وفقا للاحصاءات ، بالقرب من80%المواد العضوية وغير العضوية يمكن فصلها عن طريق كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء .C18العمود الكروماتوجرافى هو نوع من العمود الكروماتوجرافى المستخدمة عادة في عالية الأداء اللوني السائل ) . تحتC18اختيار وصيانة وصيانة العمود الكروماتوجرافى أدخلت .

واحدC18اختيار العمود

C18الاعتبارات الرئيسية في اختيار2تأثير التعبئة والتغليف والمواصفات على العمود الكروماتوجرافى العمود .

الخصائص الفيزيائية العمود الحشو لها تأثير كبير على السلوك الكروماتوغرافي من الحشو . أهم الخصائص الفيزيائية من الحشو هي كما يلي : حجم الجسيمات ، حجم المسام ، مرحلة الربط الكيمياء ، محتوى الكربون ، امين العلاج .

(1)حجم الجسيمات هو حجم الجسيمات القطر من العمود حشو . في الواقع ، حجم الجسيمات على العمود هو متوسط . مثل حجم الجسيمات "5مم" ليس كل الجسيمات قطرها في العمود5ممفي الواقع ، هناك توزيع حجم الجسيمات . هذا النوع من التوزيع يلعب دورا هاما في الضغط مرة أخرى و العمود الكفاءة . عموما ، أصغر متوسط حجم الجسيمات ، أصغر توزيع حجم الجسيمات ، وارتفاع كفاءة العمود ، وارتفاع الضغط العكسي . حاليًاC18حجم العمود حشو4و10ممبين .

(2)مسام القطر يشير إلى الفجوة بين حشو الجسيمات . عموما يعني متوسط حجم المسام من حشو . بعد التعبئة والتغليف كروية ، يعني توزيع حجم المسام هو أضيق ، العمود السرير هيكل موحد ، العمود كفاءة عالية ، واستنساخ جيدة . غير متبلور التعبئة والتغليف لديها مجموعة واسعة من متوسط حجم المسام ، غير موحدة العمود هيكل السرير ، غير موحدة السرعة الخطية من مرحلة الجوالة ، وتوسيع نطاق الطيف . متوسط حجم المسام له تأثير كبير على فصل الجزيئات ، والتي قد يكون لها تأثير الاستبعاد الجزيئي ، أو امتصاص تأثير على كمية الانتعاش والدقة . ولذلك ، ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار عند استخدام عكس المرحلة اللوني لفصل عينة من البروتين أو ببتيد(مثل30 نانومتر)عكس العمود التعبئة . حجم المسام يمكن أن تؤخذ على أنها معلمة من هلام السيليكا المسامية ، والتي يمكن استخدامها كمرجع في فصل وتحليل الجزيئات الكبيرة . . .

(3)مرحلة الربط الكيميائي الحشو تلعب دورا هاما في هبلك . فإنه يمكن ربط المجموعات العضوية مع أكبر قطبية ، واعتماد المذيبات مع أصغر قطبية مثل مرحلة الجوالة . كما يمكن ربط المجموعات العضوية مع قطبية أقل ، واختيار المذيبات مع قطبية أكبر مثل المرحلة المحمول .C18العمود الكروماتوجرافى هو نوع من silylated المستعبدين(سي-أو-سي-سي)في الوقت الحاضر ، هذا النوع من رد الفعل بوند هو الأكثر استخداما على نطاق واسع . على سبيل المثال ، octadecyl trichlorosilane و مسامية السليكا هلامM-بوراسيل-C18ألكيل مرحلة الربط الكيميائيM-بونداباك-C18منتدى

(4)محتوى الكربون هو محتوى الكربون في حشو . تقنية القياس التقليدية هو تسخين حشو حتى كسر السندات الهيدروكربونية ، ثم حساب محتوى الكربون عن طريق قياس الوزن المفقود أو ثاني أكسيد الكربون . يمكن زيادة محتوى الكربون عن طريق زيادة طول السندات الكربون أو زيادة كثافة السندات . مع زيادة محتوى الكربون ، الإبقاء على قيمة العمود هو زيادة . السلوك الكروماتوغرافي المستعبدين المرحلة يعتمد على كثافة السندات ، ولكن أيضا على كثافة هلام السيليكا و المساحة من حشو . إذا كان استخدام2الإبقاء على سلوك ثلاثة أنواع من التعبئة والتغليف مع كثافة مختلفة و نفس محتوى الكربون سوف تختلف بشكل ملحوظ . ولذلك ، فإنه لا يكفي التنبؤ الكروماتوغرافي السلوك فقط مع محتوى الكربون .

