في الوقت الحقيقي محلل الخلية المسمى

أجيلنت xCELLigence RTCA SPفي الوقت الحقيقي محلل الخلية المسمىخلية الصحة والسلوك والوظيفة التي تم رصدها بشكل مستمر مع دقة عالية ، والحساسية ، واستنساخ غير المسمى خلية مقاومة . س نموذج يمكن أن تعمل 1 96 لوحة ( e-plate 96 ) التي هي مناسبة جدا لصحة الخلية توصيف الخلايا المناعية بوساطة قتل الفيروس cytopathic الآثار ، السمسة ، التصاق الخلايا ، وظيفة حاجز الخلية ( TEER ) ، الخلية إشارة تنبيغ ( على سبيل المثال ، gpcr ) وغيرها من التطبيقات ذات الصلة .

أجيلنت xCELLigence RTCA SPفي الوقت الحقيقي محلل الخلية المسمىتعمل في مستوى ثاني أكسيد الكربون خلية حاضنة ، محطة العمل يقع خارج حاضنة . في الوقت الحقيقي البيانات الديناميكية يمكن الحصول عليها من خلال الكشف عن نافذة ثانية إلى عدة أيام . RTCA البرمجيات برو يجعل من السهل الحصول على البيانات على الانترنت وغير متصل تحليل البيانات ، والتي تلبي متطلبات ادارة الاغذية والعقاقير 21 CFR الجزء 11 .

خصائص

1 ، xcelligence RTCA SP نموذج يمكن تشغيل لوحة 96 حفرة

2 ، مع حساسية عالية ، والدقة والتكرار في قياس صحة الخلية ، والنشاط ، أو استجابة للعلاج

3 ، وارتفاع القرار الوقت ( من بضع ثوان إلى عدة أيام ) للحصول على البيانات المستمرة ، واستخدام غير الغازية وغير ملحوظ في الوقت الحقيقي مقاومة التكنولوجيا

4 ، بسيطة تدفق العمل من السهل على المستخدم إضافة الخلايا إلى e-plates والبدء في قياس ديناميكية في الظروف الفسيولوجية ، قدر الإمكان ، وتقصير وقت التشغيل اليدوي

5 ، بديهية RTCA البرمجيات برو يمكن تحليل البيانات في الوقت الحقيقي ، وتوليد مجموعة متنوعة من أنواع الرسم تلقائيا حساب نسبة الخلايا القاتلة ، ic50 أو kt50 المعلمات

6 ، RTCA البرمجيات برو يتوافق مع ادارة الاغذية والعقاقير 21 CFR الجزء 11 المتطلبات التنظيمية لضمان موثوقية البيانات الإلكترونية

تقنية

تحليل المعاوقة الخلوية

الكشف عن الخلية هو أداة هامة في البحوث الأساسية والتطبيقية في علم الأحياء . ومع ذلك ، فإن فائدة العديد من أساليب الكشف عن الخلايا قد انخفضت بسبب العوامل التالية : ( 1 ) الحاجة إلى استخدام علامات ، ( 2 ) عدم القدرة على الرصد المستمر ( أي فقط إنتاج البيانات النهائية ) ، و ( 3 ) عدم التوافق مع غيرها من أساليب الكشف متعامد ، ( 4 ) عدم القدرة على توفير قراءات موضوعية / كمية . ومع ذلك ، كل من هذه العيوب يتم التغلب عليها من قبل غير الغازية ، في الوقت الحقيقي الكشف عن خلية مقاومة لا تحتاج إلى علامة .

وحدة وظيفية للكشف عن مقاومة الخلية

وحدة وظيفية خلية مقاومة الكشف هو مجموعة من microelectrodes الذهب تنصهر على السطح السفلي من microtitrant لوحة ( الشكل 1 ) . عندما تكون هذه الأقطاب هي مغمورة في حل موصل ، مثل عازلة أو معيار نسيج الثقافة المتوسطة ، عبر القطب الكهربائي تطبيق الجهد الكهربائي يسبب تدفق الالكترونات من القطب السالب ، من خلال حل الجسم ، ثم تترسب على القطب الموجب ، وبالتالي استكمال الدائرة . لأن هذه الظاهرة تعتمد على التفاعل بين القطب و الحل ، الخلايا الملتصقة الموجودة في واجهة بين القطب و الحل يمكن أن تعوق تدفق الالكترونات . حجم هذه المقاومة يعتمد على عدد الخلايا ، حجم وشكل الخلايا ، ونوعية التصاق الخلايا إلى المصفوفة . الأهم من ذلك ، سطح الذهب microelectrode أو الجهد المطبق ( 22 ملي فولت ) لا تؤثر على صحة الخلية أو السلوك .

