U-Blot® بفدف مطبوع غشاء

U-Blot ® بفدف مطبوع غشاءبولي ( vinylidene الفلوريد ) ( PVDF ) الأغشية microporous تستخدم لنقل البروتينات من مختلف هلام ركائز . بالمقارنة مع النتروسليلوز الفيلم ، الفيلم لديه أفضل أداء التشغيل .

غشاء مسعور اثنين من أحجام المسام : 0.45 ميكرون و 0.2 ميكرون ، مما يتيح لها ربط البروتينات في مختلف نطاقات الوزن الجزيئي :

• م الفتحة : مناسبة لمعظم البروتينات ، وتوفير حساسية أعلى للكشف .

• م حجم المسام : مناسبة لأنّ البروتينات مع الوزن الجزيئي أقل من 20 ، 000 ، وضمان أفضل امتصاص والاحتفاظ البروتينات الجزيئية الصغيرة . . . . . . .

U-Blot ® بفدف مطبوع غشاء ممتازة مع الاحتفاظ البروتين ، وارتفاع القوة المادية واسعة التوافق الكيميائي ، مما يجعلها خيارا المناعية .

U-Blot ® بفدف مطبوع غشاء

1 . البروتين ماركر كانت معزولة من صفحة الحزب الديمقراطي الصربي هلام .

2 - قطع بعناية ووضع هلام ، هلام في نقل الباردة العازلة لمدة 5-20 دقيقة .

3 . قطع غشاء ورقة فلتر في حجم مناسب من هلام . قبل ترطيب بفدف الفيلم في الميثانول لمدة 20 ثانية ، حتى يصبح أبيض شفاف شفاف رمادي ، ثم ينقع في الماء النقي جدا لمدة 1-2 دقيقة ، وإزالة بقايا كاشف . ثم التوازن في نقل الباردة العازلة لمدة 2-3 دقائق حتى أنها يمكن أن تستخدم .

استخدام تذكير :

لا تجف بعد الفيلم هو الرطب . إذا كان جزء من الغشاء يجف ( تصبح بيضاء مبهمة ) ، يجب أن تكون رطبة مرة أخرى .

4 - تجميع جهاز نقل بدوره ، ونقل المشبك وسادة الاسفنج ورقة فلتر قبل الرطب فيلم قطع جيدة قبل الرطب هلام ورقة فلتر الاسفنج وسادة نقل المشبك ، كل وضع طبقة يجب الحرص على تجنب التجاعيد ، للطي ، أو وجود فقاعات الهواء ( يمكن استخدام أدوات مثل قطع المجلس للضغط برفق فقاعة الهواء ، بحيث كل طبقة قريبة من لصق )

5 - تبدأ عملية نقل وفقا لتوجيهات من نقل الجهاز .

6 - بعد الانتهاء من نقل الطباعة ، طباعة الفيلم مأخوذ و الشطف لفترة وجيزة في المياه النقية لإزالة جل الحطام . مطبوع غشاء يمكن تخزينها في الهواء الجاف ، ويمكن استخدامها على الفور في immunodetection خطوة .

بعض العوامل الرئيسية لنجاح اختبار لطخة غربية ، مثل تركيز البروتين ، السائل المغلق و تركيز الأجسام المضادة ، قد تحتاج إلى أن تكون الأمثل في السيناريوهات التالية .

معيار اختبار المناعة

1 . إذا كان يطبع الفيلم قد جفت ، نقع مرة أخرى في الميثانول لمدة 15 ثانية ، أو حتى لونه أبيض شفاف شفاف رمادي .

2 . شطف يطبع الفيلم مع الماء النقي جدا لمدة 1 دقيقة .

3 - وضع مطبوع غشاء في حل العازلة مغلقة ، مع التحريك بلطف لمدة 1 ساعة .

4 - تمييع الأجسام المضادة في التجاري تمييع ، غسل العازلة أو مغلقة عازلة .

5 - ضعي مطبوع غشاء في تمييع محلول مضاد ، احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة ( أو 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها ) ، مع التحريك بلطف .

6 . استخدام غسل العازلة ®- 20 - بالسطح العازلة ( tbst أو pbst ) يغسل مطبوع الفيلم 3-5 مرات ، كل 5 دقائق .

7 - تمييع الأجسام المضادة في اثنين من مخففات الأجسام المضادة التجارية ، وغسل العازلة أو مغلقة عازلة .

8 - مطبوع غشاء يوضع في تمييع انزيم المسمى المضادة الثانية الحل ، احتضان لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة .

9 - غسل مطبوع غشاء 3-5 مرات مع غسل العازلة لمدة 5 دقائق في كل مرة .

10 - وضع مطبوع غشاء في وعاء نظيف و إضافة كاشف .

11 - احتضان 1-5 دقائق حسب تعليمات الكاشف .

( 1 ) بالنسبة لبرنامج الصحة الإنجابية أو وكالة الأنباء الجزائرية Chemiluminescent كاشف ، مطبوع الفيلم يتعرض للأشعة السينية فيلم أو الحصول على صورة رقمية باستخدام نظام التصوير .

( 2 ) من أجل الكشف عن اللون ، إضافة كاشف وانتظر إشارة تظهر .