هرمون منبه للخلايا الميلاتونين ( α - مش ) هو المسؤول عن إنتاج الميلاتونين ، الميلاتونين هو جسم الإنسان ضد الأشعة فوق البنفسجية ( الأشعة فوق البنفسجية ) الحماية الطبيعية . تعرض الجلد للأشعة فوق البنفسجية يمكن أن تعزز إنتاج α - مش . ومع ذلك ، قد حفز تخليق الميلاتونين قبل التعرض للأشعة فوق البنفسجية منع سرطان الجلد الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية .

وبالنظر إلى أن الأشكال الطبيعية من α - مش هي غير مستقرة جدا في الجسم الحي أن تدار كعلاج ، واحدة من مختلف النظير هو mt-ii ( الشكل 1 ) ، دوري الببتيد مع مقاومة عالية و فعالية خاصة في تدهور الأنزيمية .

الشكل 1

　　لأن إنتاج mi-ii غالبا ما تحتاج إلى تكبير إلى كجم لتلبية الاحتياجات السريرية ، وتحسين ظروف العملية على نطاق المختبر يجب أن تأخذ في الاعتبار عملية التضخيم .

　　

　　gyros protein التكنولوجيات توفر الببتيد التوليف من مختبر إلى مستوى تجريبي ، مما يساعد على توسيع نطاق العملية من مرحلة التطوير إلى الإنتاج التجاري .

في هذه الورقة ، فإننا سوف مناقشة كيفية تحسين وتوسيع نطاق النهج التلقائي بالكامل التوليف ، أي توليف تسلسل خطي و lactamasation النهائي على الراتنجات الببتيد . في هذا العمل ، على نطاق واسع mt-ii التوليف الأمثل على ثلاث مراحل :

　　1العثور على خطة الحماية المناسبة cyclization الراتنج .

　　2باستخدام purepep chorus لتحسين الظروف الاصطناعية على نطاق صغير و cyclization ، الصك يعمل تلقائيا .

　　3mt-ii تم توليفها من قبل التضخيم على نطاق تجريبي المزج purepep سوناتا + .

　　01البحث عن الحل المناسب لحماية cyclization الراتنج

هيكل mt-ii الانتهاء بعد lactam جسر يتكون بين حمض الأسبارتيك ، ليسين ، وهذه المخلفات تحتاج إلى حماية انتقائية قبل cyclization الراتنج . ولذلك ، فمن المستحسن أن تجد الجانب سلسلة حماية المجموعات التي يمكن أن تكون مصحوبة إزالة للتقليل من صعوبة إزالة الحماية . في المرحلة الأولى من هذه التجربة ، mt-ii تم توليفها من قبل مجموعات مختلفة من الجانب سلسلة حماية المجموعات .

1Asp (ODmab) / Lys (ivDde)

2Asp (O-2-PhiPr) / Lys (Mtt)

3Asp (OAlly) / Lys (Alloc)

إن DMF الحل مع 2 ٪ الهيدرازين ، DCM الحل مع 1 ٪ TFA ، DCM الحل مع البلاديوم ( tetraphenylphosphine ) ( PD ) ( pph3 ) 4 ) و ( phenylsilane phsih ) يمكن إزالتها في وقت واحد وبشكل انتقائي ، على التوالي . نقاء الخام الببتيد النهائي هو مبين في الجدول 1 .

الجدول 1 نقاء mt-ii الخام الببتيد توليفها من قبل مجموعة مختلفة

نقاء الخام الببتيد التي تم الحصول عليها من الجمع بين 2 هو أعلى عند مختلف مخططات الحماية مقارنة . ومع ذلك ، fmoc-asp ( o-2-phepr ) - أوه هي مكلفة نسبيا ، مما يزيد من تكلفة الإنتاج الضخم في وقت لاحق . نقاء الخام الببتيد التي تم الحصول عليها من الجمع بين 1 هو أدنى ، ويرجع ذلك إلى ضعف الحماية من odmab و ivdde تعامل مع 2 ٪ الهيدرازين . وعلاوة على ذلك ، على الرغم من أن الجمع بين 3 يظهر أقل بكثير من نقاء الخام من الجمع بين 2 ، هذا هو أساسا ذات الصلة إلى تشكيل أسباراجين . . . . . . . نقاء الخام الببتيد يمكن أن تحسن بشكل ملحوظ من خلال التقليل من الآثار الجانبية . ولذلك ، آسيا والمحيط الهادئ / ليس ( ألوك ) تم اختيار تجميع mt-ii مونومر الأمثل في الخطوة التالية .