(5) C18silylation كاشف هو أكبر من2 نانومترالجزيئات ، وبالتالي ، سوف تتفاعل معC18إن silylation الكواشف تنتج الفراغية الشديدة المقاومة . النتائج التجريبية تبين أن هناك الكثير من بقايا silanol مجموعات على سطح هلام السيليكا التي لا تتفاعل مع silylation الكواشف . هذه المجموعات القطبية silanol تتفاعل مع المركبات الأساسية في بعض الظروف الكروماتوغرافي ، مما يؤدي إلى شكل ذروة الذيل ، والتي يمكن أن تؤثر على نتائج التحليل الكمي . هذه المشاكل يمكن التغلب عليها إلى حد ما من خلال امين العلاج . امين هو رد فعل مستقل في مرحلة الربط للحد من silanol مجموعات على سطح هلام السيليكا . امين العلاج باستخدام جزيئات صغيرة(مثل trimethylsilaneوالفضاء الفراغية المقاومة أقل بكثير منC18مجموعة . معظم مراحل ثابتة فقط30%ربط الكلمات التي يمكن تغطيتها . وأفيد أن أقصى قدر من التغطية يمكن أن يتحقق من خلال بعض الكواشف الكيميائية النشطة للغاية و رد فعل خاص الظروف .5%فهم جيد من الخصائص الفيزيائية السليكا هلام المستعبدين المرحلة سوف تساعد على اختيار العمود الكروماتوغرافي المناسب في رد فعل عالية الأداء اللوني السائل ) . نظرة سطحيةC18على الرغم من أن المجموعات الوظيفية الكيميائية هي نفسها ، في الواقعC18أداء العمود قد تختلف اختلافا كبيرا ، مما يؤدي إلى فصل مختلف النتائج .

اختيار العمود الحشو يؤثر على إمكانية فصل الكروماتوغرافي ، واختيار العمود المواصفات يؤثر بشكل مباشر على تحليل السرعة ، فصل القدرة ، والقدرة على الكشف عن استهلاك المذيبات في كل تحليل . العمود المواصفات تشمل جانبين : القطر الداخلي وطول العمود . القطر الداخلي من العمود2و6 مم،إعداد نوع20 مم، يمكن الوصول إليها من قبل شخص كبير80 ممطول العمود ، نوع تحليلي5و30 سمإعداد نوع15و50 سموعموما ، فإن قطر العمود لا يؤثر على العلاقة بين درجة الانفصال و تحليل الوقت . اليوم ، وقد وضعت تقنيات العمود إلى أعمدة بأقطار مختلفة قادرة على أداء نفس الأداء . أعمدة بأقطار مختلفة لها خصائص مختلفة ، نفس التحليل الوقت والعزلة ، أعمدة بأقطار أكبر من أقطار أصغر الأعمدة تستهلك المزيد من المذيبات . من ناحية أخرى ، أصغر قطرها الداخلي الأعمدة تتطلب كميات أقل من العينات لنفس الكشف عن الإشارات . ولذلك ، في حجم العينة هناك * ، يمكن استخدام أعمدة صغيرة قطرها الداخلي . على الرغم من أن زيادة طول العمود يمكن تحسين تأثير الانفصال ، ولكن أيضا زيادة المقاومة ، يجب أن تزيد من مدخل الضغط . العمود الضغط هو العقبة الرئيسية التي تؤثر على زيادة فصل وتقليل وقت التحليل في نفس الوقت . درجة الانفصال ، تحليل الوقت و ضغط العمود كلها مقيدة بعضها البعض .3ثلاثة عوامل تم اختيارها . عمود طويل يمكن أن توفر درجة عالية من الانفصال ، عمود قصير يمكن أن توفر سرعة الفصل ، ونحن يمكن أن تختار مناسبة العمود الكروماتوجرافى حسب حالة العينة .