معاوقة الكهربائي

الذهب microelectrode biosensor يغطي 70-80 ٪ من المساحة ( اعتمادا على ما إذا كان أو لم يكن هناك مجال للمراقبة ) في كل مسام من اجينت الالكترونية microtitrant لوحة ( e-plates ) . على عكس زوج من أقطاب مبسطة كما هو مبين في الشكل 1 ، الأقطاب الكهربائية في كل حفرة من e-plates ترتبط في " الشريط " على شكل مجموعة متداخلة ( الشكل 2 ) . هذا الترتيب يمكن رصد السكان الخلية في وقت واحد ، وبالتالي يمكن أن تكون حساسة للغاية للكشف عن عدد من الخلايا التي تعلق على لوحة ، حجم / شكل من الخلايا ، التصاق الخلايا إلى مصفوفة الجودة .

في الوقت الحقيقي تحليل منحنى مقاومة

مقاومة تدفق الالكترون الناجم عن خلية التصاق هو مبين من قبل المعلمة غير الأبعاد خلية الأس ( CI ) ، حيث CI = ( مقاومة في الوقت نقطة ن - مقاومة في خلوي ) / اسمي مقاومة القيمة . الشكل 3 مثال عام في الوقت الحقيقي منحنى مقاومة الخلايا أثناء الإعداد والتشغيل .

في الساعات الأولى بعد إضافة الخلايا إلى ثقافة المسام ، مقاومة الزيادات بسرعة . هذا يرجع إلى حقيقة أن الخلايا تسقط من تعليق الدولة ، وترسب على الأقطاب الكهربائية ، وتشكيل التصاق بؤري . إذا كان عدد الخلايا التي أضيفت في البداية كانت صغيرة ، و هناك مساحة حرة في الجزء السفلي من المسام ، الخلية سوف تتكاثر ، مما يؤدي إلى زيادة مطردة في مؤشر الخلية ( CI ) . كاريتاس الدولية القيم تميل إلى أن تكون ثابتة عند الخلايا تصل إلى التقاء الدولة ، مما يشير إلى أن أجزاء من سطح القطب التي يمكن أن تكون على اتصال مع عدد كبير من وسائل الإعلام لم تعد تتغير . عند هذه النقطة ، إضافة إلى موت الخلايا المبرمج محفز يؤدي إلى انخفاض قيمة كاريتاس الدولية إلى الصفر . هذا هو بسبب الخلايا تصبح الجولة و تسقط من الجزء السفلي من الثقافة المسام . على الرغم من أن هذا المثال العام ينطوي على إضافة أدوية إلى التقاء الخلايا ، معاوقة المستندة إلى القياسات هي مرنة جدا ، ويمكن أيضا تقييم معدل ومدى التصاق الخلايا الأولية إلى الأقطاب الكهربائية ، أو معدل ومدى انتشار الخلايا .