　　02 صغيرة الحجم الأمثل التكثيف الظروف

درسنا أولا مدينة دبي للإنترنت و oxymapure المستخدمة في خطوات اقتران ، دون preactivation ( 4 ) و 5 دقائق preactivation ( 5 ) . كما هو الحال مع الجمع بين 3 ، هذه الأساليب تؤدي إلى انخفاض كبير في نقاء الخام الببتيد بسبب تشكيل أسباراجين ( الجدول 2 ) . ولذلك ، mt-ii تم تصنيعه خطوة بخطوة : الببتيد تم تصنيعه في his-d-phe-arg-trp-lys ( ألوك ) - الراتنج ، آسيا والمحيط الهادئ ( OALL ) التكثيف مع hctu / nmm ( 6 ) أو مدينة دبي للإنترنت / oxymapure ( 7 ) . بعد التكثيف من آسيا والمحيط الهادئ ( OALL ) ، aspartimide المؤلف لم يلاحظ . الخام نقاء هذه الشظايا 88.9 في المائة .

الجدول 2 نقاء mt-ii توليفها تحت ظروف مختلفة

　　توليف الببتيد الخطي

خطي mt-ii تم تصنيعه في رينك أميد mbha الراتنج ( 0.35 ملمول / ز ) على purepep chorus في 100 μ mol الحجم . تورم الراتنج في DMF لمدة 2 × 10 دقائق قبل التوليف . إن deprotection خطوة 2 × 5 دقائق مع 20 ٪ تأكسد DMF الحل ، التكثيف خطوة استمرت 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع 5 ما يعادل ألف ، 5 ما يعادل مدينة دبي للإنترنت و 5 ما يعادل oxymapure DMF الحل ( بدون preactivation-4 أو 5 دقائق preactivation-5 ) . في شظايا 7 و 9 ، آسيا والمحيط الهادئ ( OALL ) و NLE تتكثف في نفس الظروف كما في 5 . عن الشظايا 6 و 8 ، آسيا والمحيط الهادئ ( OALL ) و ( NLE ) مع hctu NMM ( 5 ) و ( 10 ) في DMF التكثيف في درجة حرارة الغرفة . محطة أمين mt-ii أستلة لمدة 30 دقيقة مع 10 ٪ ac2o DMF الحل في درجة حرارة الغرفة .

إزالة انتقائية من آسيا والمحيط الهادئ ليس الجانب سلسلة حماية المجموعات : 0.2 تعادل PD ( pph3 ) 4 من آسيا والمحيط الهادئ ( OALL ) ليس ( ألوك ) كانت تستخدم لإزالة الحماية في درجة حرارة الغرفة لمدة 60 دقيقة في DCM حل 24 تعادل phsih ، ثم غسلها مرتين في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 مرات في DCM و التشكيلة .

　　الراتنج cyclization

في درجة حرارة الغرفة ، الراتنج هو cyclized لمدة 60 دقيقة في DMF الحل مع pyroxime ( 5-equivalent ) و ديبيا ( 5-equivalent ) .

　　قطع

الراتنج هو غسلها ثلاث مرات مع DMF ، DCM غسلها ست مرات ، ثم تجف لمدة 20 دقيقة . خليط من TFA / بتوقيت شرق الولايات المتحدة / H2O / TIS ( 94 : 2.5 : 2.5 : 1 ) لمدة 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، ثم عجل في الأثير .

　　03在 PurePep سوناتا+ 上放大 MT-II 的合成

بعد التحسين على نطاق صغير purepep تشوروس ، الحل 8 هو الحل الأمثل . على نطاق واسع ( 5 ملمول ) توليف mt-ii على purepep سوناتا + .

mt-ii تم تصنيعه على purepep سوناتا + حتى fmoc-asp ( oally ) - ( his-d-phe-arg-trp-lys alloc ) - الراتنج ، ثم إزالة الجانب سلسلة حماية المجموعات بشكل انتقائي بعد ذلك cyclization الراتنج . بعد cyclization ، تسلسل الانتهاء من إضافة ن و ن محطة أستلة . وفقا لهذه الاستراتيجية ، mt-ii مع نقاء 80.2 في المائة تم الحصول عليها ، وهو ما يعادل نقاء 0.1 ملمول الخام الببتيد توليفها على purepep تشوروس . . . . . . .

　　الاستنتاج

● في purepep chorus متعدد القنوات متعددة الوظائف التلقائي جهاز التوليف ، توليف mt-ii الصغيرة الحجم يمكن أن تتحقق ، ومختلف الظروف التوليف يمكن استكشافها والأمثل ، ثم أفضل الظروف التوليف يمكن تطبيقها بنجاح على purepep سوناتا + .

• •الاستفادة من مرونة purepep chorus ، mt-ii هو توليفها تلقائيا من البداية إلى النهاية : من خطي ببتيد انتقائية الجانب سلسلة deprotection والراتنج cyclization ، واختيرت ظروف التكثيف مختلفة في كل خطوة . العملية على purepep chorus يمكن نقلها بسهولة إلى purepep sonata + نفس النتيجة التي تم الحصول عليها .