C18المبدأ الأساسي في اختيار العمودس

(1)التعبئة والتغليف مختومة من قبل امين العلاج يمكن أن تمنع سحب المركبات القلوية .

(2)اختيار عمود مع ارتفاع محتوى الكربون ، وزيادة الاحتفاظ القيمة .

(3)اختيار أعمدة أقصر(مثل15 سمو7.5 سم)منتدى

(4)اختيار حجم الجسيمات الصغيرة حشو .

(5)كبيرة قطرها التعبئة والتغليف العمود هو اختيار المكونات مع ارتفاع الوزن الجزيئي .

ثانياC18الاستخدام اليومي وصيانة الأعمدة

إذا كان العمود الكروماتوجرافى المستخدمة بشكل صحيح أو لا يؤثر بشكل مباشر على الحياة اليومية من العمود الكروماتوجرافى . عرض أدناهC18وينبغي إيلاء الاهتمام إلى العمود في الاستخدام اليومي .

(1)بعد التحميل والتفريغ ، واستبدال العمل ينبغي أن تكون خفيفة الوزن ، وتشديد المفاصل يجب أن تكون معتدلة . اهتزاز ميكانيكي قوي يجب منعه لتجنب الفجوة في العمود السرير .

(2)إذا كانت الأداة المستخدمة في التحليل الروتيني ، عينة من نوع محدود ، ولكن عدد كبير من التحليل ، ثم كل نوع من التحليل الروتيني1هذا يساعد على إطالة عمر العمود .

(3)إذا كان العمود جهاز التحكم في درجة الحرارة المستخدمة ، ينبغي إيلاء الاهتمام إلى إدخال مرحلة المحمول قبل ارتفاع درجة الحرارة .

(4)قبل استخدام المرحلة المحمول ، degasification ينبغي القيام به لتجنب انخفاض كفاءة العمود والتأثير على الكشف . عينة الحل يحتاج إلى المعالجة المناسبة والترشيح للحد من التلوث و انسداد العمود .

(5)عند تغيير نوع المرحلة المحمول ، ينبغي إيلاء الاهتمام إلى الذوبان في المذيبات ، ومنع التمليح .

(6)ضغط التشغيل الفعلي من العمود يجب أن يكون أقل من الحد الأقصى من الضغط عند التعبئة ، ويفضل أن يكون ذلك أقل من نصف الحد الأقصى من الضغط . عموما لا تتجاوز593.965 20و29 419.95 كيلو باساتحت ضغط منخفض(ص14 709.975 كيلو باسا)العمود يمكن الحفاظ على كفاءة عالية لفترة طويلة .

(7) C18غير القطبية المستعبدين العمود الكروماتوجرافىالـ pHالقيم يجب أن تكون تحت رقابة صارمة2و7في حالة تلف العمود .

(8)بعد الانتهاء من فصل العمل التحليلي ، لا ينبغي أن تتوقف على الفور ، تحتاج إلى شطف نظام التحليل الكروماتوغرافي في الوقت المناسب .0.5 ساعةإزالة الشوائب في العمود .

(9)إذا كان هناك أملاح في المرحلة المحمول ، يجب أولا تنظيفها بالماء . إذا كان أمين(مثل ثلاثي ميثيل أمين أو tetrabutylamineوإضافة إلى المرحلة المحمول5%الميثانول1 ف - 4شطف حل حامض الفوسفوريك مع المذيبات مختلطة ، لا شطف مع الماء فقط .

(10) C18عموما استخدام الميثانول والمذيبات التخزين لمنع العمود من تكسير وتلف . الماء أو حل العازلة لا يمكن الاحتفاظ بها في مسار تدفق الكروماتوغرافي لفترة طويلة .