العلاقة بين مقاومة الظواهر الخلوية

في الوقت الحقيقي تحليل الخلايا ( RTCA ) يوفر وسيلة لتحديد كمية الخلايا ، معدل الانتشار ، حجم الخلية / التشكل ، ونوعية التصاق الخلايا المصفوفة . لأن هذه الخصائص الفيزيائية هي مزيج من الآلاف من الجينات المختلفة / منتجات البروتين ، RTCA التكنولوجيا يمكن أن تعكس على نطاق واسع حالة صحية وسلوك الخلايا . من وظيفة الحاجز البطانية ، chemotaxis الخيطية pseudopods حركية ، immunocyte بوساطة انحلال الخلايا ، xelligence الصك قد نجحت في تحليل العديد من الظواهر الخلوية . على الرغم من مجموعة واسعة من التطبيقات ، xcelligence الفحص لا تزال قادرة على استكشاف محددة جدا الكيمياء الحيوية والخلوية الظواهر . من خلال ترشيد استخدام تقنيات التحكم و / أو متعامدة ، يمكننا ربط خصائص مقاومة المنحنيات مع خلية معينة / الجزيئية الظاهرة . من أجل الحصول على فهم أفضل لكيفية إنشاء هذه الرابطة ، و تشهد على حساسية وتنوع xcelligence RTCA التكنولوجيا ، يرجى زيارة العديد من التطبيقات المحددة التي تركز هنا .

مبدأ العمل

في الوقت الحقيقي الكشف عن سلوك الخلية تحت الظروف الفسيولوجية

إن xcelligence RTCA أداة تعتمد على مقاومة التكنولوجيا ، والتي يمكن الكشف عن صحة الخلية والسلوك بشكل مستمر تلقائيا في مستوى ثاني أكسيد الكربون خلية ثقافة عدة ثوان إلى عدة أيام . ببساطة عن طريق إضافة الخلايا إلى e-plate ، عدد الخلايا ، معدل انتشار الخلايا ، حجم الخلية ، مورفولوجيا الخلايا ، خلية مصفوفة قوة الالتصاق يمكن رصدها في الوقت الحقيقي .

مواصفات مقاومة الخلية

حساسية عالية في الوقت الحقيقي خلية تحليل المعاوقة يستخدم الذهب الكهربائي تنصهر في الجزء السفلي من e-plate للكشف عن خصائص الخلية غير الغازية . وجود خلايا ملتصقة على الحدود بين القطب و الحل يمنع تدفق الالكترونات . قوة مقاومة يعتمد على عدد وحجم وشكل الخلايا ، فضلا عن قوة الالتصاق بين الخلايا المصفوفة . سطح microgold الكهربائي و الجهد الكهربي ( 22 ام ) لا تؤثر على نشاط الخلية و سلوك الخلية .

بسيطة ومستقرة الكشف عن سير العمل

إن xcelligence RTCA تدفق العمل يمكن أن تساعد المستخدمين على الحصول على حساسية عالية ، وارتفاع تكرار التحليل الكمي للبيانات ، وفي الوقت نفسه يقلل كثيرا من وقت التجهيز اليدوي . في الوقت الحقيقي الكشف عن عدد الخلايا ، معدل انتشار الخلايا ، حجم الخلية ، مورفولوجيا الخلية ، خلية مصفوفة قوة الالتصاق يمكن أن تبدأ فقط بإضافة الخلايا إلى e-plate المسام لوحة . خلية مؤشر ( CI ) يستخدم لوصف مقاومة الخلية الحالية الناجمة عن خلية ملتصقة .

تطبيق .

الكشف عن الخلايا المناعية القاتلة

قتل الخلايا المناعية التقليدية اختبار تستغرق وقتا طويلا وشاقة ، تحتاج إلى استخدام مجموعة متنوعة من التقنيات لجمع البيانات من عدة نقاط في الوقت المناسب . وعلى النقيض من ذلك ، غير المسمى xcelligence RTCA يوفر معلومات شاملة عن قتل الخلايا المناعية و يحاكي النشاط في الجسم الحي . حساسية عالية ، واستنساخ عالية مباشرة في الوقت الحقيقي الكشف عن فعالية الخلايا المناعية القاتلة . هذه بسيطة ، وارتفاع تدفق العمل يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في آلية عمل الخلية ، استمرار قتل و الإرهاق .

الكشف عن تأثير الفيروس

استخدام اجيلنت xcelligence RTCA أداة للكشف عن الفيروس cytopathic تأثير ( CPE ) في الوقت الحقيقي وبدقة ، وتعزيز البحوث الخاصة بك على العلاج المضاد للفيروسات أو تطوير لقاح ، دون الحاجة إلى إجراء اختبار اللوحة تستغرق وقتا طويلا وشاقة . رصد الفيروس التعليم المهني المستمر تلقائيا في غضون دقائق إلى أيام ، والحد بشكل كبير من عبء العمل ، وتجهيز العينات يدويا . الهدف : دراسة حركية انتشار الخلايا ، وتحديد الوقت الأمثل نقطة العدوى الفيروسية في مختلف كثافة الخلية ، وتقييم الفيروس بوساطة cytopathic المرض في سير العمل .

