الكواشف البيولوجية

واحدالميكوبلازما كشف عدةميزات المنتج :

( 1 ) فقط 1 ميكرولتر من الخلايا المستزرعة طاف و حمام الماء وعاء ، لا تحتاج إلى استخراج الحمض النووي الجينوم ، لا تحتاج إلى مضان المجهر ، بكر ، الكهربي ، هلام التصوير ، bioluminescence للكشف عن المعدات التجريبية المعقدة ؛

( 2 ) بسيطة وسريعة وحساسة طريقة الكشف عن الميكوبلازما الخلوية التي تحتاج فقط 1 ساعة .

( 3 ) كامل التجربة يمكن أن تكتمل في خطوة واحدة فقط ، و نتيجة التجربة يمكن تمييزها بسهولة بالعين المجردة حسب تغير لون رد فعل السائل .

( 4 ) حساسية أعلى بكثير من بكر ، ويمكن الكشف عن أنواع كثيرة من الميكوبلازما المشتركة في خلية ثقافة ( الميكوبلازما hyopneumoniae ، الميكوبلازما اورئاپلاسما اورئاليتيکوم اورئاليتيکوم اورئاپلاسما اورئاليتيکوم اورئاليتيکوم , ليش cholesterium ، التخمير الميكوبلازما ، الميكوبلازما اللعابية ، الإنسان الميكوبلازما ، الميكوبلازما الكمثرى ، تمثل 98 في

ثانياالميكوبلازما كشف عدةتكوين

الخطوات التجريبية :

( 1 ) إعداد خلية ثقافة طاف

عندما الخلايا المستزرعة لمدة 2-3 أيام و الذوبان هو أفضل من 80 ٪ ، حجم الخلايا المستزرعة متوسطة أكثر من 200 ميكرولتر ، الطرد المركزي لمدة 5 دقائق حسب 200 جرام ، ثم طاف يمكن الكشف عنها بعد ذلك ( لا تأخذ 50 ميكرولتر الثقافة المتوسطة في الجزء السفلي من الأنبوب و الخلية هطول ) .

( 2 ) إعداد نظام رد الفعل ( أولا ، الحل ، الحل ب ، إيجابية السيطرة ، شمع البارافين النفط ذوبان الجليد على الفور بعد وضعها على الجليد )

إزالة الحل من - 20 ℃ حتى يذوب الخليط رأسا على عقب . رد فعل النظام على النحو التالي تم إعداده في microcentrifugal أنبوب وفقا لعدد من عينات من الخلايا التي سيتم اختبارها .

ملاحظة : ن + 3 أنظمة رد الفعل المذكورة أعلاه ينبغي أن تكون على النحو الموصى به من أجل الكشف عن ن عينات في كل مرة واحدة سلبية ، واحدة إيجابية و نقل الخطأ موجود في ماصة .

استخدام مذبذب لخلط بلطف ، ثم معبأة في أنبوب PCR ( 200 ميكرولتر حجم الموصى بها ) ، كل أنبوب يحتوي على 24 ميكرولتر من رد فعل السائل بعد الاختلاط .

( 3 ) أخذ العينات ( من المهم جدا أن تبقى عملية أخذ العينات على الجليد طوال الوقت ، وخاصة إذا كان النفط البارافين مغطى فوق رد فعل السائل يحتاج precooling على الجليد )

العينة : 1 μ ل أضيفت إلى رد فعل أنبوب الطرد المركزي طاف من الثقافة المتوسطة ، ثم تم استخدام هذا السائل إضافة بندقية للتحرك صعودا وهبوطا وضرب برفق 5 مرات .

السيطرة السلبية : لا إضافة أي عينات أو إضافة 1 ميكرولتر من الماء المعقم .

السيطرة الإيجابية : إضافة 1 ميكرولتر إيجابية السيطرة على عينة ، ثم استخدام هذا السائل إضافة بندقية تتحرك صعودا وهبوطا ضربة بلطف 5 مرات .

ثم ، 25 ميكرولتر من زيت البارافين تضاف بلطف فوق كل رد فعل أنبوب الحل ( رد فعل في حمام الماء وعاء ) لمنع تبخر السائل من التسبب في نتائج غير دقيقة . عند إضافة زيت البارافين ، يجب الحرص على تغيير بندقية الرأس في كل مرة ، ومنع التلوث بين العينات . إذا كان رد الفعل هو رد فعل في الاسترداد ، لا تحتاج إلى إضافة زيت البارافين .

رد

درجة حرارة حمام الماء وعاء أو PCR الصك هو 61 ℃ ثم يوضع في أنبوب رد فعل ، احتضان لمدة 60 دقيقة .

ملاحظات :

1 ، حمام الماء وعاء درجة الحرارة الفعلية قد تكون درجة الحرارة الإعداد الانحراف ، فمن المستحسن استخدام ميزان الحرارة المعايرة . في الواقع ، 59-63 ℃ فعل يمكن القيام به ، ولكن سوف تؤثر على حساسية الكشف .

2رد فعل المنتج لا يمكن فتح الغطاء ، وإلا فإن إنتاج الهباء الجوي سوف يؤدي إلى الكشف عن إيجابية كاذبة في وقت لاحق . واقترح أن يكون رد فعل أنبوب ملفوفة في كيس من البلاستيك أو القفازات ، والتخلص منها في سلة المهملات الخاصة ، وتنظيفها في الوقت المناسب .

3 ، لا ينصح باستخدام فرن أو حمام معدني التدفئة ؛

( 5 ) الحكم على النتائج

بعد 60 دقيقة في 61 ℃ رد فعل ، رد فعل أنبوب يؤخذ على الفور ووضعها في درجة حرارة الغرفة . مراقبة ردود الفعل في ضوء جيد ( ورقة بيضاء هو الموصى به كخلفية ) . إذا كان رد فعل السائل لا يزال الأزرق البنفسجي ، ثم الحكم هو سلبي . إذا كان رد فعل السائل هو السماء الزرقاء ، ثم الحكم هو إيجابي .

رابعاً - الوثائق ذات الصلة

1، ShiyuHe، YanzhiHuang، YanlingZhao. AReverseTranscription-PolymeraseSpiralReaction(RT-PSR)-BasedRapidCoxsackievirusA16DetectionMethodandItsApplicationintheClinicalDiagnosisofHand,Foot,andMouthDisease. الحدود في علم الأحياء الدقيقة.2020؛ 12(11):734-743.

2، أودري جان، فلورنسا تاردي، عمران ألاتيف. تقييم تلوث الميكوبلازما لثقافات الخلايا بواسطة PCRus من قبل زوج أولي عالمي يستهدف 1.5 كيلوبايت من جينات 16SrRNA. PLOSONE.2017؛ 12(2):e0172358.

3、زوهرسوهيلي، محمد سليماني، كيفان مجيدزاده أرديبلي. الكشف عن تلوث الميكوبلازما لثقافة الخلايا بواسطة طريقة التضخيم Isothermal المتوسطة في الحلقة. CellJ.2019 ؛ 21(1):43-48.

4، XinXu، XueyuWang، WenHu. تحسين البوليمراز الترابط المتقاطع ردة فعل دوامة اختبار التشخيص السريع لفيروس الكلب البارفوفيروس 2 العدوى. الحدود في العلوم البيطرية.2020؛ 7(57):1629-1636.