(11)اختيار مناسبC18حماية العمود من الشوائب والجسيمات لا رجعة فيه امتصاص المواد . حجم الجسيمات من التعبئة والتغليف في حماية العمود يجب أن تكون متسقة مع حجم الجسيمات من التعبئة والتغليف في تحليل العمود .

(12)العمود لا ينبغي أن تكون طويلة جدا . لا تستخدم على المدى القصيرC18العمود ، شطف مع الميثانول30و60 دقيقة، ثم ختم طرفي العمود . العمود الذي لا يستخدم لفترة طويلة نسبيا ، هو اعتماد طريقة التنظيف العادية ، ختم مرة أخرى ؛ بعد التنظيف ، كلا طرفي العمود على التوالي1حاوية مليئة الميثانول مع قدرة معينة(نهاية واحدة فقطولتكملة تبخر المذيبات في العمود خلال فترة تخزين طويلة .

ثالثاC18صيانة الأعمدة

على الرغم من أن حماية العمود الكروماتوجرافى صارمة في الاستخدام اليومي ، على الرغم من أن العينة و مرحلة الجوالة قبل المعالجة ، ولكن بعد فترة طويلة من الاستخدام ، فإنه لا يزال من الصعب تجنب عمود من التلوث ، وفقدان مرحلة ثابتة ، والتصلب ، عمود السرير الانهيار ، وانخفاض كفاءة العمود ، وهلم جرا . بعض يمكن استعادة بعض الأعمدة من خلال إصلاح .

1 .عمود التلوث تجديد التكنولوجيا

بعد العمود الكروماتوجرافى ملوثة ، يمكن غسلها مع المذيبات المناسبة لجعل العمود تأثير مجدد .C18طريقة غسل العمود التجدد التقليدية هي كما يلي : الميثانولالميثانول/ المياه كل60 ملالعمود الكروماتوجرافى ، ثم الميثانول60 ملبعد التوازن اللوني العمود مختومة ، العمود الكفاءة سوف تعود إلى وضعها الطبيعي . حسب طبيعة عمود التلوث(مثل التلوث العضوي ، والملح ، الخ .واعتمد0.05 مول / لتر H2SO4و0.5 مول / لتر H3PO4أو .0.1 مول / لتر EDTAالملح ، ثم شطف بالماء ، وأخيرا استخدام الميثانول العمود الكروماتوجرافى التوازن بعد الختم . تلوث خطيرC18المياه ، والميثانول ، الكلوروفورم ، الإيثان يمكن أن تستخدم شطف بدوره ، ثم شطف مرة أخرى في تسلسل .1المذيبات المستخدمة في كل مرة60 ملوأخيرا ، تم استخدام الميثانول العمود الكروماتوجرافى التوازن مختومة .

2 .إصلاح عمود التلوث

عندما عمود التلوث التجديد غير فعالة أو عمود معروف التلوث الخطير ، يمكن حلها عن طريق إصلاح العمود ، ولكن عمق عمود التلوث لا ينبغي أن يتجاوز5 ممالطريقة تتكون من الخطوات التالية : حفر جزء من التلوث مع مجرفة صغيرة خاصة ، خلط نفس المرحلة الثابتة و المرحلة المحمول مع العمود حشو لجعل الطين ، ثم ملء الطين المرحلة الثابتة في الجزء المحفور بعناية .(في محاولة لجعل ملء الخلفية ثابتة قريبة من الأصل ضيقويمكن أن تكون مسطحة . إذا كان حجم المسام من لوحات غربال في كلا طرفي العمود هو نفسه ، إصلاح العمود يمكن أن تتحول رأسا على عقب باستخدام الوقت العادي .

3 .إصلاح انهيار العمود

هناك العديد من أسباب انهيار العمود . عند انهيار ليست خطيرة جدا ، إذا كان حجم المسام من لوحة غربال في كلا طرفي العمود هو نفسه ، العمود يمكن عكس استخدام الوقت العادي ، والأداء يمكن استردادها . عندما تنهار بشدة(5 مم)左右وعندما يستخدم نموذج المنفعة ، إصلاح طريقة عمود التلوث يمكن اعتمادها .