تحليل السمية

الآثار السامة للخلايا من المخدرات أو المركبات التي تم تحديدها من قبل في الوقت الحقيقي رصد انتشار الخلايا ، حجم الخلية أو التشكل ، خلية مصفوفة التصاق قوة . هذا بسيط ، وارتفاع تدفق cytotoxicity التحليل يستخدم لرصد حركية طويلة الأجل استجابة الخلايا . في حالة عدم زيادة عبء العمل ، اتخاذ قرار مستنير حول وقت المعالجة الخلوية ، وتوليد منحنى الاستجابة للجرعة بسهولة في عدة نقاط في الوقت المناسب .

خلية التصاق الكشف

الملايين من خلايا السرطان الأولية سوف تسقط في الدورة الدموية أثناء تكوين الورم ، والمعروفة باسم تعميم الخلايا السرطانية ( CTCs ) . CTCs يمكن إعادة الالتزام ، ونشرها ، ونقلها إلى الأجهزة البعيدة . باستخدام xcelligence RTCA ، حركية التصاق الخلايا المختلفة يمكن رصدها على نحو مستدام ، وتعقيد نقل يمكن أن يكون مفهوما على نحو أفضل . في الوقت الحقيقي تقييم كمي التصاق وتمديد الخلايا دون استخدام وكلاء الفلورسنت أو الأصباغ .

الكشف عن الخلية إشارة تنبيغ

مستقبل مقترن بالبروتين ج ، gpcrكيناز التيروسين( راديو وتلفزيون كوسوفو ) أو هرمون النووية بوساطة تنبيغ الإشارة غالبا ما يؤدي إلى التغيرات البيوكيميائية التي تؤثر على عدد الخلايا الموجودة ، حجم / شكل الخلية ، ودرجة ضيق التفاعل بين الخلايا و سطح المسام . مع xcelligence RTCA ، يمكنك التقاط التغيرات في حجم الخلية ، مورفولوجيا ، ومعدل انتشار الخلايا مع إشارة تنبيغ الأحداث . هذا غير المسمى الرصد المستمر يسمح التقييم الكمي استجابة الخلايا في الدقائق القليلة الأولى و أيام بعد العلاج .

الكشف عن الخلايا الجذعية

دراسة الخلايا الجذعية يساعد الناس على فهم آلية المرض ، ويساعد على تطوير الطب التجديدي ، ويوفر طريقة بديلة لاختبار موثوقية وفعالية الأدوية الجديدة . استخدام xcelligence RTCA للتنبؤ وظيفة من منتجات الخلايا الجذعية وتقييم التغيرات في الخلايا الجذعية الوسيطة ( MSCS ) للتغلب على التحديات في إنتاج منتجات العلاج بالخلايا . مع عدد أقل من الخلايا إلى حد كبير تحسين الكفاءة التحليلية ، باستمرار الكشف عن عدد من الخلايا ، وقوة الالتصاق ، مورفولوجيا التغييرات الشاملة لضمان الاتساق في كل مرحلة .

تحليل وظيفة حاجز الخلية

حاجز الخلية وظيفة توفرها الخلايا البطانية و الخلايا الظهارية التي يمكن أن تتضرر في كثير من الحالات . الخلايا البطانية هي مرتبة على السطح الداخلي من الأوعية الدموية و الأوعية اللمفاوية . الخلايا الظهارية تشكل سطح الجسم بمثابة حاجز لحماية الجسم من الجزيئات الغريبة . المقاومة على أساس xcelligence RTCA هو طريقة حساسة الكمية التي يمكن أن تحل محل الأساليب التقليدية مثل اختبار نفاذية المذاب و transendothelial المقاومة ( TEER ) اختبار للكشف عن حاجز الفشل .