نقل العينة : تجنب التلوث والخسائر

عندما يتم نقل العينة من العينات إلى حاوية المعالجة ( مثل طبق بتري ، أنابيب الطرد المركزي ) ، يجب أن تكون محمية ضد التلوث الخارجي وفقدان الكائنات الحية الدقيقة المستهدفة :

عمليات البيئة العقيمة :

نقل يجب أن تتم في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية ، وأخذ العينات الرأس ، سطح السفينة و يد المشغل يجب أن تكون معقمة مع 75 ٪ الكحول قبل العملية . استخدام ماصة معقمة ، ماصة بندقية ( رأس البندقية يجب أن تكون معقمة ) لتجنب الاتصال مع المناطق غير معقمة ( مثل الجدار الخارجي من الحاوية ) .

سوء الفهم يشير إلى أنه إذا كان يعمل في بيئة مفتوحة ، مختلطة البكتيريا في الهواء يمكن أن تختلط مع العينات ، مما يؤدي إلى ارتفاع عدد المستعمرات ، وخاصة انخفاض تركيز العينات .

عملية الاستخراج الكامل من عينة السائل :

بعد أخذ العينات ، رئيس العينات ( على الأقل 3 مرات ) يجب غسلها مرارا وتكرارا مع العقيم eluent ( مثل 0.85 ٪ محلول فسيولوجي معقم الفوسفات العازلة برنامج تلفزيوني ) لضمان أن الكائنات الحية الدقيقة المرفقة تماما يدخل eluent . . . . . . . دوامة التذبذب 1 ~ 2 دقيقة ( سرعة دوران 2000 ~ 3000 دورة في الدقيقة ) ، كسر الكتلة الحيوية الميكروبية ، وزيادة تشتت .

عينة تخفيف : ضمان دقة تخفيف متعددة

عندما يكون تركيز الكائنات الحية الدقيقة في العينة عالية ، تحتاج إلى الحصول على مستعمرة العد ( 30 ~ 300cfu / طبق ) عن طريق التدرج تمييع .

تمييع الحاويات : استخدام أنبوب تعقيم تمييع التدرج ( على سبيل المثال ، أنبوب اختبار مع غطاء حلزوني قدرة 10 مل ) ، قبل تحميلها مع 9ml العقيم تمييع ( الخطأ يجب أن يكون أقل من ± 0.1ml ) ؛ علامة واضحة تخفيف مضاعفات ( 10 ⁻ 185 ⁻ 10 ⁻ 178 ، الخ ) ، وتجنب الارتباك .

مواصفات التشغيل :

عند نقل السائل ، تأكد من أن تلميح من أنبوب الشفط / بندقية اتصالات 1 ~ 2 سم تحت مستوى السائل ، وتجنب استنشاق فقاعات الهواء .

عندما تضعف من تركيز عال إلى تركيز منخفض ، كل خطوة يجب أن تكون مختلطة بالتساوي ( فرك أنبوب اختبار 10 ~ 15 مرة باليد ) لضمان تمييع موحدة .

2 ~ 3 عينات موازية مع نفس تخفيف متعددة ، مما يقلل من كلمة خطأ .

الثقافة و العد : التحكم في ظروف الزراعة ، وتوحيد معايير العد

نمو الكائنات الحية الدقيقة تتأثر إلى حد كبير ظروف ثقافة موحدة صارمة المعلمات المطلوبة :

اختيار وإعداد وسائل الإعلام :

متوسطة الثقافة يجب أن تكون معقمة تماما ( 121 ℃ ارتفاع ضغط البخار لمدة 20 دقيقة ) و قيمة الرقم الهيدروجيني يمكن أن تلبي متطلبات ( البكتيريا ph7.2-7.4 والفطريات ph5.6-5.8 ) لتجنب نمو الكائنات الحية الدقيقة بسبب نقص التغذية أو حمض قاعدة غير مريحة .

التحكم في ظروف الزراعة :

درجة الحرارة : 36 ± 1 ℃ البكتيريا والفطريات 28 ± 1 ℃ ، درجة الحرارة اليومية ( خطأ ≤ ± 0.5 ℃ ) ؛

الوقت : 48 ± 2 ساعة من الثقافة البكتيرية ، 72 ± 2 ساعة من الثقافة الفطرية ، لتجنب ثقافة قصيرة جدا مما أدى إلى تسرب أو طويلة جدا مما أدى إلى تداخل المستعمرات .

قواعد العد

عدد المستعمرات في 30 ~ 300cfu لوحة العد ( أقل من 30 نتيجة خطأ كبير ، أعلى من 300 مستعمرة التداخل بسهولة ) ؛

إذا كان الفرق بين عدد من المستعمرات في نفس لوحة تخفيف أكثر من مرة واحدة ( على سبيل المثال ، عدد من المستعمرات في 10 ⁻ 3 ⁻ لوحة تخفيف 20 و 50 ) ، اختبار جديد مطلوب .

عند العد ، الكائنات الحية الدقيقة المستهدفة يجب أن تكون متميزة من البكتيريا الملوثة ( التي يمكن الحكم عليها من خلال شكل مستعمرة وتلطيخ الفحص المجهري ) .

مراقبة الجودة : التحقق من موثوقية العملية برمتها

تجربة مراقبة فارغة :

في كل دفعة من تجهيز العينة ، عينة فارغة ( العينات لا جمع الهواء ، فقط استخدام eluent شطف رأس العينة بعد الثقافة ) و عملية فارغة ( مباشرة eluent العقيم تلقيح الثقافة ) ، إذا كان عدد من المستعمرات فارغة أكثر من 5 كفو ، مشيرا إلى وجود التلوث ، تحتاج إلى إعادة التجربة .

مراقبة إيجابية مع التحقق من معدل الاسترداد :

عينات من البكتيريا القياسية مع تركيزات معروفة ( على سبيل المثال ، كولاي ، المكورات العنقودية الذهبية ) كانت تستخدم عادة لحساب معدل الاسترداد ( معدل الاسترداد يجب أن تكون بين 70 ٪ و 130 ٪ ، أو كفاءة عملية أخذ العينات يجب التحقق منها ) .

معايرة الأجهزة :

أخذ العينات يجب معايرة معدل التدفق بشكل دوري ( خطأ ≤ ± 5 ٪ ) ، وتجنب حجم العينة الانحراف بسبب عدم دقة معدل التدفق .

نقل السائل بندقية ، حاضنة وغيرها من المعدات يجب أن تكون معتمدة من قبل القياس كل عام لضمان دقة المعلمات .