزين طويلة يمكن أن تقلل من كفاءة التحويل .

سلالة من سلالة dh5a λ بير ينمو ببطء ، وينبغي أن تطيل فترة النمو ( 37 درجة مئوية ، أكثر من 18 ساعة ) عندما مثقف على لوحة مسطحة أو السائل يهز البكتيريا .

3 - تحويل تركيزات عالية من البلازميد أو كفاءة عالية ربط المنتجات يمكن أن تقلل من كمية البكتيريا المستخدمة في الطلاء .

DH5 أ λ بير الخلايا المستقبلة *